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抗丙型肝炎病毒siRNA分子肝靶向性研究进展
抗丙型肝炎病毒(HCV)siRNA体内使用大障碍在于缺乏稳定、有效、安全的肝靶向转递手段,表现在血浆半衰期短,生物分布广泛,细胞摄取困难及潜在的非靶基因沉默等副反应.siRNA肝靶向修饰可以增加肝细胞摄入量,减少非特异性生物分布,减少用药量,降低副反应,并一定程度增强稳定性.本文分析了非载体类siRNA肝靶向研究现状,并试图提出未来研究的发展方向.
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鳖甲肽脂质体药代动力学及肝靶向分析
目的:制备含DiR碘化物荧光染料的长循环脂质体(DiR-SSL),采用SD大鼠和BALB/c裸鼠进行荧光成像的体内靶向性研究,利用空白SSL包封含5-羧基荧光素(5-FAM)的鳖甲肽(HGRFG-5-FAM,HF)制备HGRFG-5-FAM-SSL(HFL),研究HF及HFL分别给药丁大鼠的药代动力学.方法:采用薄膜分散法制备DiR-SSL及HFL,取2组SD大鼠分别尾静脉注射HF及HFL,其HF质量浓度及剂量一致,于不同时间点采血,利用多功能微孔板检测仪分析HF血药浓度,计算药代动力学参数;将DiR-SSL尾静脉注射于BALB/c裸鼠,分别于1,2,5,7,24 h活体成像,读取荧光强度值;取正常SD大鼠尾静脉注射DiR-SSL,24 h后解剖心、肝、脾、肺、肾于荧光成像系统成像并读取荧光强度值,将肝组织冷冻切片进行激光共聚焦扫描.结果:HF注射到SD大鼠体内,其半衰期(T1/2)仅0.826 h,而HFL在相同剂量下,T1/2和药时曲线下面积(AUC0-∞)分别为HF的16.253,11.899倍;在BALB/c裸鼠活体成像中,荧光主要集中于肝脏位置,随着时间增加荧光强度逐渐减弱;SD大鼠各脏器中的DiR-SSL荧光在肝脏中强,注射24 h后DiR-SSL仍能在肝脏储留.结论:SSL递药系统能显著延长HF在SD大鼠体内的T1/2.SSL递药系统具有肝靶向作用,提示该系统可作为药物载体进行肝靶向递药.
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肝靶向蕨麻素毫微粒的制备工艺研究
蕨麻来源于蔷薇科植物鹅绒委陵菜(蕨麻委陵菜)Potentilla ansterina L.的干燥块根.在广泛的药效学实验基础上,作者筛选和确认了蕨麻抗病毒性肝炎的有效部位,并对其所含的主要化学成分进行了分离鉴定.该有效部位命名为蕨麻素,主要含三萜类成分,具有抗病毒、调节免疫功能、保肝利胆等活性[1,2].其中主要成分命名为蕨麻A素,在蕨麻素中的含量可达到50%以上,为质量评价提供了可准确测定的代表成分.由于蕨麻素在体内为全身分布,肝脏局部血药浓度低.已有研究表明,毫微粒载药系统不仅可使给药量的80%的药物浓集于肝脏[3],并可进入肝细胞.为提高蕨麻素治疗病毒性肝炎的疗效,本研究用乳化聚合法研制了蕨麻素聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒(Juemasu polybutylcyanoacrylate nanoparticles,JMS-PBCA-NP),正交实验法优化了制备工艺.
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西瑞香素半乳糖化脂质体在大鼠体内组织分布的研究
研究西瑞香素半乳糖化脂质体在大鼠体内的组织分布.按剂量10 mg·kg-给予健康SD大鼠单剂量尾静脉注射西瑞香素溶液、西瑞香素普通脂质体、西瑞香素半乳糖化脂质体,分别于给药5,15,30,45,60,120,240,360 min后采集大鼠全血和心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、脑、胸腺组织,采用HPLC测定血浆和各组织中西瑞香素的浓度.对比3组制剂,结果发现在不同时刻单位质量肝脏中西瑞香素的含量均以西瑞香素半乳糖化脂质体组为高;所有时间点西瑞香素半乳糖化脂质体对肝脏的靶向指数DTI值均大于西瑞香素普通脂质体,西瑞香素半乳糖化脂质体在肝组织的AUC0-6和Cmax分别为西瑞香素溶液的2.23,5.22倍.表明西瑞香素半乳糖化脂质体能够在肝脏部位浓集,具有显著的肝脏靶向性.
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乳糖化多聚赖氨酸导向反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒的作用
目的研究乳糖化多聚赖氨酸(Gal-PLL)导向反义寡核苷酸对乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的特异性抑制作用。方法 根据聚合酶链反应(PCR)产物直接测序结果，在HBV U5样序列区合成了一段16聚硫代磷酸反义寡核苷酸，并将其与肝靶向配体Gal-PLL连接，在2.2.15细胞比较，观察了它们对HBV基因表达的影响。结果 通过测序确定了2.2.15细胞中HBV DNA属于HBV表面抗原ayw1亚型，并将此用于反义寡核苷酸的序列设计；经荧光组化分析表明，Gal-PLL对大鼠肝组织有选择性亲和力；Gal-PLL与DNA形成复合物的佳摩尔比为2∶1；在相同实验条件下，硫代磷酸反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为70%和58%，而Gal-PLL硫代磷酸反义寡核苷酸对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为96%和82%，同时培养上清液和细胞中HBV DNA的含量明显下降，无关序列寡核酸无明显效果，寡核苷酸对细胞未产生毒性。结论 肝靶向配体和反义寡核酸的复合物可以通过无唾液酸糖蛋白受体靶入2.2.15细胞内，并对HBV基因表达和复制产生特异性抑制作用。
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靶向超声造影剂促进反义基因转染的体外研究
目的 探讨超声破坏造影剂微泡联合半乳糖化多聚赖氨酸(G-PLL)对基因治疗肝癌的靶向促进作用.方法 将合成的超声造影剂微泡、G-PLL及c-myc反义寡核苷酸(ASODN)耦联物,结合超声辐照作用于表达c-myc基因的人肝癌及人肺癌细胞株进行体外效应研究.观察细胞形态学改变及耦合物与细胞结合情况并检测c-myc基因的表达情况.结果 镜下显示肝癌细胞较肺癌细胞更易于与耦联物结合,多数细胞呈凋亡改变.经超声辐照,耦联物作用后的人肝癌及肺癌细胞c-myc基因表达量均有降低,而G-PLL对肝癌细胞c-myc基因表达有明显抑制作用.结论 超声辐照下,造影剂结合G-PLL及反义基因耦联物可靶向性促进反义基因转染肝癌细胞.
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雌二醇聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒肝脏靶向性研究
目的 观察雌二醇纳米粒(E2-PBCA-NP)在正常肝脏中的靶向性,并比较腹腔给药和静脉给药两种给药途径对E2-PBCA-NP肝脏靶向性的影响.方法 采用放射示踪技术,用125-I标记雌二醇,界面聚合法制备125-I-E2-PBCA-NP,经腹腔及静脉给药,分别于注药后15、30 min、1、2、4、8、12、24 h处死大鼠,取其血、肺、肝、脾、肾、子宫和卵巢作γ计数,并与普通雌二醇组比较.结果 125-I-E2-PBCA-NP和125-I-E2肝摄取分别在注射后15 min后高,与125-I-E2比较125-I-E2-PBCA-NP提高了肝脏、脾脏的放射性强度,降低了子宫及卵巢的放射性强度.腹腔给药及尾静脉给药不影响125-I-E2-PBCA-NP的肝脏靶向性(P＞0.05).结论 E2-PB-CA-NP具有明显的肝脏靶向性.
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半乳糖基化壳聚糖肝靶向性基因转导的体内实验
目的:研究半乳糖基化壳聚糖(Galactosylated chitosan,GC)在狗体内的肝靶向性作用.方法:GC与质粒pEGFP-N1混和制备成纳米微囊复合物,体外转染SMMC-7721细胞.杂种狗术前1 d静脉注射氯化钆(14 mg/kg)以清除Kupffer细胞.将含1 mg质粒的纳米微囊经肝动脉和门静脉注射入动物体内.48 h后取主要脏器组织做冰冻切片,在荧光显微镜下观察绿荧光蛋白表达情况.以裸质粒作为对照.结果:7721细胞中有绿荧光蛋白的表达,体内实验GC组肝组织中有绿荧光蛋白表达,其他脏器组织中仅有微量表达.结论:半乳糖基化壳聚糖在体外有较高的转染率,在大动物体内有肝靶向性作用,肝动脉、门静脉联合给药是基因治疗的一种有效途径.
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脂质体肝靶向递药系统及其在肝脏疾病中的研究进展
脂质体靶向治疗主要分为主动靶向、被动靶向及物理化学靶向.在脂质体肝靶向方面,主动肝靶向脂质体以其专一性逐渐受到关注,可用于肝纤维化、肝炎等多种肝脏疾病,尤其对于慢性肝脏疾病.同时,粒径可控制脂质体的被动肝靶向,而物理化学肝靶向脂质体对治疗肝癌有一定优势.本文主要以近年来国内外的文献为依据进行了阐述和分析.
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肝靶向十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒抗乙肝病毒的研究
目的:探讨肝靶向十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒抗HBV的作用.方法:以半乳糖苷为载体,构建十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒(PLN-LAGS),将其靶向导入2.2.15细胞,共同温育10 d后,观察对细胞的毒性作用;同时将LAP-GSLN尾静脉注入小鼠体内,R P-H P L C测定拉米呋定(lamivudine,LA)在血清、肝、肾、肺及脾中的分布,用ELISA和荧光定量PCR检测多个时期培养上清中HBsAg,HBeAg和HBV DNA.结果:LAP-GSLN在肝脏中具有靶向性,LAP-GSLN组肝脏的含药量为LA组的3.3倍;导向后4d出现对HBV-DNA的抑制,在药物浓度10.0 m/L时LAP-GSLN组HBV DNA＜1.11×107拷贝/L,而单纯LA组则为5.06×109拷贝/L;6 d出现对HBsAg,HBeAg抑制,在药物浓度0.01mg/L时,LAP-GSLN,LA组对HBsAg,HBeAg抑制率分别为52.9%,53.9%;32.2%,31.1%;在药物浓度10.0 mg/L时,LAP-GSLN,LA组对HBsAg,HBeAg抑制率分别为67.2%,69.0%;45.1%,41.0%.未发现对2.2.15细胞的毒性作用.结论:小剂量半乳糖介导十六酸拉米呋定脂质纳米粒能快速有效的抑制HBV抗原表达和DNA复制.
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载多柔比星肝靶向纳米胶束制备及抗肝癌研究
目的 肝癌是威胁人类生命和健康的恶性肿瘤之一,手术和化疗是主要的治疗方法.本研究以甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)为配体,以透明质酸(hyaluronic acid,HA)为载体材料,合成GA修饰HA聚合物,以多柔比星(adriamycin,ADM)为模型药物,制备载多柔比星纳米胶束(ADM/HA-GA),分析其理化性质和体内外抗肿瘤活性.方法 通过有机化学方法将GA与HA交联,合成HA-GA耦合物,采用超声波分散法制备ADM/HA-GA纳米胶束.通过动态激光散射仪测定载药纳米粒的粒径和Zeta电位,透射电镜观察其形态;紫外分光光度计检测ADM/HA-GA纳米胶束的载药量、包封率和ADM体外释放规律.采用MTT法检测ADM/HA-GA对人肝癌细胞(HepG2)的生长抑制率;细胞摄入实验观察HepG2细胞对ADM/HA-GA的摄入情况;抑瘤实验分析ADM/HA-GA的体内抗肿瘤活性.结果 HA-GA纳米胶束呈球形,粒径为157～236 nm,分散度良好,Zeta电位为-19.3～-13.5 mV.载药纳米胶束释药量随着GA取代度的增加而降低.细胞摄入实验显示,ADM/HA-GA能被HepG2细胞有效摄入.体内外抗肿瘤实验显示,ADM/HA-GA比多柔比星的抗肝癌效果更强.结论 HA-GA可以作为药物载体,实现药物肝癌靶向递送,提高抗肝癌治疗效果.
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紫杉醇长循环肝靶向脂质体的制备
目的:制备紫杉醇长循环肝靶向脂质体(pac-GLs),并对制备的脂质体的性质进行评价.方法:用薄膜水化-高压均质法制备紫杉醇长循环肝靶向脂质体,纳米粒度测定仪测定其粒径,高效液相法测定其包封率.结果:制备的紫杉醇长循环肝靶向脂质体中的药物浓度为(1.00±0.10)mg/ml,包封率为(94±3)%.结论:本研究制备的紫杉醇长循环肝靶向脂质体包封率较高,质量可控,重复性好.
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脂类物质的肝靶向研究
脂类是人体的重要营养素.脂类代谢紊乱能够引起胆固醇结石、脂肪肝、动脉硬化等常见疾病,造成脂类代谢紊乱的因素有很多.脂肪酸胆酸偶合物(FABAC)和胆固醇半乳糖偶合物(CGC)是新合成的两类肝靶向化合物.尽管脂肪酸胆酸偶合物和胆固醇半乳糖偶合物的作用机制尚不清楚,但在几种动物模型中均对脂类代谢产生重要的影响.这两类化合物在治疗高脂血症方面具有应用前景.
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肝靶向给药系统的研究
肝细胞直接与血液相通,是药物给药系统理想的靶部位.欲实现肝脏不同细胞靶向,可通过载体上的相应配体与肝实质细胞膜上的无唾液酸糖蛋白受体或非实质细胞膜上的甘露糖受体、清除受体等的特异相互作用来达到;也可通过脂质体、毫微粒、乳剂、脂蛋白等载体的被动靶向作用而实现器官靶向.本文对以上各种途径进行,旨在对治疗肝脏疾病提供参考.
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去甲斑蝥素-半乳糖衍生物的合成与抗癌活性
设计并合成了肝靶向抗癌前药去甲斑蝥素-半乳糖(NCTD-Gal)偶联物.以去甲斑蝥素为原料,经氨基酸修饰后,再通过酰化、氢解、糖苷化和脱乙酰基反应合成去甲斑蝥素-半乳糖衍生物.合成了7个新β-O-糖苷化合物,结构通过IR、 MS、 1H NMR和元素分析确证.对产物4a进行了初步小鼠体内抗肿瘤实验,结果显示,4a中、高剂量组抑瘤率明显高于NCTD组,表明半乳糖苷化对NCTD抗癌作用有一定提高.
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大豆糖苷修饰阳离子脂质体的体外肝细胞靶向性
目的研究肝靶向物质大豆糖苷(soybean-derived sterylglucoside,SG)的加入对阳离子脂质体肝细胞靶向性的影响.方法以荧光素钠(FS)为模型药物,采用HepG2 2.2.15细胞模型和SD雄性大鼠,检测SG,SG/Brij-35(卞泽-35)和SG/PEG-DSPE(polyethylene glycol-distearoylphosphatidylethanolamine)修饰的阳离子脂质体的物理化学性质,在细胞培养水平和离体肝脏水平考察阳离子脂质体的转染和肝细胞选择性.结果未修饰以及SG,SG/Brij-35和SG/PEG-DSPE修饰的FS阳离子脂质体在中性溶液中的包封率分别为91.74%,88.46%,89.70%和83.12%,粒径分别为124.4,113.7,110.8和93.0 rim,空白脂质体在溶液中表面电荷为正.细胞培养和肝脏灌流结果说明,阳离子脂质体的转染率显著高于中性脂质体,SG单独修饰后的阳离子脂质体的细胞转染率较未修饰有显著提高,SG/Brij-35修饰的阳离子脂质体则表现出肝实质细胞选择性.结论阳离子脂质体可以促进FS进入肝脏细胞,具有较高的肝细胞摄取率,而SG/Brij-35的修饰可以提高脂质体的肝细胞选择性.
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齐多夫定棕榈酸酯半乳糖化脂质体在小鼠体内的分布
肝实质细胞作为人类免疫缺陷病毒的贮库,与病毒不断地向外周循环扩散有关.本文制备了含自制[(2-乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸胆固醇酯([(2-lactoylamido) ethylamino] formic acid cholesterol ester, CH-ED-LA)为"肝自导向"辅料的齐多夫定棕榈酸酯(azidothymidine palmitate, AZTP)半乳糖化脂质体(GalLs), 并对齐多夫定棕榈酸酯半乳糖化脂质体在小鼠体内的分布进行了研究.采用乙醇注入-超声分散法制备了以下4种脂质体, 脂质构成分别为:大豆磷脂(SPC)/胆固醇(CH)/CH-ED-LA(80:10:10, 10% GalLs), SPC/CH/CH-ED-LA(80:15:5, 5% GalLs), SPC/CH/CH-ED-LA(80:17:3, 3% GalLs)和SPC/CH(80:20, CL), 测得各脂质体的包封率均大于95%,平均粒径均小于100 nm; CH-ED-LA的加入量对AZTP脂质体的膜电位和药物含量均无影响.小鼠尾静脉注射齐多夫定溶液剂15.85 mg·kg-1、齐多夫定棕榈酸酯普通脂质体及半乳糖化脂质体各30 mg·kg-1, HPLC法测定药物在小鼠体内各组织中的分布.各脂质体组的药物半衰期较溶液组均有显著增加(P＜0.05);与齐多夫定溶液剂相比,齐多夫定棕榈酸酯普通脂质体和CH-ED-LA分别占脂质总量3%, 5%, 10%(mol/mol)的半乳糖化脂质体的药物肝靶向摄取率(re)分别为1.32和1.48, 2.13和1.50.结果表明含新糖脂CH-ED-LA的脂质体可显著改善齐多夫定棕榈酸酯的肝靶向性,可望成为一种有用的靶向肝的药物传递载体.
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N-乙酰半乳糖胺修饰的肝靶向香豆素-6脂质体制备及评价
目的:本研究采用酶促法构建N-乙酰半乳糖胺(N-acetylgalactosamine,GalNAc)修饰的脂质体作为荧光标记物-香豆素-6的载体,对其修饰的脂质体理化性质进行评价.方法:采用酶催化法偶联合成GalNAc-C8-Chol,利用MS,NMR对其结构进行表征,并以此作为导向性材料,采用薄膜分散-挤出法制备载香豆素-6的GalNAc修饰肝靶向脂质体(NGAL-LP),并对脂质体的包封率、粒径、Zeta电位、体外释放度及RCA120体外结合效率等性质进行了考察.结果:合成的GalNAc-C8-Chol经MS,NMR鉴定为目标产物.与普通香豆素-6脂质体(LP)相比,本研究所制备的主动肝靶向脂质体(NGAL-LP)的粒径、Zeta电位、包封率、体外释放等理化性质无显著差异,包封率≥98％,平均粒径为(86.74±1.7) nm,平均Zeta电位为(-51.47±0.9) mV.体外释放结果表明,36 h内香豆素-6脂质体在PBS和血浆中的累积释放率＜8％.RCA120凝集实验表明,只有GalNAc-C8-Chol修饰的脂质体可经RCA120诱导产生凝集效应.结论:采用酶促法成功构建了GalNAc修饰的香豆素-6肝靶向脂质体,以期望显著提高体内肝肿瘤的靶向治疗效果.
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去甲斑蝥素-N-乳糖酰壳聚糖/丝素蛋白微球在兔体内的抗肿瘤作用
目的:观察去甲斑蝥素-N-乳糖酰壳聚糖/丝素蛋白微球(norcantharidin-N-chitosan-silk fibroinmicrospheres,NCTD-N-CS/SF-MS)其对兔VX2肝移植瘤的化疗栓塞术后抑瘤作用.方法:取经超声引导下于肝脏左叶植入VX2肿瘤组织块建模成功的新西兰大白兔30只并随机分为5组,股动脉穿刺插管后经肝动脉分别给予载药微球(A组)、空白微球(B组)、空白微球+ NCTD溶液(C组)、NCTD溶液(D组)及生理盐水(对照),术后通过血液分析、抑瘤作用、影像学检查等方式评价治疗效果.结果:各治疗组动物术后均有不同程度白细胞数量增多及肝功能的一过性损害;A组较余各组作用更强,抑瘤率高达85.01％,具有统计学意义(P＜0.05),肿瘤体积远小于其他各组,肿瘤坏死率达56.78％,高于B组的49.63％及C组52.23％.肝动脉造影示栓塞彻底,仅少量侧支血管形成.A组平均生存时间长,达到36.25 d,生命延长率达54.25％.结论:NCTD-N-CS/SF-MS可致肿瘤坏死,抑瘤作用明显(P＜0.05).
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肝靶向核苷类逆转录酶抑制剂HepDirect前药的研究进展
靶向给药能够增加局部药物的浓度,提高疗效,减少不良反应.目前实现药物靶向性的重要策略是使用靶向载体,如抗体、肽、天然或人工合成的聚合物、糖或肽标记的毫微粒和脂质体等.但这些方法有很多不足,如难以通过内皮细胞到达血管外靶点、生产成本高、共轭物诱导免疫原反应、载药量有限及给药方式不便等.Erion等人发现了一类新的磷酸酯和膦酸酯前药,取名为HepDirect前药.该类前药可以特异性地被肝细胞CYP450同工酶CYP3A4酶氧化,释放活性形式的核苷酸或核苷膦酸.经动物和人体试验,HepDirect前药具有明显的肝靶向性,未发现与副产物相关的毒性.文中通过查阅近几年的相关文献,对核苷类HepDirect前药的原理、稳定性、副产物、代表药物等进行综述.
关键词： 核苷类似物 HepDirect前药 肝靶向
