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N-乙酰半乳糖胺修饰的肝靶向香豆素-6脂质体制备及评价
目的:本研究采用酶促法构建N-乙酰半乳糖胺(N-acetylgalactosamine,GalNAc)修饰的脂质体作为荧光标记物-香豆素-6的载体,对其修饰的脂质体理化性质进行评价.方法:采用酶催化法偶联合成GalNAc-C8-Chol,利用MS,NMR对其结构进行表征,并以此作为导向性材料,采用薄膜分散-挤出法制备载香豆素-6的GalNAc修饰肝靶向脂质体(NGAL-LP),并对脂质体的包封率、粒径、Zeta电位、体外释放度及RCA120体外结合效率等性质进行了考察.结果:合成的GalNAc-C8-Chol经MS,NMR鉴定为目标产物.与普通香豆素-6脂质体(LP)相比,本研究所制备的主动肝靶向脂质体(NGAL-LP)的粒径、Zeta电位、包封率、体外释放等理化性质无显著差异,包封率≥98％,平均粒径为(86.74±1.7) nm,平均Zeta电位为(-51.47±0.9) mV.体外释放结果表明,36 h内香豆素-6脂质体在PBS和血浆中的累积释放率＜8％.RCA120凝集实验表明,只有GalNAc-C8-Chol修饰的脂质体可经RCA120诱导产生凝集效应.结论:采用酶促法成功构建了GalNAc修饰的香豆素-6肝靶向脂质体,以期望显著提高体内肝肿瘤的靶向治疗效果.
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转铁蛋白修饰香豆素-6脂质体的制备与评价
目的:考察转铁蛋白(Tf)修饰香豆素-6脂质体的佳工艺并验证修饰后的靶向递药效果.方法:采用薄膜分散法制备香豆素-6脂质体;通过DSPE-PEG2000-COOH上的活性羧基末端与Tf上的氨基连接实现Tf表面修饰香豆素-6脂质体;测定Tf修饰香豆素-6脂质体的粒径、电位、包封率等药剂学性质及转铁蛋白结合效率,并比较反应pH和反应时间对结合效率的影响;通过流式细胞实验比较人肝癌细胞HepG2对修饰前后香豆素-6脂质体的摄取情况.结果:Tf修饰香豆素-6脂质体的平均粒径为(105.4±0.35) nm,Zeta电位为(-10.8 ±2.06)mV,平均包封率为(95.73±0.13)％,佳工艺下的蛋白结合效率为95.41 μgTf·μmol-1磷脂.与未修饰的脂质体相比,肝癌细胞HepG2对Tf修饰香豆素-6脂质体的摄取显著增加.结论:所优选的修饰工艺适用于Tf修饰靶向脂质体的制备.
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超滤法测定水不溶性药物香豆素-6 PLGA纳米粒的包封率
目的:建立超滤法测定水不溶性药物香豆素-6纳米粒包封率的方法.方法:采用HPLC法测定香豆素-6,色谱柱:Merck RP-18柱(15 cm ×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(95∶5),检测波长:448 nm.选用不同溶剂稀释纳米混悬液,超滤法分离纳米粒和游离药物,辅以扫描电镜法观察溶剂对纳米粒表面形态的影响,以及游离药物与纳米粒的分离效果,建立测定香豆素-6纳米粒包封率的方法.结果:建立了香豆素正的分析方法并应用于包封率的测定.选用1％ TPGs稀释纳米混悬液,通过超滤法可以有效分离游离香豆素-6,游离药物测定的回收率为98.47％ ～99.38％.结论:以1％ TPGs为溶媒稀释纳米混悬液,采用超滤法可以有效、准确地测定香豆素-6纳米粒包封率.
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高速离心法测定包载香豆素-6荧光探针聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒的包封率
目的 建立高速离心法测定香豆素-6纳米粒包封率的测定方法.方法 采用不同溶剂稀释纳米混悬液,以高速离心法分离纳米粒和游离药物,辅以扫描电镜法观察游离药物与纳米粒的分离效果,以及溶剂对纳米粒的影响,建立HPLC测定香豆素-6含量的方法.结果 在选定的色谱条件下,香豆素-6分离度良好,进样量在0.8 ～100 ng内进样量与峰面积呈现良好的线性关系(r =1.000 0),精密度RSD(％)值小于1.28％.采用1％维生素E聚乙二醇琥珀酸酯稀释纳米混悬液,通过高速离心法可以有效分离游离香豆素-6,游离药物的回收率测定结果为99.25％～103.00％之间.对同一批香豆素-6纳米粒包封率的测定结果为88.74％,RSD值为0.65％.结论采用1％维生素E聚乙二醇琥珀酸酯为溶媒稀释纳米混悬液,通过高速离心法可以有效测定香豆素-6 纳米粒包封率,同时具有操作简单、快速和经济的特点.
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香豆素-6纳米探针的制备及其眼部给药适应性评价
采用乳化-溶剂挥发法,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物为载体,制备载荧光物质香豆素-6(1)的纳米探针.所得制品平均粒径为(205.3±3.6) nm,ξ电位为(-16.79±1.42)mV,包封率为(61.9±2.4)％.家兔左、右眼分别给予1纳米探针及1水溶液,0.25 h后纳米探针组房水中1的浓度为(139.52± 13.09) ng/ml,水溶液组中未检测到药物.以家兔离体角膜和半透膜为屏障的体外透过试验结果显示,该纳米探针在人工泪液中累积释放率均低于1.6％,提示角膜途径并非1进入房水的主要途径.家兔眼部刺激性结果显示,所制备的纳米探针在给药部位未产生明显的组织损伤.
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包载荧光探针香豆素-6的pH敏感型聚合物胶束的制备与评价
制备了含腙键的pH敏感型嵌段共聚物聚乙二醇单甲醚-聚乳酸(mPEG-HZ-PLA),采用酸碱滴定法测定其pKa值,并用芘荧光探针法测定该共聚物的临界胶束浓度(CMC).用薄膜分散-超声法制备了负载香豆素-6(C6)的聚合物胶束,并对胶束的理化性质进行表征,同时以不含腙键的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸(mPEG-PLA)为对照,考察载C6的mPEG-HZ-PLA胶束在不同pH条件下的释放行为.后,考察了肿瘤细胞SMCC-7721对载C6的mPEG-HZ-PLA胶束的摄取情况.结果表明,mPEG-HZ-PLA的pKa值为6.25,CMC为0.78×10-3 g/L;2种载药胶束呈球形且分布均匀,平均粒径均约为1 00 nm,包封率均大于85％.不同pH值介质对载药胶束的体外释放行为有显著影响.在pH 5.0介质中mPEG-HZ-PLA胶束释放速率加快,24 h的累积释放率达73.6％,说明mPEG-HZ-PLA聚合物载体材料具有较好的pH敏感释药行为.mPEG-HZ-PLA胶束的细胞摄取结果表明,随着时间的推移,肿瘤细胞对其的摄取逐渐增强,提示该胶束作为抗肿瘤药物的靶向传递系统具有较好的应用前景.
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香豆素-6传递体的变形性与体外透皮性质的相关性研究
目的：研究香豆素-6传递体的变形性与体外透皮性质的相关性。方法制备4种不同处方的香豆素-6传递体,采用变形指数 D,校正的变形指数 Dcor ,挤出前后粒径变化 RD 3种指标,评价传递体的变形性；以大鼠皮肤作为模型,比较4种处方的药物累积透皮量。结果评价指数 D 和 Dcor 显示的变形性顺序为脱氧胆酸钠(TF-SDC)>胆酸钠(TF-SC)>空白(Lipo-some)>司盘-80(TF-SP80),评价指数 RD 显示的变形性顺序为 TF-SP80>TF-SDC>TF-SC>Liposome；12 h 累积透皮量的顺序为 TF-SDC>TF-SC>Liposome>TF-SP80。结论香豆素-6传递体的3种变形性评价指标中与其体外累积透皮量之间以评价指数 D 和 Dcor 的相关性为佳。
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粒径差异化的纳米脂质载体的制备和表征
利用特色化的中心复合设计,以香豆素-6为模型药物,通过控制特定的因素和指标,制备粒径不同而其他性质相同的纳米脂质载体(NLCs),并对其形态、Zeta电位和包封率等理化性质进行研究.通过体外稳定性实验考察NLCs在K-R液和PBS缓冲液中的稳定性,同时以透析法研究制剂的体外释药行为特性.采用MTT法研究空白NLCs和载药NLCs的细胞毒性,活体成像技术考察NLCs在小鼠胃肠道中的滞留时间.结果显示:制备所得的粒径分别为100,200及300 nm的香豆素-6纳米脂质载体,分散性良好,在K-R液和PBS缓冲液中可以稳定存在,并且体外24h香豆素-6的累积释放量均不超过总量的7％.MTT实验表明:空白NLCs和载药NLCs对Caco-2毒性较小.小鼠肠内滞留试验显示:NLCs在灌胃给药6h后仍然能够在胃肠道中检测到.因此,制备得到的不同粒径NLCs可以作为模型制剂,用于细胞水平和动物水平上研究NLCs粒径对口服吸收的影响.
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包载荧光探针香豆素-6的PLGA纳米粒的制备
目的 以生物可降解材料聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为材料,制备包载荧光探针香豆素-6纳米粒,并进行处方优化.方法 采用乳化-溶剂挥发法制备香豆素-6-PLGA纳米粒,以利用率和包封率为考察指标,正交试验对处方进行优化.结果 制得香豆素-6纳米粒的包封率为51.6％,利用率为81.9％,平均粒径135nm,香豆素-6体外72 h泄漏率低于2％.结论 香豆素-6 PLGA纳米粒制备工艺简便可行,香豆素-6可作为荧光探针,用于纳米粒的动物体内示踪及靶向性研究.
关键词： 香豆素-6 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 纳米粒 处方优化 -
NGR修饰的香豆素-6隐形脂质体的制备及其体外细胞摄取性质
目的:应用NGR导向磷脂化合物修饰香豆素-6隐形脂质体以构建肿瘤新生血管靶向载体.方法:合成NGR导向磷脂化合物并进行了表征.采用薄膜法制备了不同比例NGR修饰的香豆素-6隐形脂质体,以包封率和泄漏率为指标,考察其稳定性;以人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC,阳性细胞,CD13高表达)为靶细胞,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜对载体体外细胞摄取性质进行了分析.结果:制得的不同比例NGR修饰的香豆素-6隐形脂质体的包封率均＞90.0％,12 h的体外累积泄漏率＜9.0％.NGR修饰后的香豆素-6隐形脂质体在HUVEC中的摄取率明显高于未经修饰的隐形脂质体,且以0.64％(摩尔比)的用量摄取效果好,而人冠状动脉内皮细胞(HCAEC,阴性细胞,CD13无表达)对两者的摄取没有明显差异.激光共聚焦观察表明,脂质体摄取入胞后,香豆素-6主要分布在细胞质中.结论:NGR修饰的隐形脂质体能够实现血管内皮细胞靶向,且用量以0.64％摩尔比为佳.
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有机溶剂对乳化-溶剂挥发法制备PLGA纳米粒的影响
目的 以生物可降解材料聚（乳酸-羟基乙酸）共聚物(PLGA)为载体,采用乳化-溶剂挥发法制备包载荧光标记物香豆素-6的纳米粒,考察有机溶剂组成对纳米粒制备的影响.方法 选用不同配比的二氯甲烷与乙酸乙酯混合溶剂作为有机相制备香豆素-6-PLGA纳米粒,测定纳米粒粒径与包封率.结果 纳米粒粒径随着乙酸乙酯比例增加而减小,包封率随着二氯甲烷比例增加而递增.二氯甲烷与乙酸乙酯体积比为70∶30时,制得纳米粒的平均粒径为128.7 nm,包封率为35.9％.结论 有机溶剂的物理性质对乳化-溶剂挥发法制备PLGA纳米粒的粒径与包封率的影响有统计学意义.采用二氯甲烷与乙酸乙酯体积比为70∶30的混合有机溶剂制得的香豆素-6纳米粒粒度分布较窄,包封率较高.
关键词： 聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物 纳米粒 香豆素-6 乳化-溶剂挥发法 -
白血病NB4细胞对白蛋白纳米粒的摄取和载二氢丹参酮Ⅰ白蛋白纳米粒的抗肿瘤活性研究
目的 研究白血病NB4细胞对白蛋白纳米粒的摄取行为,探讨其靶向给药白血病细胞的可行性.方法 以香豆素-6示踪白蛋白纳米粒,采用激光共聚焦显微镜与流式细胞术法考察人急性早幼粒白血病NB4细胞对纳米粒的摄取行为,进而以MTr比色法评价载二氢丹参酮Ⅰ白蛋白纳米粒对细胞的增殖抑制作用.结果 与游离药物香豆素-6、二氢丹参酮Ⅰ相比,白蛋白纳米粒可显著增加药物细胞对药物的摄取,增强其对NB4细胞的增殖抑制作用.结论 白蛋白纳米粒对NB4细胞具有靶向性,有望成为白血病靶向给药的新型载体.
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PCM和TAT双修饰脂质体的制备及心肌靶向性的初步评价
目的 研究心肌特异性靶向肽PCM和穿膜肽TAT双修饰的载荧光探针香豆素-6脂质体的制备工艺,并初步考察其心肌靶向性.方法 采用薄膜分散-超声法,以PCM和TAT为靶头,制备以大豆磷脂、胆固醇、DSPE-mPEG2000为载体材料的载香豆素-6的双修饰脂质体;优化香豆素-6用量、靶头连接方法及靶头用量,以形态、粒径分布、电位、包封率及体外稳定性对脂质体进行表征;考察心肌细胞H9C2对双修饰脂质体的摄取能力,表征其心肌靶向性.结果 PCM和TAT通过插入法连接,当PCM的用量为脂质的3％、TAT的用量为脂质的1％、香豆素-6的用量为20 μg时,所制得的双修饰脂质体的形态圆整,粒径分布为115.7 ±2.91 nm,Zeta电位为-13.1 ±1.81 mV,包封率为83.2％±3.1％,具有良好的体外稳定性,双修饰脂质体的心肌细胞摄取率明显高于未修饰和单修饰的脂质体.结论 双修饰脂质体的制备工艺简单,PCM和TAT双修饰可提高脂质体的心肌细胞靶向性.
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脒修饰的包载荧光探针香豆素-6脂质体的制备
目的 研究3,5-二-十五烷氧基苯甲脒(DBH)修饰的香豆素-6脂质体的制备工艺,并初步考察该脂质体的体外释放性能和肾小球靶向性.方法 首先合成DBH.再以其为配基,胆固醇、大豆磷脂为载体材料,采用薄膜分散-超声法制备脒修饰的载香豆素-6荧光探针脂质体,考察其粒径分布、Zeta电位、包封率及体外累积释药率.结果 脒基修饰的香豆素-6脂质体形态圆整,粒径分布为120.7 ±2.4 nm,Zeta电位为12.6±1.6 mV,包封率为99.7％±1.8％,体外的48 h累积释药量小于2％.结论 脒基修饰的香豆素-6脂质体的制备工艺简便易操作,包封率高,性质稳定.
