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超声造影剂及超声辐照对TIMP-1 siRNA在肝纤维化大鼠肝组织中表达的影响
目的 观测超声造影剂及超声辐照对TIMP-1 siRNA质粒转染肝纤维化大鼠肝组织内TIMP-1基因表达的影响.方法 采用二甲基亚硝胺(DMN)方法建立大鼠肝纤维化模型,72只造模大鼠在第6周随机均分成3组,质粒组(P 组)、质粒+造影剂及超声照射组(P+U组)、对照组.2 d、6 d及12 d后各组分别随机取8只处死、取肝、肾、肺、脑、心肌组织快速冷冻切片,荧光显微镜下观察各组织内TIMP-1 siRNA荧光表达;FQ-PCR测定肝组织TIMP-1 mRNA表达.结果 2 d后,P组肝、肾、肺、脑、心肌组织内均有少量TIMP-1 siRNA绿色荧光表达,组间无显著差异,P＞0.05;P+U组肝组织内TIMP-1 siRNA荧光表达明显增强,较其它组织差异显著,P＜0.001.P组及P+U组肝组织TIMP-1 mRNA表达量均较对照组明显降低,P＜0.001;P+U 组降低较P 组显著,P＜0.001;P+U组6 d时TIMP-1 mRNA表达量低,后依次为48 h、12 d.结论 TIMP-1 siRNA对肝纤维化大鼠TIMP-1基因表达抑制作用明显;超声造影剂及超声辐照能够明显增高基因转染效率,并有将基因载体靶向定位于肝组织释放的作用.
关键词： 超声造影剂 超声照射 肝纤维化 基质金属蛋白酶抑制因子-1 RNA干扰 -
靶向超声造影剂促进反义基因转染的体外研究
目的 探讨超声破坏造影剂微泡联合半乳糖化多聚赖氨酸(G-PLL)对基因治疗肝癌的靶向促进作用.方法 将合成的超声造影剂微泡、G-PLL及c-myc反义寡核苷酸(ASODN)耦联物,结合超声辐照作用于表达c-myc基因的人肝癌及人肺癌细胞株进行体外效应研究.观察细胞形态学改变及耦合物与细胞结合情况并检测c-myc基因的表达情况.结果 镜下显示肝癌细胞较肺癌细胞更易于与耦联物结合,多数细胞呈凋亡改变.经超声辐照,耦联物作用后的人肝癌及肺癌细胞c-myc基因表达量均有降低,而G-PLL对肝癌细胞c-myc基因表达有明显抑制作用.结论 超声辐照下,造影剂结合G-PLL及反义基因耦联物可靶向性促进反义基因转染肝癌细胞.
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超声造影剂在治疗方面应用研究的进展
1968年Gramiak等［1］首次报道了超声造影剂的应用，此后随着超声造影剂和显像技术的发展，其在诊断方面的应用日益广泛。尽管超声造影剂初用于诊断，但近来的研究表明其在治疗方面有很大的潜力。 1.增强治疗性超声的溶栓作用 体内外实验［2～3］表明：治疗性超声(US)通过空化效应能加速尿激酶(UK)等向血栓内渗透，增强其生物活性。而超声造影剂可增强超声的这种溶栓作用。 Tachibana等［4］用170kHz，0.5W/cm2的超声照射注入UK的离体血栓，并加入Albunex，孵育60min后测量血栓重量减少的百分率。结果表明：单用UK的溶栓率为26.6±4.8%，UK＋US为33.3±5.8%，UK＋US＋Albunex为51.3±7.7%，Albunex明显增强了超声的助溶作用。这是因为Albunex微泡能降低空化阈值，增加空化量，促进空化效应。
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超声辐照携TIMP-1 siRNA微泡对大鼠肝纤维化的影响
目的 探讨携TIMP-1 siRNA的造影剂微泡在超声辐照条件下对肝纤维化大鼠组织学改变的影响.方法 二甲基亚硝胺建立肝纤维化模型,6周后分组并静脉质粒注射,2天后观察肝、肾、肺、脑、心肌组织内基因荧光表达;12天后检测肝组织内TIMP-1 mRNA、蛋白表达及胶原纤维变化.结果 2天后,超声照射微泡组基因荧光表达明显增强,较其他组织差异显著,P＜0.001;12天后,其TIMP-1 mRNA及蛋白表达、胶原含量均较单质粒组及对照组减低,P＜0.001.结论 超声辐照携TIMP-1 siRNA超声微泡有将目的基因定位释放作用,TIMP-1 siRNA转染肝纤维化大鼠可改善肝纤维化结构,为肝纤维化的基因治疗提供了新的思路及方法.
关键词： 超声造影剂 超声照射 肝纤维化 基质金属蛋白酶抑制因子-1 RNA干扰 -
聚焦超声对SMMC7721肝癌细胞体外侵袭能力的影响及机制
本研究目的是了解聚焦超声能否通过各种效应降低照射后残余肝癌细胞的侵袭转移能力及其机制.材料和方法1.剂量-效应关系:用不同剂量聚焦超声照射SMMC7721细胞,绘制剂量-效应关系曲线.
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造影剂微泡介导WT-p53基因靶向治疗肝癌的实验研究
目的 评估超声造影剂介导WT-p53基因靶向治疗肝癌的疗效,以寻找一种无创、高效、无毒的靶向基因导入技术.方法 首先制备裸鼠肝癌皮下模型,然后将48只荷瘤裸鼠分成4组,第1组注入p53质粒;第2组注入p53质粒后超声辐照;第3组注射造影剂+p53质粒;第4组瘤体内注入造影剂+p53质粒后,超声辐照瘤体.利用RT-PCR、Western blot检测p53基因和蛋白在组织中的表达情况.结果 RT-PCR检测各实验组细胞内均有p53 mRNA的表达.注入超声造影剂与未注入相比,经超声照射,第4组WT-p53在肝癌细胞中的表达明显高于其他对照组(P＜0.05).结论 超声辐照下,造影剂结合的含WT-p53基因质粒可靶向性促进WT-p53基因在肝癌细胞中的表达.
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体外低频低强度超声照射对兔颈段脊髓的影响
目的 观察体外低频低强度超声长期照射对兔颈段脊髓传导功能和组织结构的影响.方法 健康新西兰家兔12只,按照超声辐照强度分成A组(0.5 W/cm2,10 min/d)和B组(1 W/cm2,10 min/d),每组各6只,分别比较超声照射20 d前后两组动物皮层体感诱发电位(CSEP).超声照射20 d后处死动物,取照射部位下方颈段脊髓组织在光镜和电镜下观察组织形态结构.结果 超声照射前家兔前肢和后肢CSEP的N1波和P1波潜伏期及振幅与超声照射后比较差异无统计学意义,照射后颈段脊髓组织在光镜下观察未见明显病理改变,电镜观察超微结构正常.结论 20 kHz,声强1 W/cm2以下的体外低频低强度超声长期照射动物颈部不会对其脊髓产生明显的不良影响.
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超声介导质粒DNA原位转入大鼠颈动脉
尽管病毒载体在将外源性基因转染进入血管方面是一种有效的手段,但在用于人类基因治疗时仍存在安全性问题.本次研究的目的是检验一种新的非病毒性转载方法,即通过高频低强度超声照射来将基因转染进入血管.
