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肝郁脾虚因素刺激对大鼠实验性肝癌发生和鸟氨酸脱羧酶表达的影响
目的观察肝郁脾虚因素刺激对二乙基亚硝胺诱发大鼠实验性肝癌发生和鸟氨酸脱羧酶表达的影响,以及疏肝健脾方药的调控作用.方法大鼠造模后选取第9、14、19周3个时间点分批处死大鼠,取肝组织,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达,以及肝组织病理切片观察.结果用肝郁脾虚因素刺激二乙基亚硝胺诱发的肝癌大鼠,在第9周后大鼠肝组织表达ODC比单纯用二乙基亚硝胺诱发的肝癌大鼠显著增强,并随着肝癌的发生发展在第14周和第19周时逐渐增强.结论肝郁脾虚因素刺激对化学诱发的大鼠实验性肝癌具有显著的促进作用.疏肝健脾中药可以降低肝癌组织细胞中ODC的表达,在一定程度上可控制肝癌细胞的增殖.
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鸟氨酸脱羧酶抗酶-1过表达促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡
目的 探讨上调鸟氨酸脱羧酶( ODC)抗酶-1( AZ-1)对非小细胞肺癌细胞系A549多胺代谢酶表达和细胞凋亡的影响.方法 制备靶向提高人源性AZ-1表达的pcDNA3. 1-HOAZ-1质粒,用其与空载质粒pcDNA3. 1(-)分别转染A549细胞,并设立未经任何处理的空白对照组,48 h后分别收集总RNA和蛋白质,通过反转录聚合酶链反应和蛋白质印记分析分别检测AZ-1、ODC和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂-1( AZIN-1)的表达;同样的处理条件下应用流式细胞计量术检测细胞凋亡.结果 在转染pcDNA3. 1-HOAZ-1质粒后,ODC表达被明显抑制,AZIN-1的表达调节不明显;过表达 AZ-1引起细胞凋亡增加( P<0. 05) .结论 过表达 AZ-1能抑制 ODC表达和促进A549细胞凋亡.
关键词： 鸟氨酸脱羧酶抗酶-1 鸟氨酸脱羧酶 多胺 非小细胞肺癌细胞 -
siRNA靶向抗酶抑制剂下调前列腺癌细胞PC3中鸟氨酸脱羧酶表达
目的 探讨抗酶抑制剂(AZIN)对前列腺癌细胞PC3鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达水平及增殖的影响.方法 将siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞,分别用RT-PCR及Western blot检测抗酶(AZ)、AZIN及ODC在mRNA和蛋白水平的表达,MTT检测细胞增殖.结果 siRNA-AZIN转染前列腺癌PC3细胞后,AZIN RNA表达水平降低(P<0.01);PC3细胞AZIN蛋白表达水平降低(P<0.05),且使ODC的表达水平降低(P<0.05);PC3细胞增殖能力明显减弱(P<0.05).结论 siRNA-AZIN可下调前列腺癌细胞PC3中ODC的表达.
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多胺的合成代谢与肿瘤治疗
多胺合成代谢关键酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)与肿瘤的发生和转移密切相关.现有的ODC和AdoMetDC的抑制剂在临床实验中毒不良反应大或疗效不佳,将抑制剂和其他药物联用或通过计算机与实验相结合的方式开发小分子抑制剂有望为肿瘤治疗提供新的思路.
关键词： 多胺 合成代谢 肿瘤治疗 鸟氨酸脱羧酶 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 -
2.45大鼠短期十二指肠胃反流的实验性研究
目的十二指肠胃反流是导致胃黏膜损害的重要因素,十二指肠胃反流可导致胃黏膜炎症、糜烂、溃疡甚至胃癌.鸟氨酸脱羧酶是多巴合成的限速酶,其组织水平可以反应组织细胞增殖的水平.本研究拟通过大鼠模型探讨短期十二指肠胃反流对胃黏膜的损害及其特点,短期十二指肠胃反流导致胃黏膜表达鸟氨酸脱羧酶的改变.
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外源多胺对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶基因转录的调节
目的 研究天然多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因转录的调节,探讨多胺在肝再生中的作用.方法 大鼠部分肝切除术诱导再生肝,采用原位杂交技术分析ODC mRNA的表达量,外源多胺(溶于0.9%NaCl)的处理用皮下注射法.结果 外源多胺处理后,再生肝ODC mRNA水平的变化趋势与对照组相似,但不同种类、剂量的多胺,结果差异明显.在所观察到的整个肝再生期间,高剂量腐胺(20 mg/kg体重)处理组mRNA水平始终低于对照组,特别在部分肝切除后2、4和10 h与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05);低剂量(0.02 mg/kg体重)的腐胺处理组,只在4 h和12 h显著高于对照组.高剂量精脒(0.15 mg/kg体重)处理组的ODC mRNA水平始终低于对照组(在10 h例外);而低剂量(0.03 mg/kg体重)处理组则不同,ODC mRNA水平表现出先抑制(在2 h)后促进(在4 h和6 h)的特点.精胺的作用与精脒相似.结论 不同浓度的多胺(主要是精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞ODC基因转录存在着反馈调节作用.
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外源多胺对大鼠早期再生肝鸟氨酸脱羧酶蛋白水平的调节
目的 研究多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)蛋白水平的调节,分析多胺在肝再生中的作用.方法 外源多胺(溶于0.9%NaCl)皮下注射雄性SD大鼠(180～220 g),部分肝切除(PH)诱导的大鼠再生肝中ODC蛋白水平的分析采用免疫印迹(Western blotting)方法.结果 高剂量的腐胺(20 ms/kg体重)、精脒(0.15 mg/kg体重)和精胺(6 mg/kg体重)处理后,ODC蛋白水平在PH后12 h内均低于对照组,且各组间变化趋势相近;而低剂量腐胺(0.02 mg/kg体重)、精脒(0.03 mg/kg体重)及精胺(0.06 ms/kg体重)处理组在PH后4h ODC水平迅速升高,分别比对照组高15.1%、29.5%和30.3%.结论 一定剂量的多胺对大鼠早期再生肝ODC蛋白水平有反馈调节作用,其中精脒、精胺的作用较强,腐胺较弱.
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皮质酮对大鼠肝再生过程中鸟氨酸脱羧酶的抑制
目的 研究大鼠体内主要的糖皮质激素--皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因表达及酶活性的影响.方法 乙醚麻醉大鼠,于PH前3d行双侧肾上腺切除术及假手术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射玄肾上腺鼠.用RT-PCR、Western blotting及高效液相色谱法(HPLC)分别测定ODC mRNA、ODC蛋白及酶活性.结果 与再生肝相比,完整肝中ODC mRNA、蛋白及其酶活性水平较低.PH后所有组(每组n=6)中ODCmRNA水平均显著升高,5h达到峰值.7h前mRNA含量由高到低依次为去肾上腺组、去肾上腺假手术组(即对照组)、10和40ms/kg体重皮质酮处理组.去肾上腺组(n=13,下同)的ODC蛋白量高于对照组.10mg/kg体重皮质酮处理,在PH后0～24h下降,40mg/kg皮质酬处理组低.PH后,所有组(每组n=6)ODC活性迅速升高,6h达到峰值;皮质酮处理后活性在6h下降显著,40ms/kg体重皮质酮处理组活性低.结论 皮质酮处理后,大鼠完整肝及再生肝中ODC mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下降;ODC活性变化的部分原因是由于ODC mRNA及其蛋白量的改变.
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抗酶抑制因子结构、功能与代谢的研究进展
抗酶抑制因子是一种热不稳定蛋白,与鸟氨酸脱羧酶同源,但不具有鸟氨酸脱羧酶活性,经泛素依赖途径被降解.抗酶抑制因子与抗酶高度亲和,抑制抗酶功能,恢复鸟氨酸脱羧酶活性.研究发现,抗酶抑制因子还能够调节多胺转运,抑制细胞周期蛋白D1的降解,以及加速中心粒复制,从而促进细胞增殖及肿瘤发生.
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抗酶的研究进展
抗酶(antizyme)是当细胞内多胺水平升高时刺激机体合成的一种小分子量调节蛋白,能特异性地与鸟氨酸脱羧酶 (ornithine decarboxylase, ODC) 结合,经泛素非依赖途径被26S蛋白酶体降解,从而使多胺合成减少;抗酶还可以调节多胺转运,以稳定细胞内多胺水平.近年来随着生物技术的不断发展,对抗酶的认识也逐步深入,本文综述了抗酶家族、合成、作用及定位等方面的研究进展.
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鸟氨酸脱羧酶的生理病理特点及其药物研究概况
鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)是多胺代谢中的关键酶,广泛存在于人体和动物各组织细胞内,其中对肠细胞的增生、移行和分化起重要作用.机体调节因素比较复杂.在黏膜损伤性疾病及某些癌前病变等细胞大量增生的病理情况下ODC的表达发生改变,可以作为这些疾病分期、预后及药物作用靶点或疗效的指标.寻找对ODC有作用的药物对于治疗其相关疾病是非常有意义的.
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酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12相互作用蛋白的研究
目的:筛选并克隆人肝细胞中与HBcAg肝细胞结合蛋白C-12新基因相互作用蛋白的基因,进一步探讨HBcAg结合蛋白C-12新基因的生物学功能.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增C-12基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出C-12基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落21个,其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有3个、组织蛋白酶B基因1个、载脂蛋白M基因1个、细胞色素C氧化酶Ⅱ基因3个、人类受体蛋白酪氨酸激酶变异因子基因1个、KH型剪接调控蛋白基因1个、磷脂酰肌醇脱酰酶聚糖Q转录变异因子1基因1个、铁蛋白轻链基因2个、鸟氨酸脱羧酶1基因1个、血液凝固因子Ⅸ基因1个、乙酰乳酸合酶基因1个、钙激活蛋白酶基因1个、核外三磷酸盐双磷脂酰水解酶5基因1个、血浆α-球蛋白抑制因子H4基因1个和未知蛋白基因2个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12新基因相互作用蛋白的编码基因,为进一步研究HBcAg在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供了新线索.
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鸟氨酸脱羧酶和c－myc在胃癌及其癌前病变组织中的表达及意义
及蛋白的表达。结果：ODC mRNA及蛋白在萎缩性胃炎肠化生（ CAG与IM）、不典型增生（ DYS）及胃癌（ GC）组织中的表达水平显著高于浅表性胃炎（CSG）（P＜0．01）。 c－myc mRNA及蛋白在胃癌（GC）组织中的表达水平显著高于浅表性胃炎（CSG）、萎缩性胃炎肠化生（CAG with IM）（P＜0．01），ODC和c－myc在中低分化腺癌的表达水平显著高于高分化腺癌（P＜0．05）。 ODC与c－myc在胃粘膜癌变多阶段中的表达呈正相关（ P＜0．01）。结论：ODC作为致癌因子在胃癌发生中有重要作用，且c－myc通过促进ODC的表达促进细胞增殖，将2指标联合检测，有助于胃癌及其癌前病变的早期诊断。
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二氟甲基鸟氨酸对人膀胱癌EJ细胞生长及凋亡的影响
鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径的关键酶.ODC异常高表达及细胞内多胺高水平与肿瘤发生发展密切相关[1].我们采用体外实验方法对ODC 抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)阻断人膀胱癌EJ细胞多胺生物合成途径对细胞生长及凋亡的影响进行观察.
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鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对肺癌增殖和侵袭抑制作用的研究
目的 探讨重组鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)介导的鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)反义RNA对肺癌细胞多胺合成、增殖和侵袭的抑制作用.方法 采用活细胞计数法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖的影响,采用Western印迹法和高效液相色谱分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及细胞内多胺含量,采用活细胞计数法和流式细胞仪分别检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA和Ad-ODC-AdoMetDCas对A-549细胞增殖和细胞周期分布的影响,应用Matrigel侵袭实验分析腺病毒对肺癌细胞侵袭活性的改变.结果 当感染效率为50时,腺病毒对A-549细胞的感染率约75%.Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制A-549细胞ODC和AdoMetDC的表达.A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内多胺含量明显降低.感染Ad-ODC-AdoMetDCa8的A-549细胞停滞在G1期.Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低A-549细胞的体外侵袭能力.结论 ODC和AdoMetDC双反义腺病毒能够显著抑制肺癌A-549细胞的增殖和侵袭.
关键词： 鸟氨酸脱羧酶 S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶 肺肿瘤 -
腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA对肺癌A-549细胞抑制作用的实验研究
鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径中的关键酶和限速酶.许多肿瘤促进剂、诱导剂在诱发组织癌变的过程中,伴有ODC活性的异常升高,在一些癌基因转化的细胞系及几乎所有的动物肿瘤中,也有ODC基因表达的异常[1].ODC作为多胺生物合成途径中的第一个限速酶,也是活性低的酶,可催化L-鸟氨酸生成腐胺.有报道,ODC的含量在许多肿瘤中增高,并与肿瘤的复发有一定的关系[2].
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鸟氨酸脱羧酶基因沉默抑制宫颈癌细胞生长的研究
目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因作为宫颈癌治疗靶基因的可行性.方法:采用慢病毒介导的RNA干扰技术,沉默Hela细胞ODC基因,建立ODC稳定沉默的细胞系Hela/ODC,用定量RT-PCR和免疫印迹检测ODC的表达水平.用MTT实验、克隆形成实验、细胞倍增时间和细胞周期分析评价ODC基因沉默对Hela细胞生长的影响.结果:Hela/ODC的ODC mRNA和蛋白质表达水平均明显下降,mRNA水平下调93.4%.Hela/ODC的增殖受到明显抑制,细胞倍增时间从22.3 h延长到32.0 h,细胞周期分析S期细胞增加,G0/G1期和G2/M期细胞显著减少.结论:慢病毒载体介导RNA干扰能够稳定沉默ODC基因表达,从而成功抑制肿瘤细胞的生长,表明以ODC 基因为靶基因进行宫颈癌的基因治疗是可行的.
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反流食管炎组织EGFR与ODC及CDH mRNA表达与食管癌变相关性探讨
目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)及上皮钙黏蛋白(CDH)这3项指标在反流性食管炎的发生、发展及癌变过程中的变化情况.方法:健康SD大鼠34只,用随机数字表法分为2组,反流模型组28只,正常对照组6只.分别观察反流模型组术后5、17、28和40周,正常对照组于40周时食管黏膜的病理变化及检测EGFR、ODC、CDH mRNA的表达情况.结果:在反流性食管炎的发展过程中,EGFR mRNA和ODC mRNA随病程的进展逐渐增强,EGFR mRNA在正常、RE、BE和EAC间差异均有统计学意义,P＜0.05;ODC mRNA在BE和EAC中明显高于正常和RE(P＜0.05),BE和EAC相比差异也有统计学意义,P＜0.05;CDH mRNA则呈逐渐下降的趋势,BE和EAC明显低于正常和RE,但BE和EAC间差异无统计学意义,P＞0.05.结论:在混合反流造成黏膜损伤形成RE的同时,EGFR、ODC和CDH的表达增强,并随病程的发展逐渐增强;说明EGFR、ODC和CDH基因的高表达参与了从RE→BE→EAC的发展过程,是BE、EAC发生发展的早期分子事件.
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前列腺特异抗原启动子介导的双反义RNA腺病毒载体的构建及体内抑癌研究
鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(AdoMetDC)是多胺生物合成的两个关键酶,在前列腺肿瘤的发生、恶变和转移中发挥着重要作用.本课题组前期构建了非组织特异的ODC反义RNA表达载体[1],在此基础上,本研究构建了前列腺组织特异、由前列腺特异抗原启动子介导、针对ODC和AdoMetDC翻译起始区的双反义腺病毒载体,并通过裸鼠皮下前列腺癌移植瘤模型,研究重组腺病毒在体内对前列腺癌细胞的作用.
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二氟甲基鸟氨酸对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥厚的影响
目的 研究二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥厚的影响.方法 按照体重将大鼠随机分为3组:对照组、模型组和实验组,每组15只.实验组给予2％二氟甲基鸟氨酸,对照组与模型组皮下注射0.9％NaCl,均4周.以异丙肾上腺素5 mg·kg-1连续皮下注射1周复制心肌肥大模型.计算心脏指数;用Msaaon染色评价纤维化程度;以实时荧光定量PCR测定心房钠尿肽(ANP)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)和精脒/精胺乙酰转移酶(SSAT)mRNA水平.结果 对照组、模型组、实验组的心脏指数(mg·g-1)分别为3.49±0.21,3.76±0.32和3.55±0.27;这3组的间质纤维化率分别为(6±2)％,(24±5)％和(14±2)％;这3组的ANP mRNA表达水平分别为0.60±0.08,1.20±0.44和0.65±0.13;这3组的ODC mRNA表达水平分别为0.95±0.19,1.67±0.21和1.17±0.09;这3组的SSAT mRNA表达水平分别为0.95±0.28,1.57±0.18和1.85±0.17.上述指标,模型组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 DFMO对大鼠心肌肥厚有保护作用,其机制与降低多胺合成代谢和增强分解代谢有关.
