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C2-神经酰胺对线粒体膜间隙蛋白释放影响研究
目的 探讨外源性C2-神经酰胺对线粒体膜间隙蛋白释放的影响.方法 12.5、25和50μmol/L C2-神经酰胺作用人结肠癌HT-29细胞24 h,采用Mitochondrial/Cytosol Fractionation试剂盒分离细胞线粒体和细胞液,应用Western Blotting方法检测线粒体和细胞液中Cyt c、Smac和HtrA2蛋白表达水平.结果 C2-神经酰胺作用细胞后,Cyt c、Smae和HtrA2总蛋白的表达水平未见明显改变,但随着C2-神经酰胺浓度增加,Cyt c、Smac和HtrA2从线粒体释放入细胞液中的水平逐渐增加,具有剂量-效应关系.Caspases抑制剂存在下,50 μrnol/L C2-神经酰胺仍能使Cyt c和HtrA2从线粒体释放入胞液中,但Smac却不能释放.结论 C2-神经酰胺能通过Caspases依赖和非依赖的方式促进线粒体膜间隙蛋白的释放入细胞液,诱导细胞凋亡作用.
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C2-神经酰胺所致HT-29细胞凋亡中线粒体的变化
目的 探讨外源性C2-神经酰胺所致HT-29细胞凋亡中线粒体的变化.方法 C2-神经酰胺作用人结肠癌HT-29细胞,采用透射电镜观察细胞线粒体超微结构的变化;采用Mitochondrial Apoptosis Detection Kit和流式细胞仪检测细胞凋亡时线粒体损伤及其膜电位的变化.结果 C2-神经酰胺作用HT-29细胞24h,线粒体发生空泡化、变性、嵴肿胀或消失等形态学改变;此时荧光显微镜下可观察到线粒体聚集,发出红色荧光,而正常细胞线粒体发出绿色荧光.C2-神经酰胺作用细胞6h,线粒体膜电位即开始降低,呈时间-剂量-效应关系;结论线粒体参与C2-神经酰胺诱导HT-29细胞凋亡作用.
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丝裂霉素C联合C2-神经酰胺对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用
目的:探讨丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)与C2-神经酰胺(C2-ceramide,C2-cer)联合应用对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用.方法:采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazo le-2yl)-2,5-diphenyl te-trazolium bromid,MTT]比色法测定MMC和C2-cer单独或联合应用对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用,并应用Chou-Talalay联合指数法定量分析药物之间相互作用的效果.结果:MMC、C2-cer单独应用时,随药物浓度增加对T24细胞生长的抑制作用也增加,中效浓度分别为153.426、27.797 μmol/L.MMC与C2-cer联合应用时,相互作用的效果表现为在低浓度(0＜fa＜43%)时呈协同作用(CI＜1),高浓度(43%＜fa＜100%)时呈拮抗作用(CI＞1),中效浓度为89.536μmol/L(其中MMC 74.048 μmol/L,C2-cer 15.488μmol/L).结论:MMC和C2-cer相互作用的效果与药物浓度相关,低浓度时呈协同作用,高浓度时呈拮抗作用.
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C2-神经酰胺诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6的早期凋亡作用
目的:研究外源性C2-神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6活力的抑制作用以及早期凋亡诱导作用.方法:采用MTT法测定C2-神经酰胺对C6细胞活力的影响;倒置荧光显微系统观察细胞形态变化;Annexin Ⅴ/PI双染色流式细胞术对细胞早期凋亡进行定量分析.结果:C2-神经酰胺可显著抑制C6细胞的活力,IC50为 2.2×10-5 mol·L-1;荧光染色可见核浓染等细胞凋亡特征形态改变;流式细胞术分析表明C2-神经酰胺可诱导C6细胞发生早期凋亡作用,且凋亡百分率呈时间及浓度依赖性,C2-神经酰胺2×10-5 mol·L-1 处理 24 h 后平均早期凋亡率高达 49.3%.结论:C2-神经酰胺主要通过诱导早期细胞凋亡对大鼠脑胶质瘤C6细胞发挥细胞毒作用,提高神经酰胺水平有望成为肿瘤化疗的新途径.
关键词： C2-神经酰胺 C6 Annexin Ⅴ/PI 早期凋亡 -
C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞凋亡的影响
目的:观察C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)凋亡的影响及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性的变化.方法:取第二代牛LECs,经不同浓度(25 μmol/L,50 μmoL/L,100 μmol/L)C2-神经酰胺作用12 h,行TUNEL染色,荧光显微镜下计数凋亡细胞,计算凋亡率;Caspase-3活性检测试剂盒检测牛LECs中Caspase-3活性的变化.结果:随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LECs凋亡率也随之升高(P<0.05),呈剂量依赖关系.随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LEC中Caspase-3活性的表达也随之增强(P<0.05).结论:C2-神经酰胺可以诱导牛LECs发生凋亡;在此过程中,存在Caspase-3活性表达.
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C2-神经酰胺对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响
目的:研究C2-神经酰胺(C2-cer)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA)和离子霉索(Ion)进行刺激,以不同终浓度的C2-cer与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数.结果:终浓度为25、50和75 μmol/L的C2-cer可以显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的(60.13±1.18)%,分别降低为(54.56±1.14)%、(48.73±1.26)%和(27.09±1.07)%(P＜0.01);CFDA-SE染色结果显示,各浓度C2-cer对ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用,增殖指数(PI)由ConA组的(1.81±0.25),分别降低为(1.46±0.01)、(1.25±0.04)和(1.18±0.03)(P＜0.05);各浓度C2-cer均可明显抑制PMA+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)由PMA+Ion组的(1.47±0.01),分别降低为(1.27±0.01)、(1.11±0.01)和(1.05±0.01)(P＜0.05).结论:C2-cer能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖.
