首页 > 文献资料
-
流式细胞术检测细胞凋亡比较研究
从三方面探讨检测细胞凋亡流式细胞术的方法.选用大鼠皮质神经元细胞,同时使用碘化丙锭(PI)An-nexin V/PI.JC-1法检测细胞凋亡率.结果显示三种方法的凋亡率分别是:2.60%,6.52%和18.56%,两两之间有显著性差异(P＜0.01).JC-1法敏感,AV/PI次之,PI单染法不适合检测早期细胞凋亡.
-
间日疟原虫抗原体外诱导间日疟患者PBMC凋亡的研究
目的 分析间日疟原虫抗原(PvAg)诱导宿主外周血单个核细胞(PBMC)的凋亡水平 方法 采用流式细胞术结合应用膜联蛋白-V(Annexin-V),测定7例间日疟现症感染者PBMC经PvAg刺激后CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD19+B细胞的凋亡率,并与空白对照组比较. 结果 经PvAg刺激后的间日疟现症感染者CD19+B细胞及CD4+T细胞凋亡率分别为7.26％和48.08％,与空白对照凋亡率4.08％和22.80％比较差异无统计学意义(P＞0.05)；CD8+T细胞凋亡率为55.16％,与对照凋亡率22.86％比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 PvAg可诱导间日疟现症感染者CD8+T细胞凋亡,从而可能参与介导间日疟原虫发生免疫逃逸.
-
几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡的研究
本研究评价几种临床常用的抗肿瘤药物顺铂(CDDP)、羟基喜树碱(HCPT)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MIT)在白血病治疗中的作用,并分析其在诱导Jurkat细胞凋亡的作用,为白血病的临床治疗提供新的理论依据和思路.用Annexin V/PI双参数流式分析方法,检测这几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡和死亡的效应.结果表明:MIT和HCPT在加药处理早期4小时 (P＜0.05)和后期第8小时(P＜0.05)都有明显的诱导Jurkat细胞凋亡的效应.HHT有明显诱导Jurkat细胞凋亡的效果,但各剂量组之间无显著差异.CDDP在高浓度和长时间作用时才显示较弱的细胞凋亡效应,明显弱于前3者.各种药物作用后均未观察到明显的细胞死亡效应.结论:MIT诱导Jurkat细胞凋亡的作用显著,Annexin V流式分析方法可作为一种可靠的临床药物筛选的方法.
-
对细胞凋亡的新认识
综述近年来对细胞凋亡研究的一些新进展,包括细胞凋亡的检测手段、线粒体细胞色素C在细胞凋亡过程中的作用、caspase的激活过程及抗肿瘤化疗与细胞凋亡的关系.
-
放射性核素标记annexin V凋亡显像在肿瘤研究中的进展
肿瘤细胞凋亡过低是肿瘤形成的重要原因之一,诱导肿瘤细胞凋亡也成了目前抗肿瘤治疗的研究方向.用放射性核素标记的annexin V对细胞凋亡后暴露在细胞膜表面的体内PS(膦脂酰丝氨酸)进行体内显像,可检测早期细胞凋亡.这种体内凋亡显像方法可以监测抗肿瘤治疗的疗效、评估患者的预后,甚至可以指导肿瘤治疗方法的选择,提高治疗的质量.
-
体内凋亡细胞显像的研究进展
目前,疾病的诊断及治疗已进入分子水平阶段,细胞凋亡的检测技术也不断更新和发展.活体内细胞凋亡显像符合生理代谢的特点,能够对疾病实行早期、活体、无创及定量检查.其主要显像方法有:磁共振成像、光学成像、超声检查及放射性核素显像等.其中,以放射性核素凋亡显像的研究应用尤为突出,已应用于心血管疾病、中枢神经系统疾病、移植排斥反应以及肿瘤诊治等方面.
-
苯对骨髓CD34+细胞及单个核细胞凋亡的影响
目的探讨不同苯浓度作业场所对淋巴细胞微核和/淋巴细胞百分比高的工人的骨髓CD34+细胞数量及单个核细胞Annexin V,Fas阳性表达率的影响.方法对20例淋巴细胞微核和/淋巴细胞百分比偏高的苯作业工人和10例正常人,采用流式细胞术检测CD34+细胞数量,单个核细胞Annexin V和Fas的阳性表达率;气相色谱法测定作业场所苯浓度.结果苯浓度34～582 mg/m3作业工人骨髓CD34+细胞数量明显低于正常对照组,有显著性差异(P＜0.05),相关分析呈负相关(P＜0.05),r=-0.95.骨髓单个核细胞Annexin V阳性表达率与Fas阳性表达率明显高于正常对照组(P＜0.05),相关分析呈正相关(P＜0.05),r=0.96;苯浓度8～32 mg/m3作业工人骨髓仅CD34+细胞数量高于正常对照组.结论动态测定苯作业工人骨髓CD34+细胞数量,Anrexin V和Fas阳性表达率对慢性职业性苯中毒有早期诊断和预防意义.
-
低剂量脉冲超声波对培养细胞的生物学效应
目的研究不同时间的低剂量脉冲超声波刺激对细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法采用MTT法测定成纤维细胞增殖情况,Annexin V法测定成纤维细胞和肿瘤MiaPaCa-2细胞的凋亡情况.结果 (1)在MTT法测定细胞活性中,细胞培养液不含FCS时,超声波刺激时间为6 min、11 min和20 min的剂量组,其吸光光度值较对照组都有显著性增高,且差异具有统计学意义(均P＜0.01),其细胞增殖峰值在11 min.细胞培养液含5%FCS时,超声波刺激不同时间的剂量组的吸光光度值较对照组亦有显著性增高,并具统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).(2)低剂量脉冲超声波刺激人皮肤成纤维细胞及肿瘤细胞超过一定时间后,少量细胞开始出现凋亡,且随着刺激时间的延长,凋亡细胞数增多,凋亡程度也逐渐加重.其中超声波刺激时间为60 min、80 min和100 min剂量组的细胞凋亡数与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论短时间低剂量脉冲超声波刺激能促进细胞增殖,超过一定时间则会抑制细胞生长,甚至引起细胞凋亡.
-
尼卡地平对家兔心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响
目的：探讨尼卡地平对家兔心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响。方法40只新西兰家兔随机分为4组，对照组（A组）、缺血组（B组）、再灌注组（C组）、尼卡地平组（D组）。通过结扎冠状动脉左侧旋支40 min，开放120 min建立缺血再灌注模型。采用磷脂酰丝氨酸外翻分析方法（Annexin V法）检测家兔心肌凋亡情况。结果病理切片提示D组心肌细胞受损情况明显低于B组和C组（P<0.01）。D组心肌细胞凋亡明显少于B组及C组（均P<0.01），但高于A组（P<0.05）；D组心肌细胞坏死少于B组及C组（均P<0.01），与A组比较无统计学差异（P>0.05）。结论尼卡地平可以减少家兔缺血再灌注损伤所诱导的心肌细胞凋亡。
-
β2-GPI与细胞凋亡的关系研究
目的:探讨β2-糖蛋白-Ⅰ(β2-GPI)与凋亡细胞的结合是否通过磷脂酰丝氨酸(PS).方法:采用UV照射的方法,诱导K562细胞凋亡,应用碘化丙啶、梯状电泳和β2-GPI检测细胞凋亡.采用β2-GPI与Annexin V的竞争实验来检测β2-GPI是否通过PS与凋亡细胞结合.结果:随着UV照射时间延长,K562细胞的凋亡率增加,在照射300秒时,凋亡细胞达到51.01%(47.23%±4.41%), DNA出现明显的片段化.rGFP连接的β2-GPI,与凋亡细胞结合,β2-GPI可以有效地检测细胞凋亡,而且与Annexin V竞争同一结合位点,即PS.4℃时β2-GPI与晚期凋亡细胞的结合高于37℃,而且随着时间延长,与凋亡细胞的结合均降低.结论:通过β2-GPI与Annexin V的竞争抑制实验第一次为"β2-GPI通过PS与凋亡细胞结合"这一推断提供直接的实验证据,第一次证实β2-GPI既可以与早期凋亡细胞结合,也可以与晚期凋亡细胞结合,rGFP-hβ2-GPI可以作为新的检测细胞凋亡的试剂应用.
-
一种定量检测肥大细胞脱颗粒的新方法
为寻求过敏性休克的法医学客观证据,建立豚鼠异种血清过敏性休克模型,采用流式细胞仪在整体动物水平和体外模拟脱颗粒实验中对Annexin V标记阳性的腹腔肥大细胞(PMC)进行计数.结果发现,过敏性休克时,腹腔肥大细胞脱颗粒率较正常对照组明显增高;体外模拟脱颗粒实验中,致敏的血清与PMC共孵育,可以剂量依赖性方式使Annexin V阳性率升高,并且与组胺释放是平行的.实验提示,Annexin V可以定量标记肥大细胞体内、体外脱颗粒程度,因而本方法可以为法医学诊断过敏性休克提供客观证据,也为用肥大细胞体外筛选变应原提供了一种新的客观、定量的检测方法.
-
阿霉素与Annexin V的偶联及其对乳腺癌细胞的杀伤作用
目的 研究将阿霉素与Annexin V偶联的方法,以及偶联物对乳腺癌细胞的杀伤作用.方法 使用EDC/sulfo-NHS为偶联剂,将阿霉素与Annexin V偶联,使用紫外可见分光光度法对偶联物进行了表征,用MTT方法检测偶联物对过氧化氢处理的乳腺癌细胞系MDA-MB-231的肿瘤细胞杀伤作用.结果 在过量的EDC存在下,提高sulfo-NHS的浓度,有助于提高偶联比.偶联物的浓度为1μmol/L时,MDA-MB-231肿瘤细胞的存活率只有27.7％；而单独使用阿霉素,浓度要达到1.8 μmol/L时,才能达到相同的抑制率；Annexin V在3.88μmol/L时,细胞存活率为63.9％.结论 偶联物对MDA-MB-231肿瘤细胞的杀伤作用要强于两者分别单独使用时的效果,这为进一步研究抗肿瘤药物提供了依据.
-
地塞米松抑制肥大细胞脱颗粒及其机制初探
目的:研究糖皮质激素对Ⅰ型超敏反应中的肥大细胞脱颗粒反应是否有直接作用.方法:利用流式细胞仪技术观察地塞米松对 RBL-2H3细胞(大鼠嗜碱粒细胞)脱颗粒程度的影响,利用western blot分析ERK1/ERK2信号的改变.结果:地塞米松预先作用于RBL-2H3细胞,使Annexin V标记的细胞阳性率较致敏原活化组明显下降,MAPK活性明显降低.结论:地塞米松抑制肥大细胞脱颗粒反应,其机制与MAPK活性有关.
-
新型分子探针近红外荧光标记Zn-DPA监测肿瘤疗效的研究
目的:探讨新型分子探针近红外荧光标记Zn-DPA( Zn-DPA-PSS794)通过光学成像监测阿霉素治疗卵巢癌疗效的可行性,并与Cy5.5-annexin V光学成像效果进行比较.方法:MTT和流式细胞术分析阿霉素对卵巢癌细胞株OVCAR-8的杀伤作用.将OVCAR-8种植到裸鼠皮下,成瘤后分为对照组和治疗组,每组再分2个亚组,即DPA组和annexin V组.治疗组静脉注射阿霉素,2次后各组裸鼠分别进行Zn-DPA-PSS794光学显像和Cy5.5-annexin V光学显像,并进行定量分析.处死裸鼠,分离肿瘤,切片后进行HE染色,Western 印迹检测肿瘤组织中caspase-3蛋白表达水平.结果:阿霉素对OVCAR-8的IC50为6μmol/L,阿霉素能体外诱导OVCAR-8凋亡、坏死,总效率达35％.阿霉素治疗裸鼠移植瘤48 h后,Zn-DPA-PSS794光学成像和Cy5.5-annexin V光学成像均为阳性,而对照组2种光学成像结果均为阴性,对照组和治疗组肿瘤部位的荧光强度差异有统计学意义(P＜0.001).肿瘤组织HE染色示肿瘤细胞核大,深染.治疗组中caspase-3蛋白高表达,而对照组低表达.结论:Zn-DPA-PSS794光学成像能有效监测阿霉素治疗OVCAR-8荷瘤裸鼠的疗效,与Cy5.5-annexin V显像效果类似.
-
慢性肾衰竭病人红细胞表面磷脂酰丝氨酸的表达
目的:研究血液透析(HD)、腹膜透析(CAPD)、无透析慢性肾衰竭(Non-D)病人及正常人红细胞表面磷脂酰丝氨酸(PS)的表达情况,以探讨PS的表达对红细胞功能影响的关系.方法: 采用对PS有高度亲和力的磷脂结合蛋白 annexin V检测技术,利用流式细胞仪对细胞进行荧光测定.结果: HD病人红细胞PS的表达较高(2.13±1.12)%,CAPD组(1.35±0.84)%和Non-D病人(1.39±0.70)% 相对较低,但都明显高于正常人对照组(0.71±0.34)%.结论:慢性肾衰竭(CRF)病人PS 的高表达与尿毒症之间有明显的相关性.
-
STI571对食管癌细胞株CE-48T和CE-81T的体外杀伤作用
背景与目的:酪氨酸激酶是细胞增殖和分化的介导者,有研究显示,其在食管癌的发生发展中起重要的促进作用.STI571为血小板衍生的生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor β,PDGFR-β)的酪氨酸激酶抑制剂;食管癌组织中可高表达PDGFR-β.本实验的目的就是检测靶向治疗新药STI571对食管癌细胞株的体外杀伤作用.方法:使用Western blot分析检测两种细胞株CE-48T和CE-81T中PDGFR-α和PDGFR-β的表达,然后应用MTT法测出STI571对两种细胞的IC50值,以Annexin V/PI染色检测细胞凋亡情况,再用Western blot检测STI571处理前后p-PDGFR-β的表达.结果:CE-48T细胞表达PDGFR-β而不表达PDGFR-α;而CE-81T细胞既不表达PDGFR-β,也不表达PDGFR-α.STI571对PDGFR-β阳性的CE-48T细胞具有很强的抑制作用,其平均IC50值为(8.32±1.50)μmol/L,而对PDGFR-β阴性的CE-81T细胞的抑制作用较弱,其平均IC50值为(41.02±7.64)μmol/L.Annexin V/PI染色检测表明以STI571以10 μmol/L作用CE-48T细胞12 h,细胞凋亡率为(52.43±5.30)%,增加作用时间和药物浓度不能增加凋亡率.使用STI571处理CE-48T细胞后,p-PDGFR-β的表达受到抑制,而对CE-81T细胞没有影响.结论:STI571可诱导PDGFR-β表达阳性食管癌细胞凋亡,在体外有明显的杀伤作用,p-PDGFR-β可能是STI571的主要作用靶点.
-
四君子汤复方总多糖对肠黏膜Peyer's结细胞凋亡的影响
目的 探讨四君子汤复方总多糖对小鼠肠黏膜Peyer's结细胞凋亡的影响.方法 取NIH小鼠随机分为正常组、模型组、四君子汤复方总多糖(SJZPS)组和四君子汤去蛋白多糖(SJZFP)组,肉眼计数Peyer's结细胞个数和面积,流式细胞(FCM)定量分析法(Annexin V 联合PI)测定Peyer's结细胞的凋亡率,免疫组化法测定Peyer's结细胞BCL-2蛋白的表达.结果 模型组Peyer's结个数和面积均小于正常组,与模型组比较,SJZPS组和SJZFP组Peyer's结个数和面积,均具有非常显著性差异(P＜0.01);模型组Peyer's结细胞凋亡率大于正常组,与模型组比较,SJZPS组和SJZFP组Peyer's结细胞凋亡率具有非常显著性差异(P＜0.01);模型组Peyer's结BCL-2蛋白表达低于正常组,与模型组比较,SJZPS组和SJZFP组Peyer's结BCL-2蛋白表达具有非常显著性差异(P＜0.01).结论 SJZPS和SJZFP均可抵抗肠黏膜Peyer's结细胞的凋亡,具有肠道黏膜免疫调节作用.
-
一种流式细胞仪同时检测多个凋亡参数的方法
目的建立一种同时检测多个细胞凋亡参数的方法.方法在一个检测中,加入罗丹明123检测细胞凋亡时线粒体膜电位的变化,采用PE标记的ANNEXIN V检测细胞膜的对称性,采用7-AAD检测死亡细胞.结果采用该方法成功检测了低温条件下的淋巴细胞凋亡.结论罗丹明123、PE-ANNEXIN V、7-AAD同时染色是一种检测多个凋亡参数的实用方法.
-
柔红霉素诱导Jurkat细胞凋亡、抑制增殖与bcl-2、PCNA表达变化的关系
目的探讨柔红霉素(DNR)在体外诱导Jurkat细胞凋亡的情况并探讨其与细胞表达凋亡相关蛋白改变的关系.方法Annexin V/PI双标流式细胞仪(FCM)检测DNR诱导Jurkat细胞的凋亡作用,用免疫细胞化学观察相关蛋白表达水平的变化.结果当DNR为0.1～2.0μmol/L浓度范围时,作用一定时间后Jurkat细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高.但药物浓度超过2.0μmol/L,或2.0μmol/L作用48h后Jurkat细胞出现凋亡率下降,细胞大部分死亡.0.5μmol/LDNR作用于Jurkat细胞24h后,细胞中bcl-2、PCNA蛋白表达水平降低.结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡,药物浓度达5.0μmol/L时细胞大部分死亡.本实验条件下DNR体外诱导Jurkat发生凋亡的机制可能是通过抑制bcl-2、PCNA蛋白的表达实现.
-
Anip973细胞上清液增加脐静脉内皮细胞的生物活性
背景与目的肿瘤微血管内皮细胞与正常组织来源的微血管内皮细胞相比，具有对生长因子反应性高、粘附因子表达高等特点，造成肿瘤血管通透性高且新生旺盛，导致肿瘤的快速生长和转移。因此了解肿瘤微环境中内皮细胞发生、形态及功能上的异质性特点，对进行合理的、个性化的、以血管内皮细胞为靶点的抗血管新生治疗有一定的指导作用。本实验旨在研究高转移肺腺癌Anip973细胞培养上清液对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell, HUVEC）表面标记及其生物学行为的影响。方法以含有不同浓度Anip973细胞上清液的培养基（RPMI-1640+10%胎牛血清）培养的HUVEC为实验组、单纯培养基培养的HUVEC为对照组，以CCK-8检测各组细胞增殖率、基质胶成管实验检测成管能力、Transwell检测迁移能力、流式细胞术检测细胞表面标记CD105、CD31以及凋亡标记Annexin V的表达，并分析细胞表面标记的表达与生物学行为之间的关系。结果与对照组相比，经Anip973细胞上清液培养的HUVEC增殖更多、且在浓度为250μL/mL作用24 h明显（P=0.002）；成管及迁移能力亦均较对照组增强，分别在浓度为125μL/mL （P<0.001）、250μL/mL（P=0.002）时达强；细胞表面标记CD105表达阳性率升高、浓度为250μL/mL （P=0.028）明显；CD31表达阳性率呈浓度依赖性升高；凋亡细胞比例降低。相关性分析显示：CD105的表达阳性率与细胞增殖及迁移能力呈正相关关系、CD31的表达与生物学行为并无明显相关性。结论 Anip973细胞上清液能促进HUVEC细胞增殖、迁移、血管形成，CD105也随之变化、并可在一定程度上反应其生物学行为。
