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松花粉醇提物抗肿瘤作用的初步研究
目的 探讨松花粉醇提物的体内外抗肿瘤疗效.方法 体外检测:MTT法测定松花粉醇提物对人结肠癌细胞247、HCT116、人宫颈癌细胞HeLa及人胚肾细胞K293的细胞毒作用;体内检测:建立Lewis肺癌小鼠模型,计算各组小鼠的肿瘤、胸腺、脾脏重量、抑瘤率及免疫器官指数.结果 松花粉醇提物对以上3种肿瘤细胞均表现出明显的抑制作用,而对K293的毒性较弱;能明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长,并能提高小鼠的胸腺和脾脏指数.结论 松花粉醇提物在体内外实验中有明显的抑瘤作用,且对免疫器官有一定的保护作用,为肿瘤的预防、治疗及术后恢复提供了一定的理论依据.
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单用A23187诱导外周血单个核细胞成树突状细胞及其介导耐药肿瘤细胞杀伤的实验研究
目的 探索一种快速、高效的由外周血单个核细胞(PBMC)获取树突细胞(DC)的方法,并探索该种来源DC对耐药肿瘤细胞的杀伤作用.方法 通过单用A23187或联合细胞因子(GM-CSF、IL-4及TNF-a)将PBMC诱导分化为DC,观察细胞形态;流式细胞术检测诱导之DC表面分子表达;MTT法检测DC刺激异基因淋巴细胞增殖及其介导靶细胞的杀伤能力.结果 上述两种细胞因子组合均能诱导PBMC向成熟DC分化,均高表达CD1a、CD80、HLA-DR、CD83和CD86;A23187组诱导72h获得DC数量高于细胞因子组的诱导率,也高于细胞因子组诱导7d的诱导率(P值均<0.05);两组所获DC在对异基因淋巴细胞增殖及介导T细胞对耐药肿瘤细胞的杀伤无显著差异(P值均>0.05).结论 单用A23187可快速(72h以内)诱导PBMC向成熟DC转化,且能介导杀伤耐药肿瘤细胞;与联合细胞因子相比,该方法是一种快速而高效的获取DCs的方法.
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止血用ZSM-5沸石的生物相容性评价
目的:对ZSM-5沸石进行生物相容性评价,为开发其作为急救止血材料提供实验室依据.方法:参照我国医疗器械生物学评价标准和所推荐的生物学试验,对ZSM-5沸石进行体外细胞毒性、溶血、急性全身毒性、热原、皮内反应、致敏、微核试验研究.为了解沸石颗粒残留伤口内对机体的影响,行肌肉内植入试验研究.结果:ZSM-5沸石无明显细胞毒性;无溶血反应;急性全身毒性、热原、皮内反应、致敏试验结果均符合我国医疗器械生物学评价标准:沸石植入肌肉后12周局部组织有明显的炎症反应.结论:ZSM-5沸石细胞生物相容性好,但长期存留于创面内可引起炎症反应.
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四甲基偶氮唑盐比色法体外药敏试验对乳腺癌细胞药物敏感性的预测价值
目的 探讨四甲基偶氮唑盐比色法( methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT)体外药敏试验对乳腺癌细胞药物敏感性的预测价值.方法 选取2010年1月至2016年7月在上海市奉贤区中心医院普外科住院行乳腺癌改良根治术或保乳术(术前未行放疗和化疗)的192例患者的新鲜肿瘤组织,术后病理均为浸润性导管癌.采用MTT法测定12种药物及3种化疗方案对192例乳腺癌患者的原代培养癌细胞的抑制水平及敏感率.结果 ( 1)乳腺癌细胞对12种药物敏感性从高到低依次为紫杉醇(taxol,PTX)＞表阿霉素(epirubicin,EPI)＞顺铂(DDP)＞5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)＞米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)＞长春新碱(vincristine,VCR)＞吡柔比星(pirarubicin,THP)＞异环磷酰胺(isophosphamide,IFO)＞卡铂(cisplatin,CBP)＞环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)＞甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)＞长春瑞滨(vinorelbine,NVB),3组化疗方案的敏感性从高到低依次为多西他赛/多柔比星/环磷酰胺(TAC)＞环磷酰胺/表柔比星/氟尿嘧啶( CEF)＞环磷酰胺/甲氨蝶呤/氟尿嘧啶(CMF). PTX、EPI、DDP 敏感率即对药物敏感的标本例数占总例数的百分比较高,分别为 54%(104/192)、42%(81/192)和37%(71/192). (2)DDP、CBP及MIT在Ⅲ期乳腺癌中的抑制率要高于Ⅰ、Ⅱ期,差异有统计学意义(F值分别为11. 14、4. 303、3. 182,P均＜0. 05). (3)HR(－)乳腺癌的敏感率要高于在HR(+)乳腺癌,PTX、EPI、THP、MIT在HER-2(+)乳腺癌的敏感率要高于在HER-2(－)乳腺癌.结论 MTT法作为一种应用广泛的药敏实验方法,对乳腺癌新辅助化疗筛选敏感药物、选择临床化疗方案有一定的参考价值. PTX、EPI、DDP对乳腺癌细胞较其他药物敏感.按体外药敏结果进行化疗,化疗有效率的提高以及因无效而更改化疗方案的比例降低.
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低剂量脉冲超声波对培养细胞的生物学效应
目的研究不同时间的低剂量脉冲超声波刺激对细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法采用MTT法测定成纤维细胞增殖情况,Annexin V法测定成纤维细胞和肿瘤MiaPaCa-2细胞的凋亡情况.结果 (1)在MTT法测定细胞活性中,细胞培养液不含FCS时,超声波刺激时间为6 min、11 min和20 min的剂量组,其吸光光度值较对照组都有显著性增高,且差异具有统计学意义(均P＜0.01),其细胞增殖峰值在11 min.细胞培养液含5%FCS时,超声波刺激不同时间的剂量组的吸光光度值较对照组亦有显著性增高,并具统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).(2)低剂量脉冲超声波刺激人皮肤成纤维细胞及肿瘤细胞超过一定时间后,少量细胞开始出现凋亡,且随着刺激时间的延长,凋亡细胞数增多,凋亡程度也逐渐加重.其中超声波刺激时间为60 min、80 min和100 min剂量组的细胞凋亡数与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论短时间低剂量脉冲超声波刺激能促进细胞增殖,超过一定时间则会抑制细胞生长,甚至引起细胞凋亡.
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新型医用无镍不锈钢(BIOSSN4)的细胞毒性评价
目的:评价新型医用无镍不锈钢(BIOSSN4)的细胞毒性.方法:将BIOSSN4的浸提液与体外培养的小鼠成纤维细胞L929接触后,进行MTT实验来评定材料的细胞毒性,并与传统的医用316L不锈钢的生物学性能相比较.结果:BIOSSN4对细胞增殖的抑制作用小于316L不锈钢组,统计学分析结果显示:两种金属材料与阴性对照组的吸光度值之间的差异无统计学意义(P＞0.05),与阳性对照组之间的吸光度值之间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论:BIOSSN4无镍不锈钢具有微弱的细胞毒性,符合临床应用要求,为其应用提供了一定的生物学依据.
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血管内皮生长因子对血管内皮细胞增殖及DNA合成的影响
目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)诱导血管增生性疾病中血管生成的作用机制.方法取体外培养的人脐静脉内皮细胞系ECV 304细胞,用MTT法和3H-TdR掺入法观察VEGF对ECV 304细胞增殖及DNA合成的影响.结果 VEGF对ECV 304细胞增殖及DNA合成均有明显刺激作用,且均呈剂量依赖性关系.结论 VEGF可能通过刺激血管内皮细胞增殖及DNA合成,促进血管生成.在血管增生性疾病中可能起重要促进作用.
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复方牡蛎根管充填糊剂的体外细胞毒性研究
目的:评价根管充填材料复方牡蛎糊剂的细胞毒性.方法:将根管充填材料的粉剂及粉液固化物分别制备成不同含量(50mg/ml、100mg/ml、200mg/ml)的浸提液作为试验组,RPMI1640培养液作为阴性对照组,应用V79细胞作为实验细胞;各组分别在细胞传代后培养的第2、4、7天时间段以倒置显微镜观察V79细胞的形态及增殖情况,并用MTT法测得各组在各个时间段的吸光度值,应用SPSS12.0软件包对数据进行统计学分析,评价材料的细胞毒性.结果:各实验组在细胞传代后培养的第2、4、7天,镜下观察细胞数量逐渐增多,呈多角形,汇集成群,与阴性对照组无显著差异;各实验组的吸光度值在各个时间段与阴性对照组均无显著性差异(P＞0.05),且随培养时间的延长,吸光度值增大.结论:实验显示,复方牡蛎根管充填糊剂无细胞毒性.
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白介素-1β对原代培养海马神经元毒性的研究
目的 探讨IL-β对体外培养的海马神经元活性及合成和分泌脑源性神经营养因子(BDNF)的影响.方法 采用SD新生鼠进行海马神经元原代培养.培养7d的细胞以细胞免疫化学法枪测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,计算阳性细胞率.实验分IL-β为0ng/ml的正常组和IL-β为5 ng/ml、10ng/ml、20ng/ml 3个实验组,进行海马神经元无血清培养48 h.采用甲基噻唑基四唑(MTT)试验检测细胞活性,ELISA法检测培养上清BDNF的含量.结果 NSE细胞免疫化学鉴定显示阳性细胞达到90%以上;IL-1β降低体外培养的海马神经元活性,各剂量组按浓度在590nm波长处检测OD值为(0.5585±0.2407; 0.4295±0.1401; 0.4191±0.1050),与正常组(0.9462±0.2972)比较,差异具有显著性(分别为P<0.05,P<0.01,P<0.01 ANOVA);IL-1β降低体外培养的海马神经元合成和分泌BDNF水平,各剂量组显著BDNF含量分别是[(8.65±0.71)pg/ml,(8.90±0.35)pg/ml,(7.90±0.35)pg/ml],与正常组(12.40±1.77)pg/ml比较差异具有显著性(均P<0.05 ANOVA).结论 IL-1β可导致体外培养海马原代神经元的损伤,其机制可能与海马神经元合成和分泌BDNF的减少有关.
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二乙酰二脱水卫矛醇抗瘤作用的实验研究
目的探讨二乙酰二脱水卫矛醇(1,2:5,6-Dianhydro-3,4-diacetylgalactitol,DADAG)的体内外抗肿瘤作用.方法用MTT法观察DADAG对人肿瘤细胞株的抗增殖作用;以小鼠脑内移植艾氏腹水癌(Ehrlich ascites carcinoma, EAC)和DBA/2小鼠脑内移植白血病L1210为移植瘤模型,观察DADAG的体内抗瘤效果.结果 DADAG对HL60细胞和K562细胞有较强的抑制作用,IC50值分别为3.7μ*ml-1和25.5μg*ml-1.DADAG的高剂量(10.0mg*kg-1)对小鼠脑内移植EAC有一定的抑制作用,对小鼠的生存期延长率(increase of life span,ILS)是30%(P＜0.05);而DADAG的低剂量6.4mg*kg-1、中剂量8.0mg*kg-1和高剂量10.0mg*kg-1对小鼠脑内移植白血病L1210均有明显的抑制作用,ILS分别为35%、47%和55%(P值均＜0.01).结论 DADAG有较强的体内外抗瘤作用.Ζ
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白介素-2治疗晚期肺癌临床应用剂量与疗效的关系
目的:为了探讨基因重组白介素-2(rIL-2)治疗肺癌临床应用剂量与疗效的关系.方法:采用临床观察和体外实验(MTT)两个途径观察rIL-2不同剂量的效应变化.结果:显示rIL-2的剂量与诱导活性呈非线性关系,临床观察与体外MTT实验结果相符.结论:提示临床应用rIL-2时应注意,不是rIL-2剂量越大效果就一定越好,而应根据用药部位和用药途径,来选择合适的剂量.
关键词： 基因重组白介素-2(rIL-2) 肺癌 MTT试验 剂量 疗效 -
有机溶剂对宫颈癌Hela细胞增殖的影响
目的:研究有机溶剂对宫颈癌Hela细胞增殖的影响.方法:运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验、姬姆萨染色等方法,研究乙醇、DMSO及两者不同浓度组合对人体子宫颈癌Hela细胞增殖的影响,分析中药促肿瘤细胞凋亡研究中常用有机溶剂造成的背景误差.结果:乙醇浓度30%以上、DMSO浓度50%以上处理均能显著抑制Hela细胞增殖(P＜0.01);40%乙醇+60%DMSO、30%乙醇+70%DMSO组合的抑制作用与对照组比较差异不显著(P＞0.05),且两个组合对中药均具有较好的溶解性.结论:有机溶剂本身对Hela细胞增殖具有抑制作用,且存在剂量-效应关系;进行适当的溶剂组合能显著降低背景误差.
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香茶菜免疫活性成分的筛选研究
目的:以药理评价为导向,分离香茶菜中具有免疫活性的部位.方法:以有丝分裂原伴刀豆蛋白A(ConA)活化小鼠脾脏T淋巴细胞,采用噻唑盐(MTT)实验方法,体外检测香茶菜提取物对淋巴细胞增殖反应的影响,筛选具有免疫活性的有效部位.结果:香茶菜具有免疫增强作用的部位是FA、FC;而FB和FD则在不同浓度下有增强与抑制的不同作用.从FB中进一步分离得到的FB-1和FB-2以免疫增强作用为主,而FB-3和FB-4则以免疫抑制作用为主.结论:香茶菜中含有免疫活性成分.
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补骨脂中活性成分的提取分离与抗癌实验研究
目的:对补骨脂进行化学成分和抗癌活性研究.方法:采用柱层析对补骨脂氯仿提取物进行分离,通过理化常数和光谱分析鉴定化合物结构,并通过形态学、MTT试验对其抑制人胃癌细胞BGC-823的增殖进行深入研究.结果:从氯仿提取物中分离得到2个化合物,分别鉴定为补骨脂素(psoralea,Ⅰ)和异补骨脂素(Isopsoralea Ⅱ);两种化合物对人胃癌细胞BGC-823的半数抑制浓度(IC50)分别为5.82 μg/ml和148.8 μg/ml.结论:化合物Ⅰ,Ⅱ从补骨脂中的分离得率分别为0.048%和0.11%,并对人胃癌细胞BGC-823的生长有较强的抑制作用.
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5-FU持续和间歇处理对 Bel-7402 肝癌细胞株的抑制作用
目的：评价体外 5-FU持续和间歇处理对 Bel-7402肝癌细胞株的生长抑制作用。方法：体外培养 Bel-7402肝癌细胞株，用一系列不同浓度的 5-FU对 Bel-7402肝癌细胞株分别进行每天 24小时持续处理及 2小时间歇处理， 4天后进行 MTT试验，检测肿瘤细胞的生长抑制率，对两组的 IC50进行比较。结果： 5-FU处理浓度依次 10.0 μ g/L、 25.0 μ g/L、 50.0 μ g/L、 75.0 μ g/L 、 100.0 μ g/L、 250.0 μ g/L、 500.0 μ g/L、 750.0 μ g/L、 1 000.0 μ g/L、 2 500.0 μ g/L、 5 000.0 μ g/L、 7 500.0 μ g/L、 10 000.0 μ g/L、 20 000.0 μ g/L持续处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为 1.34％、 2.01％、 7.21％、 10.37％、 18.64％、 29.96％、 35.06％、 43.35％、 50.66％、 87.63％、 93.63％、 94.46％、 99.27％、 99.35％， IC50是 991.7μ g/L。 5-FU处理浓度依次 120.0 μ g/L、 300.0 μ g/L、 600.0 μ g/L、 900.0 μ g/L、 1 200.0 μ g/L、 3 000.0 μ g/L、 6 000.0 μ g/L、 9 000.0 μ g/L、 12 000.0 μ g/L、 18 000.0 μ g/L、 60 000.0 μ g/L、 90 000.0 μ g/L、 120 000.0 μ g/L、 240 000.0 μ g/L 2小时间歇处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为 1.32％、 1.78％、 2.01％、 2.89％、 3.57％、 5.94％、 8.30％、 10.36％、 15.25％、 17.27％、 25.95％、 32.63％、 43.66％、 67.81％， IC50为 146 600μ g/L，为持续处理组的 147 8倍。结论：低浓度的 5-FU持续处理较高浓度的 5-FU间歇处理对 Bel-7402肝癌细胞有更强的抑制作用。
关键词： 5-氟尿嘧啶 BEL-7402肝癌细胞株 MTT试验 -
体外药敏实验指导下的乳腺癌术后辅助化疗
[目的]观察乳腺癌组织对常用的化疗药物的敏感程度,乳腺癌患者的临床及病理情况与肿瘤组织的体外药物敏感性是否相关,并根据药敏结果,制订出术后化疗方案,并与经验化疗方案作随机对照,观察能否提高生存率.[方法]1996年3月至2001年9月在中山大学肿瘤医院胸外科治疗的108例乳腺癌患者被随机分为体外药敏实验组52例和经验对照组56例.实验组病人的术后肿瘤标本行四唑蓝快速比色(MTT)法体外药敏实验,并在术后根据结果选择敏感药物组成方案进行化疗,对照组病人不行体外药敏实验,按经验选择化疗方案.体外药敏实验采用滤纸支持组织块培养、MTT染色图像分析作终点测定的方法,测定选择阿霉素(ADM),5-氟尿嘧啶(5-FU),长春新碱(VCR),丝裂霉素C(MMC),长春碱酰胺(VDS),顺铂(DDP),鬼臼乙叉甙(VP-16),博莱霉素(BLM),噻替派(TSPA),甲氨喋呤(MTX)10种化疗药物对乳腺癌组织的抑制率,并对两组的患者进行生存分析.[结果]在MTT体外药敏实验中,ADM,MMC,VDS,DDP,TSPA,MTX对肿瘤组织的平均抑制率均＞30%,优于5-FU,VCR,VP-16和BLM.乳腺癌患者不同的月经状态、雌激素受体(ER)状态、孕激素受体(PR)状态、腋窝淋巴结状态、临床分期和病理类型与乳腺癌组织在体外对化疗药物的敏感性无明显关系.在生存分析中,实验组3年总生存率为83%,对照组为71%,两组比较无显著性差异(P＞0.05).[结论]在MTT体外药敏实验中,ADM,MMC,VDS,DDP,TSPA,MTX为比较敏感的药物.乳腺癌患者不同的临床和病理情况与乳腺癌组织在体外对化疗药物的敏感性无明显关系.体外药敏实验组的3年总生存率与经验对照组相比未发现明显的优势,需要更长时间的随访观察及更深入的研究.
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防己诺林碱联用紫杉醇对耐药卵巢癌SKOV3/ADM细胞作用机制的初步研究
目的 评价防己诺林碱调控紫杉醇对耐药卵巢癌SKOV 3/ADM细胞多药耐药的作用.方法 采用MTT法和细胞摄取研究防己诺林碱调控紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞多药耐药的作用.结果 细胞生长抑制试验表明,紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞耐药明显.0.5、1和 5 μg·mL-1浓度的防己诺林碱分别与紫杉醇联用后,紫杉醇对细胞的半数抑制浓度(IC50)降为(0.542±0.117)、(0.924±0.153)和(1.931±0.375)μg·mL-1,耐药逆转倍数 If 分别为16.1、9.4和4.5倍,与单用紫杉醇相比差异有统计学意义(P<0.05).细胞摄取试验研究表明,联用防己诺林碱浓度达到0.5 μg·mL-1及以上时,能够显著增加紫杉醇的细胞摄取(P<0.05).结论 防己诺林碱是潜在的逆转紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞多药耐药候选活性化合物.
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人脑胶质瘤细胞的原代培养及生长活性观察
目的 研究人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,观察培养细胞的生长活性与肿瘤级别之间的关系.方法 用消化培养法原代培养24例人脑胶质瘤细胞,酶消化法+振荡贴壁法+机械划除法纯化,增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色及甲基噻唑基四唑(MTT)法观察培养细胞的生长活性.结果 20例原代培养成功,第4代以后肿瘤细胞纯度达98%以上,PCNA、MTT法显示肿瘤细胞的生长活性与肿瘤级别成正比.结论 采用消化培养法可成功培养原代胶质瘤细胞,酶消化法+振荡贴壁法+机械划除法的纯化方法可获得较高的肿瘤细胞纯度;肿瘤细胞的生长活性与肿瘤的恶性程度有关,离体细胞的生长活性可作为判断肿瘤恶性程度的一个指标;检测细胞生长活性MTT法比PCNA染色更具敏感性.
关键词： 胶质瘤 原代培养 增殖细胞核抗原(PCNA) MTT试验 -
国产无机三氧化物聚合物的生物相容性研究
目的:评价新材料国产无机三氧化物聚合物(MTA)的生物相容性,以判断所制材料是否满足相应的牛物安全性标准,并与进口MTA进行对比.方法:应用扫描电镜(SEM)观察新材料国产MTA的表面形貌;通过MTY法检测细胞相对增殖率,对材料的细胞毒性进行分级评价,并与进口MTA进行比较;利用SEM观察体外培养的细胞在材料表面黏附与增殖情况.结果:MTY结果显示国产MTA与进口MTA两组数据差异显著(P
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Stathmin基因表达与肿瘤化疗药物敏感性的关系
目的:探讨8种肿瘤细胞对长春新碱(vincristine, VCR)和泰索帝(docetaxel, DOC)两种化疗药物的敏感性以及该敏感性与肿瘤细胞内Stathmin基因表达之间的关系. 方法:采用MTT法和形态学观察,根据两种药物对细胞的相对抑制率,分析8种肿瘤细胞对两种药物的敏感情况;应用实时荧光定量PCR技术分析比较上述细胞Stathmin基因表达情况. 结果: 8种肿瘤细胞对VCR的敏感程度(相对抑制率)依次为:骨肉瘤细胞9607,58%,9901, 56%;宫颈癌细胞Hela, 37%;肝癌细胞HHCC, 34%;肺癌细胞A549,31%;喉癌细胞Hep-2,17%;胃癌细胞MKN45, 16%;肝癌细胞7721,15%. 对DOC敏感程度依次为: 9607, 48%; Hela,46%;9901,44%;Hep-2, 34%;A549, 31%;MKN45,15%;HHCC, 12%;7721, 3%;Stathmin基因在各肿瘤细胞中具有不同程度的表达,其表达强度与各肿瘤细胞对两种药物的敏感性有关. 结论:肿瘤细胞中Statnmin基因表达水平与其化疗药物敏感程度有关,检测Statnmin基因表达水平对临床化疗药物的选择有一定的指导意义.
