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异硫氰酸苯已酯抑制T细胞白血病Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号通路的研究
本研究目的在于探索研究异硫氰酸苯己酯(PHI)在体外对人类T细胞白血病Jurkat细胞Wnt/β联蛋白(catenin)信号通路及组蛋白调控、细胞凋亡和增殖的影响.用MTT方法检测PHI作用后Jurkat细胞的增殖率变化；用流式细胞术观察细胞凋亡；用Western blot观察Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号转导通路相关蛋白β-catenin、TCF、c-myc、cyclinD1水平的变化,以及组蛋白甲基化H3K4,H3K9、乙酰化H3,H4的变化.结果表明,PHI可抑制Jurkat细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性,48 h的IC50约为20 μmol/L; PHI处理3h后上调组蛋白乙酰化H3、H4和组蛋白甲基化H3K4,下调组蛋白甲基化H3K9,7h时作用更明显；PHI作用3 hβ-catenin表达水平无变化,7h后Wnt/β-catenin信号转导通路β-catenin及其周期相关基因TCF、c-myc、cyclinDI表达均下降.结论:PHI抑制Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号转导通路,调控组蛋白甲基化、乙酰化,从而诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖.
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转染B7-1基因的Raji和Jurkat细胞诱导细胞因子mRNA表达的研究
为探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用,利用脂质体介导的转基因技术将B7基因导入恶性血液病细胞系Raji和Jurkat细胞,用流式细胞术检测转基因前、后B7-1基因的表达,用RT-PCR检测T细胞表面细胞因子IL-2,IL-4和IFN-γ mRNA的表达及这3种细胞因子在转基因后4,12,20及48小时的时间动态变化.结果发现,B7+Raji细胞可诱导T细胞分泌细胞因子IL-2,IL-4和IFN-γ,B7+Jurkat细胞可诱导IL-2和IFN-γ的分泌,而B7-Raji细胞及B7-Jurkat细胞均未诱导细胞因子的分泌.IL-2和IL-4在T细胞活化4小时即可检测到,IFN-γ在T细胞活化12小时可检测到,在20小时出现峰值.结论:B7-1基因的导入可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-1在T细胞活化和分化中起着更主要的作用.
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Jurkat细胞转染外源HCAP1基因后的增殖抑制
HCAP1基因系人类染色体17p13.3区带克隆的新肝癌相关基因.已发现人类多种肿瘤存在此区带的杂合性缺失.本研究应用脂质体介导法将HCAP1基因转染T淋巴瘤Jurkat细胞系,经G418筛选,获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞.用台盼蓝拒染试验计数活细胞,绘制生长曲线,进行软琼脂集落形成试验.结果显示:与转染空载体质粒pBK/CMV的细胞比较,转染外源HCAP1基因的Jurkat细胞增殖速率明显减慢,细胞倍增时间延长,在软琼脂上的集落形成能力下降(P<0.01).结论:外源HCAP1基因产物对Jurkat细胞的增殖有明显的抑制作用.
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Tax基因表达细胞系的建立及其生物学活性的初步研究
本研究旨在建立成人T细胞白血病病毒-1(HTLV-1)的tax基因表达细胞系,并对其生物学特性进行初步研究.利用脂质体将真核表达载体pCMV-tax和空载体pCMV-neo-Bam转入T淋巴细胞系(JurkatE 6-1)细胞,用G418筛选出稳定表达tax基因的T细胞系TaxP和表达tax阴性细胞系TaxN.用RT-PCR检测LAT、SLP-76、ZAP-70和NF-kB(p65)mRNA的表达.将pNF-kB-Luc报告基因质粒分别转染入TAX蛋白阳性和空载细胞后,检测细胞内NF-kB的活性.用流式细胞仪检测CD25,CD69分子的表达.结果表明:用G418筛选出稳定转染tax基因的Jurkat细胞株,经检测RNA转录水平获得了tax稳定表达的转染细胞;RT-PCR显示,与TaxN细胞LAT相比TaxP细胞的ZAP-70,SLP-76和NF-kB表达增高(P＜0.05);pNF-kB-Luc报告基因检测显示,TaxP细胞中NF-kB的活化程度明显提高(P＜0.01);流式细胞仪检测显示,TAX能够促进T细胞表面CD69,CD25分子的表达.结论:建立了tax基因表达细胞系,TAX蛋白能够促进T细胞的活化和激活NF-kB通路.
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三氧化二砷对NB4及Jurkat细胞系端粒酶活性的抑制效应
为了探讨三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞系NB4及Jurkat细胞端粒酶活性的调节作用和机制,采用MTT、基因组DNA电泳、蛋白/DNA双参数流式细胞术,端粒重复扩增(TRAP)-SYBR Green Ⅰ染色及RT-PCR等方法研究了As2O3对两种细胞的增殖及端粒酶活性的影响.研究发现,随着As2O3作用时间的延长,NB4及Jurkat细胞增殖明显受到抑制,DNA电泳出现"梯状"条带;流式细胞术检出亚G1峰,细胞周期阻滞于G1和G2/M期,端粒酶活性显著降低,部分细胞周期及凋亡相关的调控蛋白的表达发生变化.结论:As2O3在抑制NB4及Jurkat细胞增殖和诱导其凋亡过程中导致端粒酶的活性下调,细胞周期及凋亡相关蛋白的表达改变可能参与了部分作用机制.
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几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡的研究
本研究评价几种临床常用的抗肿瘤药物顺铂(CDDP)、羟基喜树碱(HCPT)、高三尖杉酯碱(HHT)和米托蒽醌(MIT)在白血病治疗中的作用,并分析其在诱导Jurkat细胞凋亡的作用,为白血病的临床治疗提供新的理论依据和思路.用Annexin V/PI双参数流式分析方法,检测这几种抗肿瘤药物诱导Jurkat细胞凋亡和死亡的效应.结果表明:MIT和HCPT在加药处理早期4小时 (P＜0.05)和后期第8小时(P＜0.05)都有明显的诱导Jurkat细胞凋亡的效应.HHT有明显诱导Jurkat细胞凋亡的效果,但各剂量组之间无显著差异.CDDP在高浓度和长时间作用时才显示较弱的细胞凋亡效应,明显弱于前3者.各种药物作用后均未观察到明显的细胞死亡效应.结论:MIT诱导Jurkat细胞凋亡的作用显著,Annexin V流式分析方法可作为一种可靠的临床药物筛选的方法.
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催乳素刺激Jurkat细胞热休克蛋白90的表达及地塞米松的干预作用
目的:探讨催乳素刺激下Jurkat细胞的热休克蛋白(HSP90)的表达状况以及地塞米松对这种表达的影响.方法:以四组不同浓度催乳素(25、50、100、200 ng/ml)刺激Jurkat细胞,采用RT-PCR和Western blot检测刺激前后HSP90的表达水平;另将四种不同浓度的地塞米松(10-9～10-6 mol/L)和高浓度催乳素(100 ng/ml)与Jurkat细胞共同孵育,同法检测地塞米松干预后HSP90的表达水平.结果:所有浓度催乳素刺激Jurkat细胞在mRNA和蛋白质水平表达的HSP90均显著高于空白对照组(P＜0.05),且表达水平随刺激浓度增加而升高,但当浓度高于100 ng/ml以上时升高不明显.加入不同浓度地塞米松和高浓度催乳素孵育的Jurkat细胞表达HSP90水平与对照组比较有显著下降(P＜0.05),且随地塞米松浓度升高而降低.结论:催乳素可刺激Jurkat细胞HSP90的表达,而地塞米松可抑制此效应且有剂量依赖关系.
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去甲斑蝥素对白血病Jurkat细胞增殖的影响
目的:观察不同浓度去甲斑蝥素(NCTD)对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat增殖的影响.方法:体外培养的Jurkat细胞,用0、5、10、20、40 mg/LNCTD作用6、12、24、48、72h后,通过倒置显微镜观察细胞形态、密度变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,确定其佳作用浓度及时间.然后将细胞分为NCTD组、长春新碱组、NCTD+长春新碱组,作用24、48、72h后观察细胞形态、密度变化,MTT法检测细胞增殖抑制率.结果:倒置显微镜显示:随NCTD浓度增加、作用时间延长,细胞形态不规则,胀大、固缩,分布稀疏,大量死亡;MTT法显示:随NCTD浓度增加、作用时间延长,细胞增殖抑制率渐升高,20 mg/L作用72 h时高(59.24%).NCTD组与长春新碱组比较差异无统计学意义(P＞0.05),NCTD+长春新碱组抑制率(77.40%)明显高于NCTD组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:NCTD可以浓度和时间依赖性方式抑制Jurkat细胞的增殖,与长春新碱联合后作用增强.
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催乳素对Jurkat细胞CD154表达的影响
经RT-PCR法证实Jurkat细胞株表达催乳素(PRL)受体mRNA.发现在植物血凝素(PHA)和重组人PRL(rhPRL)共刺激下,Jurkat细胞CD154表达量明显增加.推测PRL与其受体结合,增加CD154表达而发挥免疫调节作用.
关键词： 催乳素 Jurkat细胞系 CD40配体(CD154抗原) -
阿糖胞苷刺激Jurkat细胞B7和细胞因子mRNA表达
目的 探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用.方法 阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子在Ara-C刺激Jurkat细胞后12,24,48,72,96,120,144 h时间动态变化.结果 经Ara-C刺激Jurkat细胞后,均能使B7-1、B7-2表达上调,并且可诱导T细胞分泌细胞因子IL-3和IFN-γ,而未经Ara-C刺激的Jurkat细胞,无B7-1、B7-2的表达,均未诱导细胞因子的分泌.IL-3在T细胞活化12 h即可检测到,在48 h表达量高,IFN-γ在T细胞活化24 h即可检测到,在72 h表达量高.结论 Ara-C可有效地刺激Jurkat细胞B7的表达,有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞.B7在T细胞活化中起着重要作用.
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稳定表达Tax基因HTLV-1细胞系的建立
目的 摸索稳定转染Tax基因的细胞转染的实验室条件,并筛选出稳定表达Tax蛋白的T细胞模型.方法 利用脂质体将真核表达载体pCMV-tax和空载体pCMV-neo-Bam转入T淋巴细胞系(JurkatE6-1)细胞,用G418筛选出稳定表达Tax基因的T细胞系TaxP和表达tax阴性细胞系TaxN.结果 用G418筛选出稳定转染Tax基因的Jurkat细胞株,经检测RNA转录水平获得了Tax稳定表达的转染细胞.结论 建立了Tax基因表达细胞系.为进行下一步的相关研究奠定了基础.
关键词： 成人T细胞白血病病毒-1 TAX蛋白 Jurkat细胞系 -
RNAi沉默CD59对急性T系白血病Jurkat细胞株增殖的影响
目的 运用RNAi慢病毒沉默CD59的表达,观察其对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响.方法 构建CD59 RNAi-EGFP融合蛋白慢病毒载体,转染急性T系白血病Jurkat细胞株,筛选出稳定转染的细胞系,空病毒组为阴性对照,未处理的Jurkat细胞系作为空白对照;荧光显微镜和流式细胞仪观察各组的细胞转染效率;ELISA检测各组细胞CD59的表达情况;RT-PCR检测各组CD59基因以及凋亡相关基因Bcl-2/Bax mRNA的表达;CCK8表达检测细胞增殖效率的改变;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.结果 荧光显微镜和FCM观察转染效率在90％以上;ELISA结果显示实验组细胞CD59蛋白表达降低;RT-PCR结果显示实验组CD59、Bcl-2 mRNA表达水平降低(P＜0.05),Bax mRNA表达水平升高(P＜0.05);CCK8结果显示实验组细胞增殖效率明显降低(P＜0.05);流式细胞仪结果显示沉默CD59的表达能够促进细胞凋亡(P＜0.05).结论 沉默D59基因表达可抑制急性T系白血病Jurkat细胞株的增殖能力并诱导细胞凋亡,为临床急性T系白血病的治疗提供了新靶标、新思路.
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己烯雌酚诱导T细胞肿瘤Jurkat细胞系凋亡中转录因子Oct-1的表达
目的研究己烯雌酚对T细胞肿瘤的细胞凋亡诱导作用,以及调亡过程中转录因子Oct-1的表达.方法采用DNA梯形片段化,荧光染色流式细胞技术分析细胞凋亡,以电泳泳动度迁移率法(EMSA)检测Oct-1的表达.结果己烯雌酚(5.0mg/L)可诱导T细胞出现细胞凋亡,并有典型的DNA梯形片段化,10μg己烯雌酚诱导12h后,凋亡过程中细胞数达30%以上.己烯雌酚诱导T细胞凋亡过程与Oct-1转录因子的表达有关.结论己烯雌酚可诱导T细胞肿瘤凋亡,并与转录因子Oct-1的表达有关.
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Syncytin慢病毒干扰载体及syncytin沉默Jurkat细胞系的建立
目的 构建PGC-LV-syncytin慢病毒载体并建立Syncytin基因表达下调的Jurkat细胞系.方法 利用RNA干扰序列软件设计并筛选有效干扰序列,将构建好的Syncytin表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒后感染Jurkat细胞,获得Syncytin稳定沉默的细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,分别使用Real time PCR和Annexin V-APC单染法结合流式细胞仪检测目的基因表达水平和细胞凋亡率.结果成功构建了具有Syncytin干扰效果的慢病毒载体及其稳定沉默的Jurkat细胞系.结论 该细胞系的构建为进一步研究Syncytin基因在白血病的功能提供了细胞模型.
关键词： RNA干扰 慢病毒载体 Syncytin基因 Jurkat细胞系
