首页 > 文献资料
-
Jurkat细胞转染外源HCAP1基因后的增殖抑制
HCAP1基因系人类染色体17p13.3区带克隆的新肝癌相关基因.已发现人类多种肿瘤存在此区带的杂合性缺失.本研究应用脂质体介导法将HCAP1基因转染T淋巴瘤Jurkat细胞系,经G418筛选,获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞.用台盼蓝拒染试验计数活细胞,绘制生长曲线,进行软琼脂集落形成试验.结果显示:与转染空载体质粒pBK/CMV的细胞比较,转染外源HCAP1基因的Jurkat细胞增殖速率明显减慢,细胞倍增时间延长,在软琼脂上的集落形成能力下降(P<0.01).结论:外源HCAP1基因产物对Jurkat细胞的增殖有明显的抑制作用.
-
肝癌相关基因HCAP1的定位克隆和初步功能研究
目的克隆和筛选位于染色体17p13.3缺失区内的肝癌相关基因.方法采用定位克隆的策略,通过PAC筛库和RACE(rapid amplification of cDNA ends)方法克隆新基因;通过多组织膜片Northern杂交分析其组织表达谱,Southern杂交分析其在肝癌组织DNA水平上的变化,然后通过克隆集落形成实验与MTS法测定细胞生长速度,初步筛选其作为肿瘤相关基因的可能性.结果克隆到一个基因HCAP1(HCC-associated protein1,先前又称HC56),GenBank登录号为AF177341.多组织膜片杂交显示该基因在多种组织中表达,其中胎盘、肝脏和肌肉中表达较高.Southern杂交结果显示HCAP1基因在肝癌组织中存在缺失,比例为25.3%;克隆集落形成实验与生长抑制率测定实验初步表明该基因能抑制肝癌细胞株Hep3B细胞的生长,抑制率为31.8%.结论HCAP1可能与肝癌的发生发展相关,是一个新的肝癌相关基因的侯选者.
-
转染外源HCAP1基因对Raji细胞化疗敏感性的作用
目的探讨外源HCAP1基因产物对B淋巴瘤/白血病细胞系Raji细胞化疗敏感性的作用.方法用脂质体介导法,把HCAP1基因转染Raji细胞,经G418筛选后,分别与化疗药物DNR(daunorubicin,柔红霉素)、VP16(etoposide,足叶乙甙)和VCR(vincristine,长春新碱)联合培养24小时,用苔盼兰拒染试验计数活细胞.结果转染HCAP1的Raji细胞,在不同浓度的DNR(0.01～10.0μg/ml)和VP16(5～80μg/ml)作用下,与转染空载体和未转染对照细胞比较,细胞活力的抑制作用明显增强(P<0.05)、IC50(半数抑制浓度)值明显降低;但与不同浓度的VCR(12.5～100μg/ml)作用,细胞活力的抑制和IC50值与对照细胞相似.结论 HCAP1过表达可明显增加Raji细胞对DNR、VP16作用的敏感性,但不能显著增加对VCR作用的敏感性.
-
HCAP1基因对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl - 2的作用
目的:研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的作用.方法:用脂质体介导的基因转移方法,把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中,用流式细胞术和Hochest 33258荧光染色检测细胞凋亡;用Westem blot检测外源HCAP1基因对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2蛋白表达的调节.结果:外源HCAP1基因导入Raji细胞24、48和96h后,细胞凋亡率增加.Western blot显示Bax/Bcl-2蛋白表达比值明显增高.结论:转染外源性HCAP1基因可诱导Raji细胞凋亡,使Bax/Bcl-2蛋白表达比例上调可能是HCAP1诱导凋亡的机制之一.
关键词： HCAP1基因 Raji细胞 细胞凋亡 Bax/Bcl-2蛋白
