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异硫氰酸苯已酯抑制T细胞白血病Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号通路的研究
本研究目的在于探索研究异硫氰酸苯己酯(PHI)在体外对人类T细胞白血病Jurkat细胞Wnt/β联蛋白(catenin)信号通路及组蛋白调控、细胞凋亡和增殖的影响.用MTT方法检测PHI作用后Jurkat细胞的增殖率变化；用流式细胞术观察细胞凋亡；用Western blot观察Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号转导通路相关蛋白β-catenin、TCF、c-myc、cyclinD1水平的变化,以及组蛋白甲基化H3K4,H3K9、乙酰化H3,H4的变化.结果表明,PHI可抑制Jurkat细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性,48 h的IC50约为20 μmol/L; PHI处理3h后上调组蛋白乙酰化H3、H4和组蛋白甲基化H3K4,下调组蛋白甲基化H3K9,7h时作用更明显；PHI作用3 hβ-catenin表达水平无变化,7h后Wnt/β-catenin信号转导通路β-catenin及其周期相关基因TCF、c-myc、cyclinDI表达均下降.结论:PHI抑制Jurkat细胞Wnt/β-catenin信号转导通路,调控组蛋白甲基化、乙酰化,从而诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖.
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异硫氰酸苯已酯抑制骨髓瘤细胞Notch信号表达的研究
为了研究异硫氰酸苯已酯(phenylhexyl isothiocyanate,PHI)在体外对骨髓瘤细胞RPM18226增殖抑制的分子机制,用不同浓度PHI与RPMI8226细胞共同孵育,用MTT比色法检测PHI处理后细胞增殖抑制;用DAPI染色现察PHI处理后细胞凋亡;Westem blot检测PHI处理后瘤细胞Notch1、Jagged2、BCL-2和P-Akt蛋白表达变化.结果显示,PHI在一定浓度范围内能抑制瘤细胞增殖,诱导瘤细胞凋亡,其抑制效应具有时间和浓度依赖性.PHI可以下调瘤细胞中Notchl和Jagged2蛋白的表达并呈时间和浓度依赖性,同时降低BCL-2和p-Akt的表达.结论:PHI在体外能够抑制骨髓瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡;细胞凋亡的发生与PHI抑制Notch信号及其下游靶基因p-Akt和BCL-2的表达有关,PHI可能成为新一代的Notch信号抑制剂,是一种潜在的骨髓瘤治疗药物.
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异硫氰酸苯已酯诱导骨髓瘤U266细胞P16基因去甲基化
目的 研究异硫氰酸苯己酯(PHI)对骨髓瘤U266细胞株P16基因的去甲基化作用并探讨其作用机制.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测U266 细胞经过PHI 处理后DNA 甲基转移酶DNMT1、DNMT3a 和DNMT3b基因的mRNA 的表达变化,用甲基化特异性聚合酶链反应检测PHI 作用前后U266细胞株P16 基因甲基化状态的变化.结果 使用不同浓度的PHI处理U266细胞72 h后,U266细胞表达DNMT1、DNMT3a、DNMT3b mRNA的水平明显降低并呈浓度依赖性.以不同浓度的PHI处理U266细胞10d后,P16基因的甲基化状态被逐渐逆转.结论 PHI 可能通过抑制DNA 甲基转移酶的表达水平诱导P16 基因产生去甲基化,使失活的抑癌基因重新激活,诱导瘤细胞凋亡.
