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B7基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌主动免疫
目的:研究B7基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌CTL的活化.方法:采用电击法将B7基因导入小鼠大肠癌细胞CMT93,G418筛选阳性克隆,免疫组化显示B7分子有高效表达,B7+CMT93(CMT93-B7)接种于C57BL/6小鼠背部皮下,其致瘤性显著下降(P＜0.01);CMT93-B7致敏的小鼠对野生型瘤细胞具有免疫保护作用(P＜0.05);用CMT93和CMT93-B7细胞分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞及致敏脾细胞,MTT法进行体外杀伤实验.结果:CMT93-B7诱导的CTL(cytotoxicTlymphocyte)对CMT93的杀伤活性显著高于野生型CMT93诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活性(P＜0.05),并且CMT93-B7诱导的CTL对CMT93-B7的杀伤率显著高于对野生型CMT93的杀伤率(P＜0.05).结论:B7分子有效地促进抗大肠癌CTL的活化,在CTL的效应阶段B7分子也发挥重要作用.
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阿糖胞苷刺激Jurkat细胞B7和细胞因子mRNA表达
目的 探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用.方法 阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子在Ara-C刺激Jurkat细胞后12,24,48,72,96,120,144 h时间动态变化.结果 经Ara-C刺激Jurkat细胞后,均能使B7-1、B7-2表达上调,并且可诱导T细胞分泌细胞因子IL-3和IFN-γ,而未经Ara-C刺激的Jurkat细胞,无B7-1、B7-2的表达,均未诱导细胞因子的分泌.IL-3在T细胞活化12 h即可检测到,在48 h表达量高,IFN-γ在T细胞活化24 h即可检测到,在72 h表达量高.结论 Ara-C可有效地刺激Jurkat细胞B7的表达,有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞.B7在T细胞活化中起着重要作用.
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转GM-CSF基因瘤苗联合B7基因治疗淋巴瘤的实验研究
用电穿孔法将粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达质粒导入RMA淋巴瘤细胞,筛选出高表达GM-CSF的细胞克隆(RMA-GM),再转入B7质粒,经过丝裂霉素处理后皮下接种C57小鼠,观察抗肿瘤免疫效果.结果 获得了高表达GM-CSF的小鼠T细胞淋巴瘤克隆RMA-GM,联合B7质粒电转染细胞接种C57小鼠后,出瘤时间比对照组延长,肿瘤生长速度减慢,生存期明显延长,90%小鼠长期生存.提示GM-CSF联合B7基因质粒转导的肿瘤瘤苗比单一基因转导有更好的抗肿瘤免疫效果.
关键词： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 B7基因 淋巴瘤 电转染 瘤苗 -
人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达
目的构建人共刺激分子CD80（B7-1）、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(Sart3）融合基因真核表达载体，并分别在原核和人成纤维细胞中表达.方法 采用RT-PCR技术，从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列(第1～1281 bp),此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位.然后将不含终止密码子的B7-1cDNA和Sart3 cDNA共克隆入真核表达载体pEGFP-N1,测定核苷酸序列确定重组成功后，分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞，利用流式细胞仪和Western blot检测B7和Sart3的表达.结果构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7Sart3/pEGFPN.测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列(NM_005191、NM_014706)一致，阅读框无改变.流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强，免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应,融合蛋白分子量与B7-Sart3-EGFP的预测分子量相当.结论成功构建真核表达载体B7Sart3/pEGFPN，并在人成纤维细胞中表达.为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础.
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B7修饰K562细胞来源的树突状细胞抗肿瘤作用的研究
目的探讨共刺激信号分子B7转化人白血病细胞株K562后,K562-B7在细胞因子作用下分化为树突状细胞(Dendritic cell,DC),K562-B7-DC的生物学特性以及介导的抗肿瘤免疫作用.方法构建重组真核表达质粒pcDNA3.1B7转化人白血病细胞株K562,获得单个细胞克隆.用K562-B7细胞株在GM-CSF、IL-4和IL-12的联合作用下分化为DC细胞,观察J562-B7-DC的生物学性质及其抗肿瘤的免疫功能.结果K562-B7-DC在GM-CSF、IL-4和IL-12的联合作用下能分化为DC细胞并能诱导出较强的同种混合淋巴细胞反应及CTL活性,且能分泌内源性IL-12、INF-γ.结论细胞因子联合诱生的K562-B7-DC能有效的执行其抗原提呈功能,同时协同T淋巴细胞发挥其抗肿瘤免疫作用.
