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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对HBV宫内感染婴儿的免疫调节作用
目的 观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对HBV宫内感染免疫失败婴儿的免疫调节作用.方法 宫内感染婴儿分为治疗组和对照组(均为20例),都给予乙肝疫苗10μg免疫用量,同一部位三角肌注射(疫苗注射时间按0、1、6方案),乙肝免疫球蛋白200IU臀部肌肉注射,20天1次,共3次.治疗组注射乙肝疫苗3天后,同一部位皮内注射GM-CSF 10μg/Kg.1岁时抽外周静脉血检测T淋巴细胞亚群的水平、血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平.结果 (1)治疗组CD4+T细胞百分数及CD4 +/CD8+比值高于对照组(t=11.67,P＜0.05;t=13.06,P＜0.05),CD8+百分数低于对照组(t=6.25,P＜0.05),两组比较差异均有显著意义.(2)患者外周血IFN-γ水平治疗组高于对照组(t=13.92,P＜0.05);IL-4水平与对照组相比,差异无统计学意义(t=1.30,P＞0.05).结论 GM-CSF可提高HBV宫内HBV感染免疫失败婴儿CD4 +/CD8+比值,并且调节Th1/Th2细胞因子比例平衡.
关键词： HBV 宫内感染 婴儿 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 CD4+/CD8+ -
重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子工程菌诱导条件的优化研究
目的:本实验用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)进行培养,探讨目的蛋白高表达量的诱导条件.方法:通过实验条件的优化确定了适合GM-CSF表达的诱导温度、诱导时间和培养基等.结论:带有GM-CSF的基因工程菌在30℃生长合适,培养5小时后42℃升温诱导5小时目的蛋白表达量高.
关键词： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 目的蛋白 诱导 -
Hp相关胃病脾胃虚实证候胃黏膜GM-CSF、RANTES表达研究
目的:课题组整体外周血研究提示粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、活化正常T细胞表达分泌调节物(RANTES)与脾胃湿热证相关;从局部胃黏膜进一步探讨其在幽门螺杆菌(Hp)相关胃病脾胃湿热证发病中的作用.方法:收集胃黏膜标本114份(包括慢性胃炎68例、消化性溃疡34例;脾胃湿热证83例、脾气虚证19例;健康受试者12名);以快速尿素酶和美兰染色进行Hp检测;HE染色评定炎性反应程度及活动度;Elivision plus定性定位检测GM-CSF、RANTES蛋白表达.结果:脾胃湿热证胃黏膜Hp感染率和程度以及炎性反应程度、活动性均较脾气虚证明显.Hp感染脾胃湿热、脾气虚证胃黏膜炎性反应程度及活动程度显著高于非感染者(P＜0.05).Hp感染脾胃湿热证炎性活动度重于脾气虚证,差异具有显著性(P＜0.05);且胃黏膜萎缩、肠上皮化生病理改变有较脾气虚证明显的趋势.GM-CSF、RANTES蛋白表达定位于胃黏膜上皮和腺体胞浆,Hp感染尤其脾胃湿热证高于非感染者.结论:Hp可能作为引发或加重脾胃湿热证的重要原因,其促使GM-CSF和RANTE表达并参与脾胃湿热“邪正交争”的亢奋状态,引起更为严重的炎性反应及活动性程度,并可能促使胃黏膜形成萎缩及肠上皮化生的病理改变,或许这正是Hp相关胃病炎性病理改变以脾胃湿热证更为严重的原因之一.
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GM-CSF在登革热病毒和丙型肝炎病毒DNA疫苗诱导的免疫应答中的作用
研究GM-CSF在DV、HCV等几种黄病毒DNA疫苗诱导的免疫应答中的作用,并分析其作为黄病毒DNA疫苗佐剂的可能性.构建各种真核表达质粒,抽提质粒DNA,分组免疫小鼠,通过ELISA及间接免疫荧光染色检测小鼠血清抗体的动态水平.DV1及DV2 prM/E核酸疫苗与GM-CSF质粒共接种的佐剂组小鼠血清抗体水平低于无佐剂的疫苗组,即GM-CSF显示了一定的免疫抑制作用,其中以DV1prM/E核酸疫苗更为显著；而在HCVC及E1蛋白核酸疫苗中,GM-CSF则具有一定免疫增强作用.GM-CSF作为疫苗佐剂,其作用具有复杂的多样性,因抗原的不同可能会呈现免疫提升或免疫抑制,因此选择其作为核酸疫苗佐剂时需慎重.
关键词： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 黄病毒 DNA疫苗 免疫增强 免疫抑制 -
血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子水平在糖尿病患者中的变化及其意义
为探讨血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)水平在糖尿病患者中的变化及其意义,用放射免疫法分析检测了89例2型糖尿病患者和86名正常健康人的血清GM-CSF水平,比较分析了2型糖尿病肾功能损害和合并感染患者的血清GM-CSF变化.结果表明,糖尿病组血清GM-CSF水平明显高于正常对照组(P＜0.01),肾功能损害和合并感染患者的血清GM-CSF水平明显高于单纯糖尿病组(P＜0.05).结论:血清GM-CSF水平检测对糖尿病患者肾功能损害和机体感染状况评价可能有益.
关键词： 细胞因子 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 糖尿病 -
加味射麻汤对哮喘豚鼠GM-CSF和ET水平的影响
用卵蛋白致敏诱发豚鼠哮喘模型,以放射免疫分析法测定经加味射麻汤治疗的动物肺组织和血浆中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和内皮素(ET)含量的变化.结果表明,模型组豚鼠肺组织GM-CSF(P＜0.05)、ET(P＜0.001)以及血浆中ET(P＜0.001)含量比对照组显著升高.加味射麻汤和地塞米松均能使哮喘豚鼠肺组织中GM-CSF、ET和血浆中ET含量下降.提示GM-CSF和ET参与了支气管哮喘的发病机制,而加味射麻汤的作用机理与调节GM-CSF和ET水平有关,表明该方药具有哮喘抗炎治疗的应用价值.
关键词： 哮喘 动物模型 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 内皮素 加味射麻汤 -
分泌型CTLA-4融合恶性疟原虫核酸疫苗联合GM-CSF增强小鼠免疫反应
目的 研究分泌型细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)融合恶性疟原虫核酸疫苗联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)免疫对小鼠体液免疫和细胞免疫反应的影响.方法 将疟原虫抗原编码序列与小鼠CTLA-4胞外区序列拼接构建真核表达载体VR1012-sES312-CTLA,用Western blot检测转染HEK293细胞上清液蛋白表达.VR1012-sES312-CTLA和小鼠GM-CSF的真核表达载体共同电穿孔法免疫 Balb/c小鼠,ELISA检测疟疾疫苗特异性抗体IgG效价以及ELISPOT方法分析细胞因子IFN-γ和IL-4的表达水平.结果 疟疾DNA疫苗体系中引入CTLA-4分子以及GM-CSF佐剂能显著增强疫苗的特异性免疫反应.VR1012-sES312-CTLA+GM-CSF联合免疫小鼠,抗体滴度比单纯的疟疾DNA疫苗VR1012-ES312相比提高190倍(P<0.001).结论 将疟疾DNA疫苗改造为树突细胞靶向型,并在免疫体系中引入GM-CSF分子佐剂,显著增强了小鼠体液和细胞免疫效力.此结果为有效提高疟疾DNA疫苗免疫应答水平提供了新的思路.
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人外周血及脐血树突状细胞的体外分离培养
取正常人外周血或脐血,经淋巴细胞分离液分离,取中间白膜层,培养板中进行粘附,粘附细胞加培养液和细胞因子(外周血加GM-CSF和IL-4,脐血加GM-CSF和TNF-α)培养,对其形态、表型和功能分别进行鉴定和测定.结果表明约经过1周左右培养,悬浮细胞表现为典型的DC形态,带有毛刺样凸起,经DC单克隆抗体染色后用流式细胞仪测定脐血72%为DC,外周血93%为DC,并且可以刺激同种异体淋巴细胞的增殖反应.所以通过这样的不同细胞因子组合可以从人外周血和脐血中诱导培养出大量的DC细胞,为其进一步的研究奠定了基础.
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卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv/mGM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定
目的构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv和鼠GM-CSF融合蛋白(6B11mGM),以观察其在动物体内诱导的特异性免疫反应,为卵巢癌抗独特型疫苗应用于临床提供依据. 方法用DNA重组技术,将mGM-CSF连于单链抗体6B11ScFv羧基末端,构建重组质粒pET30-6B11mGM,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,以包涵体形式获高效表达,超声破碎细菌细胞获得包涵体,用8mol.L-1尿素溶解包涵体后直接稀释复性,SDS-PAGE分析蛋白纯度,ELISA分析技术和细胞增殖实验测定融合蛋白的抗体和细胞因子活性. 结果复性蛋白纯度达90%以上.采用氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度为1mmol.L-1,还原型谷胱甘肽(GSH)浓度为5mmol.L-1,10℃复性48h,复性率达36%.表达的融合蛋白分别能与COC166-9单抗和大鼠抗小鼠GM-CSF单抗特异结合,并能刺激mGM-CSF依赖株NFS-60细胞增殖. 结论以包涵体表达的融合蛋白6B11mGM保留了两种蛋白的活性,为研究融合蛋白在体内的免疫功能提供了基础.
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日本血吸虫DNA疫苗proVAX/GMCSF-SjFer的构建及免疫保护性效果的观察
目的 构建日本血吸虫铁蛋白proVAX/GMCSF-SjFer DNA疫苗,观察其诱导小鼠产生抗攻击感染的免疫保护性效果. 方法 小量制备pGMC/SjFer重组质粒DNA,PCR扩增GMCSF-SjFer基因,将此目的 片段亚克隆到真核表达载体proVAX中,构建重组真核表达质粒proVAX/ GMCSF-SjFer.雌性昆明鼠随机分为对照组、免疫组和空质粒组.空质粒组小鼠股四头肌注射proVAX,免疫组同法注射重组质粒proVAX/GMCSF-SjFer,对照组注射生理盐水.按0、2、6周设计接种3次.末次接种后第2周,感染血吸虫尾蚴(40±2)条/鼠.感染后第42 d剖杀小鼠,灌注法冲虫,计数虫荷和克肝卵数.免疫前和免疫后2周留取小鼠血清,用ELISA法检测抗血吸虫成虫抗体水平. 结果 经PCR和双酶切鉴定,获得1条约为960 bp的目的 片段和2条酶切片段.免疫组小鼠的减虫率及减卵率分别为22.46%和29.40%,空质粒对照组分别为3.11%和7.79%,差异有统计学意义(P<0.05).ELISA检测免疫组小鼠血清特异性IgG抗体水平增高. 结论 构建的DNA疫苗proVAX/GMCSF-SjFer能诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫.
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IL-2/GM-CSF体外处理的自体外周血单个核细胞治疗再生障碍性贫血49例长期随访
本研究回顾分析2001年4月至2007年12月期间采用IL-2和GM-CSF体外处理的外周血单个核细胞治疗再生障碍性贫血(aplastie anemia,AA)的安全性及远期疗效.取自体外周血单个核细胞,在IL-2和GM-CSF作用下培养48小时后进行静脉回输,细胞总剂量为6×106-1×108,每周1次,连用4-22个月.外周血常规检查、骨髓细胞涂片和骨髓活检评价造血恢复,流式细胞术测定输注细胞的组成以及治疗前后T细胞亚群的变化,多聚酶链反应检测外周血T细胞TCRVβ克隆性.结果表明:49例患者中痊愈37例,随访至今无1例出现复发;5例部分缓解,3例明显进步,4例无效,总有效率91.8%(45/49).治疗前外周血T细胞亚群CD4/CD8比例倒置者39例,治疗后31例(79.5%)恢复正常.11例患者行外周血TCRVβ克隆性分析,受抑制的亚群重新得到恢复,出现多克隆的表达图像.未发现晚期克隆性疾病及其它远期不良反应.结论:IL-2和GM-CSF体外处理的外周血单个核细胞疗法疗效肯定,其机制可能与T细胞免疫功能的恢复有关.
关键词： 再生障碍性贫血 白介素-2 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 单个核细胞 远期疗效 -
急性髓系白血病患者体内solGM-Rα的表达研究
为了研究GM-CSF可溶性α受体solGM-Rα在急性髓系白血病患者体内的表达,探讨其与AML患者临床特征的相关性及临床意义,以酶联免疫吸附试验ELISA法检测66例初治AML患者血浆标本solGM-Rα的含量,并与AML患者MIC检测结果及临床资料相结合,进行综合分析.结果表明:AML患者血浆solGM-Rα浓度明显高于正常对照,在M3型低(3897.75±2651.43pg/ml),而在M5型高(9990.02±6325.43pg/ml)(P＜0.05).solGM-Rα增高者多见于MIC的M5型,后者常伴有外周血白细胞增多、骨髓粒系原始细胞增多及CD34、CD95和CD116抗原高表达等特性.结论:solGM-Rα升高可能提示预后不良,GM-CSF及其受体系统介导的靶向杀伤值得进一步研究.
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rhGM-CSF作为成人乙肝疫苗无(弱)应答者免疫佐剂初探
目的 探讨重组人粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)对提高成人乙肝疫苗无(弱)应答免疫的作用.方法 将两年内完成1～2个标准乙肝疫苗接种程序、复查HBV标志物均阴性的健康人群随机分为A、B两组.A组:33人,按标准免疫程序予10μg乙肝疫苗;B组:34人,先予rhGM-CSF 300μg皮下注射,次日始按A组方案予乙肝疫苗.接种首针后第1、2、8个月(T1、T2、T8)采血检测抗-HBs.结果 A、B组T8抗-HBs阳性率分别为39.39%和64.71%(P=0.038);A组三次抗体滴度检测结果 无显著性变化;B组升高明显,分别为(113.85±198.56)mIU/ml,(312.40±349.44)mIU/ml,(427.74±411.58)mIU/ml(P=0.001).A组和B组T8抗体水平差异有统计学意义(P=0.010).结论 rhGM-CSF联合乙肝疫苗复种对无(弱)应答者免疫效果优于单纯复种,GM-CSF具有提高机体对乙肝疫苗免疫应答的能力.
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粒细胞巨噬细胞集落刺激因子与α-干扰素联合治疗慢性乙型肝炎的疗效观察
目的观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合a-干扰素(α-INF)对慢性乙型肝炎抗病毒的治疗效果。方法设GM-CSF联合a-INF治疗组和单用α-INF对照组，对比观察两组抗病毒治疗效果，同时观察两组白细胞计数，单核细胞计数和粒细胞计数。结果治疗组近期有效率61％(11/18)，远期有效率67％(12/18)，而对照组分别为44％(8/18)和33％(6/18)。GM-CSF治疗后白细胞计数、单核细胞计数、粒细胞计数显著升高。结论 GM-CSF能提高a-INF对慢性乙型肝炎抗病毒治疗效果，其机理可能与升高血液单核细胞数量提高抗原提呈能力有关。
关键词： 干扰素n 肝炎 乙型 治疗结果 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 -
登革1～4型病毒prM-E基因的双价和四价重组质粒DNA在小鼠中的免疫原性观察
目的在鼠模型中观察登革(DEN)病毒双价和四价重组质粒DNA的免疫原性,为登革多价DNA疫苗的研究奠定基础.方法采用可去除内毒素的试剂盒大量提取质粒DNA.将双价质粒DNA及将它们配伍后再与鼠源GM-CSF进行联合免疫,免疫途径采用肌肉注射,并加以电刺激,以提高质粒DNA的摄入效率.于初次免疫后第2和4周各加强免疫1次.然后在小鼠中分别测定针对登革1～4型病毒的体液和细胞免疫应答水平.采用间接免疫荧光法和中和试验测定血清抗体效价,细胞免疫应答水平通过测定脾淋巴细胞的增殖指数和其分泌的IFN-γ浓度进行评价.细胞浸润实验通过对免疫部位的肌肉进行HE染色确定.结果小鼠在初次免疫后第4周即开始产生针对DEN1～4型病毒的抗体,随着时间的延长,抗体效价逐渐上升.第14周中和抗体效价高达1∶32.淋巴细胞的刺激指数及其分泌IFN-γ的浓度均显著高于对照组.GM-CSF对体液免疫应答有促进作用,但对细胞免疫应答无显著的促进作用.结论本研究所构建的双价和四价重组质粒DNA在鼠模型中具有较好的免疫原性,这为登革多价DNA疫苗的研究奠定了基础.
关键词： 登革病毒 DNA疫苗 免疫原性 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 -
CD自杀基因联合GM-CSF基因治疗的抗肿瘤作用及免疫机理
目的 研究自杀基因与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因联合治疗抗肿瘤作用及免疫机理.方法 小鼠皮下接种黑色素瘤B16F10细胞3天后,分别在肿瘤局部直接注射表达小鼠GM-CSF的重组腺病毒AdGM-CSF和表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因的腺病毒AdCD,然后连续10天腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)(AdCD/5FC/AdGMCSF组)、单用AdCD/5FC组、单用AdGM-CSF组、注射对照病毒AdlacZ/5FC组或PBS组.结果 与接受AdCD/5FC、AdGM-CSF、AdlacZ/5FC或PBS治疗的荷瘤小鼠比较,经联合治疗后荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制,荷瘤小鼠的存活期明显延长(P＜0.01).经AdCD/5FC/AdGMCSF联合基因治疗后,肿瘤瘤体内或瘤周有大量树突状细胞、CD8+T细胞浸润,黑色素瘤细胞表达MHC-Ⅰ和B7-1分子明显增加,荷瘤小鼠脾细胞对B16F10黑色素瘤细胞特异性杀伤功能增强.结论 联合应用自杀基因和GM-CSF基因转移可以直接杀伤肿瘤细胞,又可提高机体对肿瘤的免疫应答,两者可协同发挥抗肿瘤作用.
关键词： 基因治疗 腺病毒载体 自杀基因 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 肿瘤治疗 -
四种hGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及活性比较
目的构建及表达具有hGM-CSF和hIL-6双重生物学活性的hGM-CSF/IL-6融合蛋白分子. 方法应用PCR技术对hGM-CSF和hIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成克隆有4种融合蛋白基因的pBV220表达质粒,4种融合蛋白分别是GM-CSF(9～127)-IL-6(29～184)(简称GI1)、GM-CSF(9～127)-IL-6(1～184)(简称GI2)、GM-CSF(1～127)-IL-6(1～184)(简称GI3)、GM-CSF(9～127)-IL-6(24～184)(简称GI4),表达质粒分别导入E.coli BL-21中诱导表达.通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用hGM-CSF依赖细胞株TF1和hIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性. 结果对4种融合蛋白基因的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli BL-21中均得到高效表达,表达的融合蛋白均占到总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得4种目的蛋白,其纯度均达到95%以上.活性测定结果表明4种融合蛋白均具有较高的hGM-CSF和hIL-6的双重生物学活性. 结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF/IL-6融合蛋白.
关键词： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素-6 融合蛋白 克隆 基因表达 -
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合骨髓间充质干细胞对高氧暴露新生大鼠肺损伤的干预作用
目的 探讨重组鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage-colony stimulating factor,GM-CSF)联合大鼠骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对高氧暴露新生大鼠肺损伤的影响.方法 采用贴壁选择法分离、培养、扩增人鼠骨髓来源MSCs,并以4',6二脒基-2-苯吲哚(4',6-diamidino-2.phenylindole,DAPI)进行标记,注射前以PBS按要求剂予以稀释;3日龄清洁级SD新生大鼠32只,置于95%氧环境下7 d后,随机(随机数字法)分为4组,每组8只;高氧+GM-CSF组+MSCs组(A),高氧+GM-CSF组(B),高氧+MSCs组(C),高氧对照组(D);A,B组大鼠于模型结束后皮下注射GM-GSF 9μg/kg,A组同时还予腹腔注射5×10~4MSCs;C组予模型后腹腔注射5×10~4 MSCs,D组仅注射相同容积的PBS,于注射后72 h(13日龄)处死全部动物,肺组织病理学检测辐射状肺泡计数(radical alveolar counts,RAC);EIASA法检测肺组织匀浆TNF-α,IL-β含量;免疫组化检测肺组织端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcrip tase,TERT)积分;荧光显微镜观察DAPI阳性细胞分布情况.结果 (1)四组在RAC(P<0.01)、肺组织匀浆TNRα(P<0.01),IL-β(P<0.01)水平等方面差异均有统计学意义;与D组相比,A,B,c三组RAC值增加(P<0.05),TNF-α,IL-β水平下降(P<0.05);A组与B、A组与C组差异也均有统汁学意义(P<0.05).(2)四组在TERT积分差异也有统计学意义(P<0.01);A,B组明显增高(P<0.05);而C,D两组间差异均无统计学意义(P>0.05).(3)免疫荧光显微镜下A,C组可见DAPI阳性细胞,分别为(6.23±1.88),(5.10±0.91)(P<0.05).结论 GM-CSF、MSCs对高氧暴露可引致新生大鼠肺损伤均具有保护作用,涉及多种作用机制,联合治疗具有协同作用.
关键词： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 高氧 新生 骨髓间充质干细胞 -
GM-CSF基因增强HCV核心蛋白基因DNA疫苗的免疫应答
目的:研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)编码基因对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心(core,C)蛋白编码基因重组质粒诱导的免疫应答有无增强作用.方法:人工合成HCV核心蛋白基因至克隆载体pUC119上,酶切后与真核表达质粒pCMH6K连接,测序正确后将重组质粒pCMH6K/HCV-C转染中华仓鼠卵巢(China hamster ovary,CHO)细胞.免疫荧光检测转染的CHO细胞中HCV C蛋白分布与表达.将已构建成功的GM-CSF编码基因重组子(pGM-CSF)联合pCMH6K/HCV-C肌注免疫Balb/c鼠,ELISA 法检测免疫小鼠血清抗HCV C特异性抗体水平,经流式细胞仪检测不同免疫原免疫鼠后脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子[干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-4(interleukin-4,IL-4)]变化,LDH法测定CTL活性.结果:pCMH6K/HCV-C经鉴定构建正确.所编码的蛋白主要分布于胞膜,少量分布于胞浆.pGM-CSF+pCMH6K/HCV-C联合免疫组和pCMH6K/HCV-C单独免疫组均产生抗HCV C特异性抗体,两组间比较差异无统计学意义;联合免疫组CD4+T淋巴细胞比例为44.90％±5.99％,明显高于其他组(P＜0.05).不同免疫组CD8+T细胞比例变化不大,与空载体pcDNA3.1(+)组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).联合免疫组CTL活性为56.48％±4.68％,明显高于其他组(P＜0.05).联合免疫组IFN-γ/IL-4比值为18.20±2.36,明显高于其他组(P＜0.05).结论:GM-CSF编码基因可增强HCV C基因DNA疫苗的细胞免疫应答,并能够诱导Th1型免疫应答.
关键词： 丙型肝炎病毒 核心蛋白 DNA疫苗 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 -
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对损伤血管内膜增生及凝血纤溶功能的影响
目的:建立兔髂动脉球囊损伤模型,观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)对血管损伤后内膜增生及机体凝血纤溶功能的影响.方法:健康新西兰雄性大白兔24只,随机分为GM-CSF组和对照组.GM-CSF组皮下注射GM-CSF 10 μg·kg-1·d-1,对照组皮下注射同等量生理盐水.7 d后球囊扩张损伤一侧髂动脉.术后4周处死动物,采集标本,观察内膜增生情况;分别于术前、术后1周,2周,4周耳缘静脉采血检测一氧化氮(NO)浓度、组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t-PA)活性和纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)活性.结果:术后4周病理组织学见GM-CSF组内膜增生程度较对照组明显减轻,新生内膜中血管平滑肌细胞和纤维组织较对照组明显减少,内皮较完整、光滑,管腔狭窄程度较轻.GM-CSF组术后2周,4周NO浓度明显高于对照组[(91.9±11.6)μmol/L vs (81.7±12.2)μmol/L];[(97.7±10.1)μmol/L vs (83.2±12.6)μmol/L];术后1周,2周,4周t-PA活性2组均高于术前,但2组间差异无统计学意义;2组术前、术后PAI-1活性差异无显著性,2组间亦差异无显著性.结论:GM-CSF能促进损伤内膜修复,恢复正常内皮功能,且并未诱导球囊损伤动物机体的高凝状态.
关键词： 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 血管成形术 凝血 动物模型 兔
