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枸杞多糖通过抑制H2O2诱导的INS-1细胞凋亡促进胰岛素分泌
目的:探讨枸杞多糖对H2O2诱导胰岛INS-1细胞凋亡和胰岛素分泌功能的影响.方法:采用H2O2诱导INS-1细胞凋亡模型,用100 mg/L枸杞多糖处理1NS-1细胞,MTT法检测细胞活力,放射免疫法检测胰岛素含量,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA表达.结果100 mg/L枸杞多糖能明显提高H2O2处理INS-1细胞的活力(P＜0.01),促进细胞基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P ＜0.05,P＜0.01),减少细胞凋亡(P＜0.01),同时Bcl-2的表达明显升高(P＜0.01),Bax和Caspase-3的表达明显降低(P＜0.01,P＜0.01).结论:枸杞多糖可能通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax和Caspase-3的表达,以降低H2O2诱导的INS-1凋亡,同时促进INS-1细胞的胰岛素分泌.
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细胞内基质金属蛋白酶2基因过表达对INS-1细胞功能的影响
目的 探讨细胞内基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因过表达对大鼠胰岛β细胞株INS-1细胞功能的影响. 方法 采用基因重组技术将大鼠MMP-2 cDNA插入真核表达载体pcDNA 3.1(+)构建大鼠MMP-2真核表达质粒,培养INS-1细胞.随机分为正常对照组,空质粒转染组及MMP-2质粒转染组.脂质体Lipofectmine 2000转染INS-1细胞,观察INS-1细胞内MMP-2基因和蛋白表达量变化,MMP-2酶活性变化,以及INS-1细胞凋亡情况与胰岛素分泌功能的变化. 结果 与正常对照组、空质粒转染组比较,MMP-2质粒转染组MMP-2 mRNA表达增加(P均＜0.05),蛋白表达水平和酶活性上调(P均＜0.05); MMP-2质粒转染组细胞凋亡率(56.07±3.68)％高于正常对照组(33.70±6.53)％及空质粒转染组(38.02±5.60)％(P＜0.05),而IRI(1.30±0.27)低于正常对照组(3.37±0.76)与空质粒转染组(2.90±0.84) (P＜0.05). 结论 细胞内MMP-2基因的过表达可引起胰岛β细胞凋亡增加,胰岛素分泌功能下降.
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寒温并用方对 IL-1β诱导 INS-1细胞凋亡的影响
目的：用细胞模型探讨 IL-1β诱导 INS-1细胞凋亡，并观察寒温并用方对其保护作用。方法 MTT观察寒温并用方（1、0.5、0.25、0.125 g / L）分别作用24、48、72 h 对 INS-1细胞增殖的影响。寒温并用方（1、0.5、0.25、0.125 g / L）预处理细胞12 h，50 ng / L IL-1β继续处理细胞24 h，同时设空白对照组，IL-1β处理组。Annexin V-FITC 流式细胞仪检测细胞凋亡情况。Western blotting 检测各组 caspase3，bcl-2 Bax 蛋白表达。结果 MTT显示寒温并用方以时间剂量依赖性促进 INS-1细胞增殖。但1 g / L 浓度在作用72 h 后与其他浓度比较，显示明显的细胞抑制作用。AnnexinV-FITC / PI 结果显示 IL-1β促进细胞凋亡。Western blotting 结果表明IL-1β促进细胞凋亡蛋白合成，寒温并用方抑制其表达。结论寒温并用方能促进 INS-1细胞增殖，并抑制 IL-1β诱导 INS-1的凋亡，可以用于炎症性胰岛细胞受损糖尿病的预防及治疗。
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胰岛细胞损伤体外模型的建立及在药物筛选中的应用
目的:体外建立胰岛细胞损伤模型,并初步应用于保护和修复胰岛细胞中药的筛选.方法:将INS-1胰岛细胞接种于96孔板中,以四氧嘧啶诱导建立体外胰岛细胞损伤模型,MTT法测定不同剂量四氧嘧啶对细胞活力的影响,并应用于研究不同药物对损伤的胰岛细胞的增殖作用.结果:将密度为1×104个/孔的INS -1细胞接种于96孔板,细胞24h贴壁后予以12mmol·L-1四氧嘧啶诱导,可建立稳定的胰岛细胞损伤模型；翻白草、银杏叶能够保护和修复四氧嘧啶损伤的INS -1细胞.结论:以四氧嘧啶诱导胰岛细胞损伤的方法,可建立稳定的体外胰岛细胞损伤模型,并可用于保护修复胰岛细胞药物的筛选.
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慢性间歇性缺氧对INS－1细胞Bax和Bcl－2 mRNA的影响
目的：观察慢性间歇性缺氧（ CIH）对INS－1细胞凋亡的影响。方法按不同浓度氧气作用于INS－1细胞，分为轻度间歇性缺氧组、中度间歇性缺氧组、重度间歇性缺氧组、持续低氧组、间歇正常氧对照组、空白对照组。采用RT－PCR检测Bax和Bcl－2 mRNA表达。结果和正常对照组比较，中、重度间歇性缺氧组Bax mRNA表达明显升高，而Bcl－2 mRNA表达明显降低（ P均＜0．05）。结论 CIH能诱导INS－1细胞凋亡增加，并且随缺氧程度加重，凋亡越明显。
关键词： 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 缺氧 INS-1 凋亡 -
多氯联苯(PCB1254)诱导胰岛细胞凋亡的机制研究
目的:本研究探讨多氯联苯(PCB1254)诱导体外培养胰岛β细胞株INS-1凋亡的可能机制.方法:用不同浓度的PCB1254刺激INS-1细胞后,使用CCK-8法检测细胞活性,选择适当浓度的PCB1254进行INS-1细胞凋亡机制的研究;PCB1254(5 μg/ml)刺激INS-1细胞后,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,并以流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved Caspase-3、Caspase-3、Bim、Bcl-2、c-Fos、p4NK、p-P38、p-ERK蛋白的表达;二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;PCB1254诱导INS-1细胞凋亡后,使用ERK抑制剂PD98059进行干预,倒置显微镜下观察细胞凋亡情况.结果:随着浓度的增加,PCB1254对细胞活性的抑制逐渐增强,当浓度≥5 μg/ml时,与对照组差异有统计学意义(P＜0.01);倒置显微镜下观察PCB1254(5μg/ml)能引起INS-1细胞凋亡,凋亡细胞脱落,漂浮于培养基中;流式细胞术检测结果显示PCB1254能诱导INS-1细胞凋亡;Western blot检测凋亡细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bim表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,氧化应激相关蛋白c-Fos表达上调,ROS荧光增强;MAPK信号通路中p-ERK蛋白表达上调;ERK抑制剂PD98059干预后细胞凋亡无明显变化.结论:PCB1254可能通过氧化应激信号通路引起INS-1细胞的凋亡,此过程中伴有ERK信号通路的激活.
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地骨皮醇提液对胰岛β细胞增殖和凋亡的影响
[目的]以大鼠INS-1胰岛素瘤细胞株作为研究对象，用中药地骨皮（Cortex Lycii）醇提液干预INS-1细胞株，观察不同浓度地骨皮醇提液对胰岛β细胞增殖、凋亡变化的影响，为中药保护胰岛β细胞提供实验室依据。[方法]将INS-1细胞株分为正常糖对照组（control）、高糖组（high glucose，HG）、HG+Cortex Lycii（1g·L-1）组、HG+Cortex Lycii（2g·L-1）组以及HG+Cortex Lycii（4g·L-1）组，分别于药物干预24h、48h、72h后通过CCK-8法检测各组INS-1细胞的增殖率、采用流式细胞术检测细胞的凋亡率，并行相应统计学分析。[结果]48h、72h时与HG组相比，HG+Cortex Lycii各浓度组INS-1细胞的增殖率均有提高（P<0.01）；与另外两个药物浓度组相比，72h时HG+Cortex Lycii（2g·L-1）组细胞增殖率高，差异有统计学意义（P<0.05）。与HG组相比，HG+Cortex Lycii（1g·L-1）组、HG+Cortex Lycii（2g·L-1）组和HG+Cortex Lycii（4g·L-1）组INS-1细胞凋亡率显著下降，差异有统计学意义（P<0.01）；HG+Cortex Lycii（2g·L-1）组凋亡率低于HG+Cortex Lycii（1g·L-1）组，差异有统计学意义（P<0.05）。[结论]地骨皮醇提液可促进高糖环境下INS-1细胞的增殖，抑制高糖环境下INS-1细胞的凋亡，其佳的药物浓度为2g·L-1。
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不同游离脂肪酸通过PI3K/AKT途径对INS-1β细胞增殖与凋亡的影响
目的 探讨饱和脂肪酸棕榈酸(PA)和不饱和脂肪酸油酸(OA)对INS-1β细胞增殖及凋亡的影响.方法 INS-1细胞体外培养,采用MTT法检测细胞增殖,Annexin-Ⅴ/FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡.结果 和对照组相比,两种浓度OA均能促进INS-1β细胞生长,其中0.25 mmol/L OA能显著促进细胞生长(P＜0.05);两种浓度PA对INS-1β细胞生长均有抑制作用,其中0.50mmol/L PA有显著抑制作用(P＜0.01).Z-VAD-fmk能对抗PA对INS-1细胞生长的抑制作用,LY294002则能促进PA对INS-1β细胞生长的抑制作用,抑制OA对INS-1β细胞生长的促进作用.OA能对抗高糖环境所引起INS-1β细胞的凋亡,而PA能显著增加INS-1β细胞凋亡的比例.结论 PA抑制INS-1β细胞生长并促进其凋亡,而OA对INS-1细胞则具有保护作用;PA引起的细胞凋亡有依赖Caspase介导的凋亡信号通路,而PI3K/Akt信号通路在胰岛β细胞脂性凋亡中对维持应激细胞的生存具有重要意义.
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诱导HO-1表达对慢性间歇性缺氧下INS-1细胞凋亡的影响
目的 了解诱导HO-1表达对慢性间歇性缺氧下INS-1细胞凋亡的影响.方法 通过不同浓度CoPP作用于慢性间歇性缺氧下INS-1细胞,观察胰岛素水平、HO-1及Caspase-3水平,采用RT-PCR检测HO-1、Caspase-3mRNA表达.结果 随着CoPP浓度增高,胰岛素、HO-1表达逐渐增高,而Caspase-3逐渐降低,而CoPP浓度达到40umol/L时作用强(P<0.05).结论 慢性间歇性缺氧下诱导INS-1细胞HO-1表达,抑制凋亡相关蛋白Caspase-3,在一定程度上对细胞起保护作用.
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肝X受体激动剂T0901317对INS-1细胞株凋亡的影响
目的 探讨肝X受体激动剂T0901317对软脂酸诱导的大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1凋亡的促进作用.方法 根据不同干预条件分为空白对照组(对照组),T0901317干预组(T0901317组).24 h、48 h后应用MTT检测各组细胞增殖活性;48 h后Western blot检测细胞因子Bax及Bcl-2的表达、细胞凋亡应用Caspase-3活力检测、ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果 T0901317组细胞增殖活性较对照组增殖受抑制,细胞Caspase-3活性显著高于对照组.T0901317组较对照组上调Bax、下调Bcl-2表达、ROS含量显著升高.结论 T0901317可以促进胰岛β细胞的凋亡.
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Wnt5a调控大鼠胰岛β细胞瘤细胞Cyclin D1表达的通路研究
目的:探讨Wnt5a调控大鼠胰岛β细胞瘤细胞Cyclin D1表达的通路机制.方法:体外培养大鼠胰岛β细胞瘤系细胞INS-1,以人/鼠重组Wnt5a蛋白处理细胞0.5、1、3、6、12 h,进行时间梯度实验;根据处理因素分为溶剂对照组、kn-62处理组、重组Wnt5a蛋白刺激组和kn-62+重组Wnt5a蛋白刺激组.蛋白质印迹法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、全细胞β-catenin、Cyclin D1水平变化.结果:经Wnt5a刺激后,INS-1胞内CaMKⅡ磷酸化水平升高,全细胞β-catenin水平下降,Cyclin D1表达减少(P<0.05);kn-62可降低细胞内CaMKⅡ磷酸化水平,拮抗外源性Wnt5a对全细胞 β-catenin和Cylcin D1的下调效应(P<0.05).结论:Wnt5a可通过激活大鼠胰岛β细胞瘤细胞INS-1的CaMKⅡ通路,抑制依赖β-catenin的经典Wnt通路,终下调细胞Cyclin D1表达.
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甲状旁腺素相关肽对INS-1细胞株增殖的影响
目的:探讨甲状旁腺素相关肽(PTHrP)对大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1胰岛素分泌的促进作用.方法:分别应用不同浓度PTHrP干预INS-1细胞,应用MTT法检测细胞生长活力,然后应用Western blot检测细胞Ki67、PDX-1、Bax及Bcl-2的表达,BrdU免疫荧光检测细胞增殖情况.结果:PTHrP具有农度依赖性的促进INS-1细胞增殖,PTHrP显著上调Ki67、PDX-1及Bcl-2表达,下调Bax表达,PTHrP干预后细胞BrdU表达增高.结论:PTHrP可以促进胰岛β细胞增殖.
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长春新碱对INS-1细胞hTERT、Sp1、c-myc基因表达影响的研究
目的 观察抗肿瘤药物长春新碱(Vincristine,VCR)对大鼠胰岛B细胞瘤株INS-1细胞增殖和侵袭的抑制作用和hTERT、Sp1、c-myc表达的影响及其意义,探讨胰岛B细胞瘤的发病机制.方法 INS-1分为对照组(不加VCR)和实验组(加入浓度分别为0.008 mg/mL、0.04 mg/mL、0.2 mg/mL、1 mg/mL的VCR).两组培养24 h后,用MTT比色法检测INS-1细胞的增殖抑制率;用Transwell侵袭试验检测INS-1细胞的侵袭力;RT-PCR检测各组细胞中hTERT、Sp1、c-myc基因的表达.结果 实验组抑制率明显高于对照组(P＜0.05);且随着VCR浓度的增加,INS-1细胞生长抑制率逐渐增加(P＜0.05);Transwell小室培养细胞24 h后,实验组侵袭到下层膜的细胞数为(63.26±5.12)个,对照组为(150.65±4.02)个(P＜0.01);与对照组比较,随着时间的延长,实验组的hTERT、Sp1、c-myc mRNA基因在INS-1细胞的表达也逐渐减弱(P均＜0.05).结论 VCR能抑制INS-1细胞增殖和侵袭,可能通过抑制Sp1、c-myc和hTERT表达,从而抑制INS-1的端粒酶活性,进而抑制细胞增殖和降低侵袭能力.
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金钗石斛多糖对高糖诱导的大鼠INS-1细胞胰岛素分泌的影响
目的:观察全钗石斛多糖对高糖诱导的大鼠INS-1细胞胰岛素分泌能力的影响.方法:将大鼠INS-1细胞分成6组,正常对照组(NC),高糖作用组(HG),罗格列酮组(ROZ),金钗石斛多糖低(LD)、中(MD)、高(HD)浓度干预组.各组药物作用48h后再用高糖作用1h,提取上清分别观察胰岛素分泌情况.用酶促化学放大发光法测定各组上清液的胰岛素含量.结果:与高糖作用组相比,金钗石斛多糖高、中浓度组细胞的胰岛素分泌量明显增多(P＜0.05).结论:金钗石斛多糖能增加高糖诱导的INS-1细胞的胰岛素分泌量.
