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DMN诱导的肝纤维化模型伴肾损害的实验观察
目的:观察二甲基亚硝胺(DMN)诱导大鼠肝纤维化时对肾脏的影响,为"肝肾同源"提供实验依据.方法:实验大鼠随机分为正常组和DMN模型组,测定血清ALT、AST、BUN、Scr、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平,病理学观察肝肾组织切片,免疫组化方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在肝肾组织的表达.结果:模型组较正常组大鼠血清各参数水平显著升高;病理学观察到肝肾组织胶原增生,纤维化形成;免疫组化结果发现肝肾组织中α-SMA,TGF-β1的表达明显上调.结论:DMN在导致肝纤维化的同时,也出现了肾脏纤维化病变,提示肝肾纤维化在一定程度上是有相关性的,从病理角度说明中医学"肝肾同源"具有一定的物质基础.
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二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化发生机理的研究
目的:用二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)造模对肝纤维化发生机制进行探讨,为临床诊断和治疗提供理论依据.方法:采用电镜技术、免疫组织化学技术对肝纤维化形成过程中肝星状细胞的变化进行动态观察,并观察DMN造模后7、14、21、28天的肝重、体重及肝体比.结果:肝纤维化模型大鼠肝星状细胞可被激活、转化为成纤维细胞.随造模时间延长,大鼠肝重在注射DMN后第7天有明显的增加,随后逐渐减轻,到第28天达到小.结论:肝星状细胞激活、转化在肝纤维化发生机制中起重要作用.
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消黄方对急慢性黄疸治疗作用实验研究
目的:探讨消黄方对急、慢性肝损伤所致黄疸的治疗作用.方法:以消黄方为研究对象,运用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导急性黄疸和二甲基亚硝胺大鼠肝硬化诱导慢性黄疸模型,观测消黄方的疗效.(1)急性黄疸:Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常组(10只)和ANIT处理组(30只).ANIT按照2mL/kg一次性经口灌胃,48h后ANIT处理组随机分为模型对照组,消黄方组及UDCA组(各10只),各组每天分别给予生理盐水、消黄方、UDCA治疗1周,实验结束处死全部大鼠.(2)慢性黄疸:Wistar雄性大鼠27只,随机分为正常组(10只)和DMN模型组(17只).DMN模型组大鼠腹腔注射DMN( 10mg·kg-1)共4周制备肝硬化伴随黄疸模型.造模2周末取正常和模型大鼠各3只作为药前观察,其余模型大鼠(14只)随机分为消黄方组和模型对照组(各7只)；实验第4周末处死全部大鼠,获取样本,观察大鼠的死亡率及肝功能情况.结果:(1)急性黄疸模型结果发现,与正常组相比:ANIT模型纽大鼠肝功能显著异常,ALT、AST、ALP、TBIL显著升高(P＜0.05或P＜0.01).UDCA和消黄方显著降低血清TBIL含量(P＜0.01),消黄方显著降低ALT、AST活性(P＜0.05或P＜0.01),UDCA改善不明显(P＞0.05).(2)血清TBIL含量及ALT、AST活性随DMN造模时间呈梯形增加(与正常大鼠比较,P＜0.05或P＜0.01)；与4周模型对照组相比,消黄方显著降低血清TBIL含量及ALT、AST活性(P＜0.05或P＜0.01).结论:具有清热利湿、活血化瘀治法的消黄方具有保肝降酶退黄作用,对急慢性肝损伤(黄疸)均有显著的疗效,为临床应用提供充分的实验依据.
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免疫组化法检测CTGF、Ⅲ型胶原在DMN诱导大鼠肝纤维化模型中的表达
目的:观察CTGF、Ⅲ型胶原在DMN诱导大鼠肝纤维化模型中的表达.方法:SPF级健康雄性Wistar大鼠40只,适应性喂养1周后随机分成正常组、模型组两个组,每组各20只.模型组、大鼠按1 ml/kg给予0.1％二甲基亚硝胺腹腔注射,每周前3天每天一次,共4周.正常组按1 ml/kg给予生理盐水腹腔注射,每周前3天每天一次,共4周.处死大鼠前1天晚上禁食,按10％水合氯醛0.6 ml/100 g体重腹腔注射处死大鼠,取肝脏置10％中性福尔马林溶液中固定24 h后石蜡包埋备用.结果:模型组同正常组比较,肝组织中Ⅲ型胶原的表达(其IOD值)增加0.98个数量级,其差异有统计学意义(P=0.000)；肝组织中CTGF的表达(其IOD值)增加0.56个数量级,其差异有统计学意义(P =0.000).经相关分析,肝组织中CTGF与Ⅲ型胶原的表达的Pearson相关系数为1.000,P=0.000(双侧),即可认为肝组织中CTGF与Ⅲ型胶原的表达之间有直线相关关系,且为正相关.结论:CTGF、Ⅲ型胶原在DMN诱导大鼠肝纤维化模型中的表达增加；肝组织中CTGF与Ⅲ型胶原的表达之间有直线相关关系,且为正相关.
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PFD对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化治疗疗效和 CTGF表达的影响
目的：观察不同剂量PFD对二甲基亚硝胺（ Dimethylnitrosamine DMN）诱导大鼠肝纤维化的治疗作用和CTGF表达的影响，初步探讨其可能的作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠105只随机分为正常组21只，给予生理盐水10 mg／kg体重腹腔内注射，每周前三天连续给药，1次／日，连续注射3周；造模组84只，给予1％DMN溶液10 mg／kg体重腹腔注射，每周前三天连续给药，1次／日，连续注射3周。两周末将造模组随机分为4组，每组21只，分别是：模型组、IFN －α治疗组、PFD 120 mg、PFD 240 mg治疗组。各组大鼠均于造模第3周第一天给予药物治疗，每周七天，1次／日，治疗共4周。各组给药剂量及方法如下：正常组、模型组予以0．5％CMC－Na 6 mL／kg灌胃；PFD不同剂量组予以相应剂量PFD灌胃； IFN －α组予以IFN －α10万单位／只，皮下注射。治疗四周后处死所有大鼠，留取肝组织行Masson染色，免疫组织化学法测Ⅰ型胶原， CTGF表达。结果（1） Masson染色SSS半定量评分，模型组与正常组比较显著升高（ P＜0．05）。 IFN －α组、PFD组SSS半定量评分较模型组显著降低（ P＜0．05）。免疫组化法检测肝组织Ⅰ型胶原的表达，模型组与正常组比较显著升高（ P＜0．05），PFD组与模型组比较显著降低（P＜0．05），IFN －α组与模型组比较无统计学差异（P＞0．05），（2）免疫组化法检测肝组织CTGF的表达，模型组与正常组比较显著升高（P＜0．05）。 PFD 120 mg、PFD 240 mg各组与模型组比较显著降低（P＜0．05）。结论（1）PFD具有治疗DMN诱导的大鼠肝纤维化的作用，与α－IFN无明显差别。（2）PFD抗DMN诱导大鼠肝纤维化的作用机制可能与下调CTGF的表达，抑制促纤维化因子有关。
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DMN诱导的小鼠慢性中毒性肝炎过程中IL-18、TNF-α mRNA及Fas mRNA的动态变化
目的观察二甲基亚硝胺(DMN)所致小鼠慢性中毒性肝炎时肝组织损伤与IL-18、TNF-α mRNA、Fas mRNA表达的动态变化.方法取30只小鼠作为模型组,腹腔注射0.1%的DMN14 mg/kg,每隔4 d注射1次,共注射5次.分别在第1、3、5次注射后2 d(即实验第3 d、11 d、19 d)及停止注射14 d(即实验第31 d)眼球取血后分批处死动物(每次处死6只),检测血清IL-18、肝组织TNF-α mRNA及Fas mRNA的表达.对照组6只小鼠,腹腔注射生理盐水,每隔4 d 1次,共5次,于第31 d处死,检测指标同模型组.结果小鼠第一次注射DMN后肝细胞气球样改变为主,炎症、坏死不明显.随着注射次数的增加,炎症、坏死逐渐加重.停止注射后,肝组织逐渐修复.血清IL-18、肝组织TNF-α mRNA及Fas mRNA水平随着炎症、坏死的加重而升高,且呈正相关关系.结论 DMN所致小鼠中毒性慢性肝炎的IL-18、TNF-α mRNA、Fas mRNA的改变与肝组织病理改变同步,呈正相关关系,与人类肝炎时有一定的相似性.
关键词： DMN 小鼠慢性肝炎 IL-18 TNF-α mRNA Fas mRNA -
DMN所致小鼠肝损伤模型中血清IL-18和肝脏TNF-α mRNA的表达
目的观察二甲基亚硝胺(DMN)诱导实验性肝损伤模型过程中,小鼠血清IL-18及肝脏TNF-α mRNA表达的动态变化.方法 0.1%DMN腹腔注射,制备小鼠实验性肝损伤模型.用ELASA法测定血清IL-18水平,半定量逆转录聚酶链反应(RT-PCR)检测肝组织TNF -α mRNA的表达.结果随着肝脏炎症坏死程度的加重,血清IL-18水平及肝脏TNF-α mRNA的表达逐渐增加,均于第5次注射DMN后达到高峰(P<0.01),损伤后自行恢复期内明显回落.两者呈正相关趋势.结论 IL-18、TNF-α均参与了DMN诱导的肝脏毒性反应,具有协同的促炎性.两者皆在肝损伤的自行恢复中发挥了一定作用.
