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氯化钴诱导人SK-N-SH细胞凋亡的研究
在神经系统中,脑组织的活动需要大量的能量,这些能量主要是由线粒体的有氧呼吸产生.虽然人脑组织的的重量仅占人体重的2%,但其耗氧量却极高,脑组织无疑是缺氧损伤的重要靶器官.近年来,关于脑缺氧损伤的研究比较多,但主要体现在缺氧导致的生理生化改变,很少在分子水平上阐述这一问题.鉴于此,我们拟建立神经细胞缺氧的体外模型,供今后研究神经细胞缺氧凋亡的机制.氯化钴(CoCl2)为红色单斜晶体,被广泛用于诱导细胞化学缺氧损伤.SK-N-SH细胞为人神经母细胞瘤细胞株.因此本研究利用CoCl2诱导SK-N-SH细胞,并检测此模型能否有效模拟缺氧条件下脑神经细胞的凋亡.
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新型大气污染物MMT诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制
目的 研究甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制.方法 MMT诱导SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测活性氧(ROS)生成;化学发光法检测Caspase-3活性;Western blot法检测p38 MAPK磷酸化程度.结果 在MMT诱导SK-N-SH细胞过程中,细胞ROS生成量为正常组的5.2倍(P＜0.01);抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及二硫苏糖醇(DTT)可有效抑制细胞ROS生成(P＜0.01).提高细胞存活率(P＜0.01);在这一过程中,Capase-3活性明显增强,为对照组的3.01倍(P＜0.01);同时p38 MAPK磷酸化程度加强;p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可提高细胞存活率(P＜0.05),抑制Caspase-3的活性(P＜0.01).结论 MMT诱导的SK-N-SH细胞凋亡与ROS升高,激活Caspase-3有关,这一过程有p38 MAPK相关信号转导途径参与.
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人参皂苷Rb1对慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞的影响
目的:探讨人参皂苷Rb1对慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞钙调蛋白激酶Ⅱβ(CaMKⅡβ) mRNA、蛋白及cAMP反应原件结合蛋白磷酸化(pCREB)表达的影响.方法:用终浓度为100 μmol·L-1的吗啡、不同浓度人参皂苷Rb1及终浓度为10 μmol·L-1的纳络酮,单独或共同作用于SK-N-SH细胞,采用RT-PCR、Western-blot及免疫组织化法分别研究人参皂苷Rbl对慢性吗啡及纳洛酮作用于SK-N-SH细胞时,CaMKⅡβmRNA、蛋白表达及核转录因子pCREB表达的影响.结果:与对照组相比,终浓度为100 μmol·L-1的吗啡,作用48 h可以显著增加CaMKⅡβmRNA、CaMKⅡβ蛋白及pCREB表达;吗啡作用完毕,再加入终浓度为10 μmol·L-1的纳络酮,作用30min,CaMKⅡβ mRNA、CaMKⅡβ蛋白及pCREB表达进一步增加;8μmol·L-1、16 μmol·L-1、32 μmol·L-1的Rb1可以显著抑制上述指标.结论:人参皂苷Rb1可能通过调控CaMKⅡβ mRNA、CaMKⅡβ蛋白表达及核转录因子CREB的磷酸化,对慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞产生影响.
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MnCl2和MPP+诱导SK-N-SH细胞氧化应激及自噬的比较
目的 研究锰和1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)引起人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞氧化应激和自噬的异同,进一步探讨锰神经毒性机制.方法 以0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0和2.0 mmol/L MnCl2和MPP+分别处理SK-N-SH细胞24 h,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)试验检测细胞存活率;0.125、0.25、0.5 mmol/L MnCl2和MPP+分别处理细胞24 h,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体,蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测自噬相关蛋白P62和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达.结果 与对照组比较,0.0625~2.0 mmol/L MnCl2和0.125~2.0 mmol/L MPP+处理组SK-N-SH细胞存活率均明显降低,且0.25~2.0 mmol/L MnCl2处理组SK-N-SH细胞存活率明显低于相同剂量MPP+处理组(均P<0.05);与对照组比较,0.125~0.25 mmol/L MnCl2和0.125~0.5 mmol/L MPP+处理组SK-N-SH细胞内ROS含量均明显增加,0.25~0.5 mmol/L MPP+处理组细胞内ROS含量明显高于相同剂量MnCl2处理组(均P<0.05);与对照组比较,0.25~0.5 mmol/L MnCl2和MPP+处理组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值均明显增加,P62表达均明显下降,且0.125~0.5 mmol/L MPP+处理组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值明显高于相同剂量MnCl2处理组,0.125和0.25 mmol/L MPP+处理组P62表达水平明显低于相同剂量MnCl2处理组(均P<0.05).结论 MnCl2和MPP+均可引起SK-N-SH细胞氧化应激,诱导自噬,且MPP+对SK-N-SH细胞自噬的诱导作用明显高于MnCl2.
关键词： 锰 1-甲基-4-苯基吡啶 自噬 氧化应激 SK-N-SH细胞 -
白芍总苷对阿尔茨海默病的保护作用及机制的研究
目的 探讨白芍总苷(total glucosides of paeony,TGP)对阿尔茨海默病(AD)的保护作用及其作用机制.方法 实验共分为7组,分别为正常对照组(Control组)、模型组[连二亚硫酸钠(Na2S2O4)缺氧无保护组]及TGP各干预组(剂量分别为50、100、200、400、800 mg/L).采用Na2S2O4建立人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞缺氧损伤模型,NaS2O4于不同浓度TGP干预1h后加入,作用16 h.利用倒置相差显微镜观察各组SK-N-SH细胞生长及形态的变化;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法测定各组SK-N-SH细胞的存活率;利用蛋白免疫印迹(western blot)法检测SK-N-SH细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达水平.结果 形态学研究显示,正常对照组SK-N-SH细胞呈圆形,较少有突起,为贴壁细胞,折光性较强;模型组多数细胞肿胀,折光度减弱,终细胞成团、漂浮,并有许多细胞崩解物,TGP各浓度组均较模型组细胞数量较多,折光性明显增强,细胞裂解碎片减少,多数细胞重新贴壁伸展;TGP 100、200、400、800 mg/L干预组能够有效改善SK-N-SH细胞缺氧损伤造成的细胞死亡率的增加;TGP 50、100、200、400、800 mg/L干预明显抑制SK-N-SH细胞缺氧损伤造成的Caspase-3蛋白表达的增加.结论 TGP对AD具有明显的保护作用,其作用机制与通过调控Caspase-3蛋白的表达影响神经细胞的凋亡相关.
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姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用
目的 观察姜黄提取物对Na2S2O4诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 取相同代的SK-N-SH细胞随机分为正常对照组、模型组、姜黄提取物低浓度(20 μmol/L)组、姜黄提取物中浓度(40 μmol/L)组、姜黄提取物高浓度(80 μmol/L)组.用分光光度法检测姜黄提取物对细胞外SOD、MDA的影响,通过MTT比色法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡率,采用Western blot检测法检测细胞Caspase-3蛋白的表达情况.结果 与模型组比较,姜黄提取物各组细胞存活率升高(P＜0.01),姜黄提取物各组SK-N-SH细胞培养液内的MDA水平均明显降低(P均＜0.01),而SOD水平均明显升高(P均＜0.01),同时Caspase-3活性受到抑制.结论 姜黄提取物能够通过抗氧化作用抑制Na2S2O4对SK-N-SH细胞凋亡作用.
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川楝素引起的NG108-15细胞和SK-N-SH细胞形态学变化
实验观察了NG108-15和SK-N-SH细胞在含川楝素的培养基中产生的形态学变化.(1)光镜下发现,川楝素可以引起NG108-15细胞突起变短甚至消失、胞体变圆、细胞萎缩、失去贴壁能力出现飘浮,数量逐渐减少;在有血清培养的情况下,川楝素引起SK-N-SH细胞间界限不清,无血清时,细胞出现飘浮现象.(2)电镜观察显示,川楝素引起NG108-15细胞和SK-N-SH细胞的死亡,大多数具有坏死细胞的特征,仅个别细胞的死亡具有典型凋亡细胞的特征.
关键词： 川楝素 NG108-15细胞 SK-N-SH细胞 -
Foxp3在成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH中的表达及其对化疗的敏感性
目的:研究成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH 中Foxp3的表达及其对化疗药物环磷酰胺(cyclophosvnamide,CTX)和吡柔比星(pirarubicin, THP)的敏感性.方法:体外培养SK-N-SH细胞,流式细胞术检测Foxp3在SK-N-SH细胞中的表达.MTT法检测化疗药物CTX、THP对SK-N-SH细胞的敏感剂量;流式细胞术及real-time PCR检测CTX、THP对SK-N-SH细胞中Foxp3表达的影响.结果:流式细胞术检测结果显示,SK-N-SH细胞高表达Foxp3分子.CTX作用于SK-N-SH细胞的敏感剂量为6 mmol/L,THP作用于SK-N-SH细胞的敏感剂量为80 ng/ml.6 mmol/L CTX或80 ng/ml THP以及两者的联合不能抑制SK-N-SH细胞中Foxp3的表达(P>0.05);real-time PCR结果也证实,CTX或THP以及两者的联合不能抑制SK-N-SH细胞中Foxp3 mRNA的表达.结论:成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH高表达Foxp3蛋白,但其表达对化疗药物CTX和THP不敏感.
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没食子儿茶素没食子酸酯对百草枯诱导SK-N-SH细胞凋亡的保护作用
目的 探讨茶多酚中主要活性成分没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对百草枯诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的保护作用.方法 培养的SK-N-SH细胞给予400μmol·L~(-1)百草枯诱导细胞凋亡.实验分为6组:空白对照组、百草枯模型组、维生素E(10 μmol·L~(-1))组和3个EGCG(1、5、10 μmol·L~(-1))剂量组.以药物处理细胞2 h后,加入百草枯,72 h后MTT法检测细胞活力,取培养细胞上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照组相比,百草枯明显降低细胞活力(P<0.01),增加LDH漏出量(P<0.01),细胞膜结构不完整,出现空泡等凋亡现象,细胞凋亡发生率达到30.5%.EGCG处理后,显著提高细胞活力,减少LDH的漏出和降低细胞凋亡率(JP<0.01),其中10μmol·L~(-组的作用明显高于5 Izmol·L~(-1)组或1μmol·L~(-1)组(P<0.05或P<0.01).结论 EGCG具有抑制百草枯诱导的SK-N-SH细胞凋亡作用.
关键词： 没食子儿茶素没食子酸酯 百草枯 细胞凋亡 SK-N-SH细胞 茶多酚 -
甾体激素对神经母细胞株SK-N-SH细胞摄取甘氨酸的快速作用
本研究观察了SK-N-SH细胞摄取甘氨酸的一般情况, 并进一步研究了甾体激素对SK-N-SH细胞摄取甘氨酸的快速作用.结果显示: SK-N-SH细胞高亲和力的甘氨酸摄取是Na+和Cl-依赖性的.皮质酮、孕酮和地塞米松对这种摄取有快速促进作用, 雌二醇和脱氧皮质酮无明显作用, 表明甾体激素快速作用有特异性.皮质酮作用在10-910-6 mol/L范围内呈浓度依赖性.皮质酮快速作用不受蛋白质合成抑制剂影响.耦联牛血清白蛋白后, 快速作用仍然存在.但细胞外液无Ca2+影响甾体激素快速作用.结果提示皮质酮、孕酮和地塞米松对SK-N-SH细胞摄取甘氨酸的快速作用是通过甾体激素非基因组机制作用完成的.
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半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂普鲁司特调节SK-N-SH细胞分化
目的:观察半胱氨酰白三烯受体激动剂LTD4以及受体1(CysLT1)拮抗剂普鲁司特对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞分化的影响.方法:以维A酸为阳性对照,观察LTD4、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞形态学变化;用免疫印迹法观察SK-N-SH细胞CysLT1和CysLT2受体的表达;用免疫荧光法观察神经元分化标记物微管相关蛋白(MAP-2)的表达.结果:免疫印迹显示,SK-N-SH表达CysLT1受体和CysLT2受体,CysLT2受体表达较多.形态学结果显示,维A酸、普鲁司特、LTD4+普鲁司特诱导SK-N-SH细胞发生形态学改变,表现为胞体变小,有明显的突起生长;而LTD4无明显作用.免疫荧光结果显示,在对照组和普鲁司特组MAP-2主要分布于胞体;在维甲酸组MAP-2除了分布于胞体外,还分布于突起.普鲁司特增加MAP-2阳性细胞数.结论:CysLT1受体拮抗剂普鲁司特参与SK-N-SH细胞分化的调节.
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CREB诱骗寡核苷酸抑制吗啡依赖诱导SK-N-SH细胞神经元型一氧化氮合酶及fosB基因表达上调
目的研究转录因子 CREB的结合位点cAMP反应元件 (cAMP response element, CRE)的诱骗寡核苷酸 (CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide, CRE-decoy ODN) 对吗啡依赖SK-N-SH细胞的神经元型一氧化氮合酶 (Neuronal nitric oxide synthase, nNOS) 及fosB mRNA表达上调的抑制作用.方法建立吗啡依赖SK-N-SH细胞模型,体外合成含CRE序列的寡核苷酸,作为CRE-decoy ODN,与阳离子脂类N-[1-(2,3-dioleoyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium methylsulfate (DOTAP) 混合后导入细胞.采用放射自显影检测细胞内参入的CRE-decoy ODN.采用电泳迁移率改变分析(Electrophoresis mobility shift assay, EMSA) 及RT-PCR技术,分别检测CRE-decoy ODN对吗啡依赖诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosB mRNA表达的影响.结果 CRE-decoy ODN可在细胞内稳定存在,特异抑制吗啡依赖 SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性升高、nNOS和fosB mRNA表达上调.结论 CRE-decoy ODN通过特异抑制吗啡依赖SK-N-SH细胞的CREB的DNA结合活性而下调nNOS及fosB mRNA表达.
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nNOS基因在慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞的表达及调控
cAMP和转录因子CREB磷酸化水平升高是慢性吗啡依赖及耐受形成的基础.对于CREB与其调控的下游基因在其中的表达变化研究较少.首次研究了在慢性吗啡诱导的SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性及nNOS基因表达变化.该细胞株以1.5∶1的比例表达μ及δ受体,故实验结果更可靠.
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microRNA-183通过下调Bcl-2诱导人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的研究
目的 研究microRNA-183对神经母细胞瘤细胞的调控作用,为神经母细胞瘤的治疗提供新策略.方法 购买microRNA-183和对照microRNA,转染至人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞,再使用MTT实验,Caspase-3活性测定试剂盒和流式检测细胞生长和凋亡的影响.合成Bcl-2 siRNA,检测Bcl-2对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞凋亡的影响.转染Bcl-2质粒后,再转染microRNA-183至人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞,分析Bcl-2的表达水平和人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞的凋亡.结果 转染microRNA-183降低SK-N-SH细胞的生长(P=0.0059),发生磷脂酰丝氨酸膜表面表达(P=0.008)和Caspase-3的激活(P=0.014),Bcl-2的表达降低(P=0.015).干扰SK-N-SH细胞中Bcl-2增强了microRNA-183诱导的细胞凋亡(P=0.0058),而过表达Bcl-2抑制了microRNA-183诱导的细胞凋亡(P=0.0073).结论 转染microR-NA-183抑制SK-N-SH细胞的生长和增殖.microRNA-183通过下调Bcl-2而诱导SK-N-SH细胞的凋亡,提示Bcl-2可能是神经母细胞瘤潜在的候选治疗靶点.
关键词： 细胞凋亡 microRNA-183 Bcl-2 SK-N-SH细胞 -
敌敌畏对人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的氧化损伤作用
目的 研究敌敌畏(O,O-dimethyl-O-2,2-dichlorovinylphosphate,DDVP)对入神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)的氧化损伤作用. 方法 MEM培养基培养SK-N-SH细胞,细胞计数测定SK-N-SH细胞群体倍增时间;不同浓度(0～120 μmol/L) DDVP作用SK细胞48 h后,MTT法测定SK-N-SH细胞48h半数抑制浓度(IC50);巴氏染色后观察细胞形态变化;同时分别检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量的变化. 结果 SK-N-SH细胞群体倍增时间(36.28±1.46)h;48 h半数抑制浓度(IC50)为(105.22±5.80) μmol/L;随着DDVP染毒浓度的增高,细胞内MDA的含量逐渐增高,SOD、CAT活性逐渐降低,呈现明显的剂量一效应关系(P＜0.05). 结论 DDVP对SK-N-SH细胞有明显的氧化损伤作用.
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小白菊内酯通过阻断Akt,NF-KB信号通路诱导SK-N-SH细胞凋亡
目的 探讨小白菊内酯(parthenolide,PTL)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 MTT法检测不同浓度小白菊内酯对SK-N-SH细胞增殖的影响；倒置显微镜下观察不同浓度(10、15μmol/L)的PTL作用48 h后SK-N-SH细胞的形态学变化;流式细胞术检测PTL处理后SK-N-SH细胞凋亡率；Western Blot检测PTL作用48 h后SK-N-SH细胞p-Akt和NF-κ B p65蛋白表达的改变.结果 ①PTL抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长,并呈浓度依赖关系；②PTL作用SK-N-SH细胞48 h后,细胞数量减少,细胞固缩变圆,细胞内结构消失,细胞溶解；(③PTL处理SK-N-SH细胞后,细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P ＜0.01)；④PTL作用SK-N-SH细胞后,与对照组比较,p-Akt和NF-κB p65蛋白表达均降低(P＜0.05).结论 PTL能抑制SK-N-SH细胞的增殖,诱导其凋亡,PTL的抗瘤机制可能与抑制Akt,NF-κB传导通路有关.
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姜黄素体外抑制Aβ42聚集和毒性作用及结合老年斑的研究
目的 为了研究姜黄素对β-淀粉样多肽42 (Aβ42)聚集和神经毒性的影响,以及姜黄素对阿尔茨海默病(AD)患者脑组织中老年斑的结合情况.方法 通过硫磺素T(Th-T)荧光分析Aβ42蛋白体外聚集特点和姜黄素对Aβ42聚集的抑制作用;应用培养的SK-N-SH细胞、MTT法观察不同孵育时间的Aβ42神经毒性以及姜黄素对神经毒性的影响;利用姜黄素自发荧光特性观察其对AD病人海马组织石蜡切片中老年斑的结合作用.结果 Th-T荧光分析结果显示随着孵育时间的延长,Aβ42的荧光强度逐渐加强,在6d时荧光强度明显增加(P＜0.01),加入姜黄素(20μmol/L)能够显著降低Aβ42的荧光值;孵育时间超过0.5d的Aβ42对SK-N-SH细胞均可产生毒性作用,细胞存活率、细胞突起和长度均减小.而经姜黄素(20 μmol/L)治疗后,SK-N SH细胞存活率明显升高,细胞突起增多、变长;姜黄素还能够特异性标记AD病人海马组织中Aβ40/42抗体免疫阳性和免疫阴性老年斑.结论 姜黄素能够有效抑制Aβ42体外聚集,并减小其神经毒性.在AD病人海马组织切片上,姜黄素能够特异性结合AD病人脑中沉积的老年斑,具有比抗体更广泛的老年斑结合能力.上述结果提示姜黄素有可能成为阻止AD发生和阻断疾病进展的治疗性药物.
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山茱萸羟甲基糠醛对冈田酸致神经细胞形态及细胞骨架损伤的保护作用
目的 观察山茱萸活性成分山茱萸羟甲基糠醛(HMF)对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸(OA)致神经细胞骨架系统损伤的拮抗作用.方法 不同浓度的HMF与人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞预孵育24 h,弃去培养液,加100 nmol/L OA损伤4 h后,用MTT法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞的微管、微丝结构.结果 HMF(12.5～200 μg/mL)与SK-N-SH神经细胞预孵育能明显拮抗OA致细胞存活率的下降,使损伤的微管、微丝结构基本恢复正常.结论 HMF能够拮抗蛋白磷酸酶抑制剂致神经细胞损伤,其机制与保护细胞骨架系统有关.
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大肠杆菌胞外囊泡对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响
目的 研究大肠杆菌胞外囊泡(E.coli-OMVs)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖、凋亡和迁移的影响.方法 采用差速离心法提取大肠杆菌胞外囊泡,观察囊泡形态并测定囊泡粒径范围.随机分为4组:正常对照组、胞外囊泡低剂量组(100 μg/mL E.coli-OMVs)、胞外囊泡中剂量组(500 μg/mL E.coli-OMVs)和胞外囊泡高剂量组(1000 μg/mL E.coli-OMVs).MTT检测各组细胞增殖能力;TUNEL和Western blot分别检测各组细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白caspase3的表达;Transwell检测各组细胞迁移能力.结果 透射电镜下E.coli-OMVs呈双层膜、中空、圆形或椭圆形,其内含低密度或高密度物质,具有明显的异质性,粒径分析结果表明其直径分布在30~450 nm.与对照组相比,经E.coli-OMVs干预后,SK-N-SH细胞增殖能力显著降低;细胞凋亡增加,caspase3蛋白表达水平明显上调;而迁移能力显著降低(P<0.05).结论 E.coli-OMVs对SK-N-SH细胞具有直接杀伤作用,有望成为难治性神经母细胞瘤的治疗药物.
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转录因子CREB激活介导吗啡依赖SK-N-SH细胞的nNOS及fosB基因表达的调控机制
目的探讨吗啡依赖的SK-N-SH细胞表达神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)及fosB基因的调控机制.方法建立吗啡依赖及戒断细胞模型,体外合成含cAMP反应元件(cAMP response element,CRE)序列的寡核苷酸,经硫代磷酸化修饰,作为单链寡核苷酸(CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide,CRE-decoy ODN).分别采用电泳迁移率改变分析(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)及RT-PCR技术,检测CRE-decoy ODN对吗啡依赖及纳络酮急性戒断诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA表达的影响.结果吗啡依赖及纳络酮急性戒断使SK-N-SH细胞的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA明显升高,CRE-decoy ODN可特异抑制上述指标升高.结论CREB的激活介导了吗啡依赖SK-N-SH细胞的nNOS及fosB mRNA表达上调.
