首页 > 文献资料
-
双歧杆菌对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜内细胞因子表达和NF-κB激活的影响
目的建立小鼠溃疡性结肠炎(UC)动物模型;应用双歧杆菌活制剂,观察其对UC发生、发展的影响,并检测其对TNF-α、IL-1β的表达和NF-κB活性的影响. 方法用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)口饲法制备小鼠UC模型;给小鼠口服双歧杆菌(Bifidobacterium,Bf)活菌,观察UC的症状和组织学变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测UC小鼠肠黏膜内TNF-α、IL-1β的表达水平进行半定量测定;应用免疫电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)法检测UC小鼠肠黏膜细胞NF-κB的激活. 结果应用双歧杆菌制剂后,UC的症状、组织损害均较模型组明显减轻.同时TNF-α、IL-1β的表达较单纯模型组降低(P＜0.05),NF-κB 的核结合活性也降低,但较正常对照组仍明显增加. 结论生态制剂Bf对UC的发生有预防作用,可能是通过抑制NF-κB 的核结合活性,进而降低致炎细胞因子的表达完成的.
-
活血承气汤对小肠缺血再灌注家兔小肠及肺组织NF-κB活性的影响
目的:观察和探讨应用活血承气汤(HXCQ)对小肠缺血再灌注家兔小肠及肺组织NF-κB活性的影响.方法:建立小肠缺血再灌注家兔模型,采用电泳迁移率改变分析方法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA),分析活血承气汤灌胃后不同时段小肠缺血再灌注家兔小肠以及肺组织NF-κB活性的变化.结果:应用活血承气汤后小肠缺血再灌注家兔小肠和肺组织NF-κB活性显著降低.结论:应用活血承气中药可显著减轻小肠缺血再灌注引起的小肠及肺组织损伤.
-
青蒿素对糖尿病大鼠肾组织 AP -1的 DNA结合活性升高的抑制作用
目的：探讨青蒿素对实验糖尿病大鼠肾组织转录因子活化蛋白-1（AP-1）的DNA结合活性升高的抑制作用。方法将75只实验大鼠分成正常对照组（ A组）、糖尿病非治疗组（B组）及青蒿素治疗组（C组），B、C组应用腹腔单剂量注射链脲佐菌素（STZ）65 mg/kg建立糖尿病大鼠模型。 C组给予腹腔注射青蒿素300 mg/（ kg· d）。于实验进行到第4周时处死各组大鼠，取部分右肾皮质，应用电泳迁移率改变分析（ EMSA）法观察青蒿素对实验糖尿病大鼠肾组织AP-1的DNA结合活性的影响，并制备病理切片以观察肾组织的病理学变化。结果 B组大鼠肾细胞 AP-1的DNA结合活性较A组显著上升，C组大鼠对肾细胞AP-1的DNA结合活性有显著抑制作用，并显著改善糖尿病大鼠肾脏组织的病理变化。结论青蒿素通过下调糖尿病大鼠肾组织AP-1的DNA结合活性上调而改善糖尿病大鼠肾脏组织病理改变。
-
CRE-decoy ODN对大鼠吗啡戒断症状的抑制作用
目的 研究以转录因子CREB为靶点的CRE-decoy ODN对大鼠吗啡戒断症状的影响.方法 合成全硫代磷酸化ODN.实验分为5组:0.9%氯化钠溶液对照组,侧脑室0.9%氯化钠溶液注射对照组,吗啡依赖组,吗啡戒断组,吗啡戒断CRE-decoy ODN治疗组.制备吗啡身体依赖模型:采用递增剂量皮下注射吗啡建立大鼠吗啡身体依赖模型.0.9%氯化钠溶液对照组和侧脑室0.9%氯化钠溶液注射对照组大鼠注射等体积0.9%氯化钠溶液.对吗啡戒断治疗组大鼠在末次吗啡注射前30 h,每只大鼠于左侧侧脑室内注射CRE-decoy ODN 20 μg,侧脑室0.9%氯化钠溶液注射对照组、吗啡依赖组和吗啡戒断组每只大鼠则于左侧侧脑室内注射等体积0.9%氯化钠溶液.吗啡戒断大鼠的行为学评定:腹腔注射纳络酮后,由不知情的观测者随即观测大鼠的戒断行为,每15分钟为一时间段,连续观测1 h内上述行为的发生频率,后计算戒断0～60 min的总评分.进行体重丢失的戒断评分:体重丢失百分率(ΔW)=纳络酮注射前与注射1 h后的体重差/纳络酮注射前体重×100%.结果 CRE-decoy ODN明显抑制吗啡戒断大鼠0～60 min戒断症状的总评分,使其从(24.0±0.7)分降至(15.0±0.9)分(P<0.01).CRE-decoy ODN明显抑制吗啡戒断大鼠0～60 min的体重丢失,反映戒断症状综合性指标的体重丢失百分率ΔW从(7.2±1.2)%降至(4.1±0.8)%(P<0.01).结论 CRE-decoy ODN明显减轻吗啡戒断大鼠的戒断症状.
-
姜黄素对糖尿病大鼠肾组织AP-1的DNA结合活性升高的抑制作用
目的 探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾组织转录因子活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的DNA结合活性升高的抑制作用.方法 大鼠随机分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)及姜黄素治疗组(C组),采用腹腔单剂量注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)65mg/kg建立糖尿病大鼠模型.治疗组给予姜黄素30mg/kg·d腹腔注射.实验第4周各组分别宰杀5只大鼠,取部分右肾皮质,采用电泳迁移率改变分析(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)检测姜黄索对糖尿病大鼠肾组织AP-1的DNA结合活性的影响,并观察肾组织的病理变化.结果 糖尿病大鼠肾组织AP-1的DNA结合活性明显升高,姜黄素对其有显著抑制作用,并减轻糖尿病大鼠肾脏病变.结论 姜黄素通过抑制糖尿病大鼠肾组织AP-1的DNA结合活性升高而减轻糖尿病大鼠肾脏病变.
-
改良EMSA法分析人α1(Ⅰ)胶原基因序列特异性DNA结合蛋白
目的:分析人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼区具有较高启动调控活性序列的DNA结合蛋白.方法:以原代培养人瘢痕皮肤成纤维细胞为胶原产生细胞,采用限制性内切酶消化、DNA混合片段末端标记和增强化学发光的改良电泳迁移率改变实验 (EMSA)分析人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼区-268～+42 bp序列DNA结合蛋白.结果:在胶原产生细胞--人瘢痕成纤维细胞中存在α1(Ⅰ)胶原基因-268～+42 bp序列的DNA结合蛋白,其结合活性具有特异性,并能被Sp-1,NF-1,NF-κB识别序列所竞争.结论:改良EMSA法可用于分析较长序列的DNA结合蛋白,人α1(Ⅰ)胶原基因-268～+42 bp序列中存在转录因子Sp-1,NF-1,NF-κB结合序列,这些转录因子结合位点可能与人α1(Ⅰ)胶原基因-268～+42 bp序列的高启动活性有关.
-
CREB诱骗寡核苷酸抑制吗啡依赖诱导SK-N-SH细胞神经元型一氧化氮合酶及fosB基因表达上调
目的研究转录因子 CREB的结合位点cAMP反应元件 (cAMP response element, CRE)的诱骗寡核苷酸 (CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide, CRE-decoy ODN) 对吗啡依赖SK-N-SH细胞的神经元型一氧化氮合酶 (Neuronal nitric oxide synthase, nNOS) 及fosB mRNA表达上调的抑制作用.方法建立吗啡依赖SK-N-SH细胞模型,体外合成含CRE序列的寡核苷酸,作为CRE-decoy ODN,与阳离子脂类N-[1-(2,3-dioleoyloxy)propyl]-N,N,N-trimethylammonium methylsulfate (DOTAP) 混合后导入细胞.采用放射自显影检测细胞内参入的CRE-decoy ODN.采用电泳迁移率改变分析(Electrophoresis mobility shift assay, EMSA) 及RT-PCR技术,分别检测CRE-decoy ODN对吗啡依赖诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosB mRNA表达的影响.结果 CRE-decoy ODN可在细胞内稳定存在,特异抑制吗啡依赖 SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性升高、nNOS和fosB mRNA表达上调.结论 CRE-decoy ODN通过特异抑制吗啡依赖SK-N-SH细胞的CREB的DNA结合活性而下调nNOS及fosB mRNA表达.
-
银染法用于EMSA分析检测三链核酸形成
目的探讨银染法在三链形成的电泳迁移率改变分析(EMSA)中的可行性,从而为三链核酸研究提供有效的非同位素检测方法. 方法三链形成反应后进行EMSA分析,然后用银染显示电泳形成的DNA区带. 结果银染法显示出三链的EMSA滞后带,并揭示三链形成的平台效应. 结论本文首次表明银染法可用于三链形成的EMSA分析快速检测,且SOX9基因内含子1中序列具有较高的三链形成特异性及稳定性.
-
人肺癌细胞转录因子--C/EBP和HMG样蛋白的EMSA检测
目的检测人肺癌细胞中是否存在与Na+/H+ 交换蛋白-1(NHE-1)基因转录相关的重要转录因子--C/EBP和HMG样蛋白.方法采用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测人肺癌细胞株核蛋白中C/EBP和HMG样蛋白的表达及其水平.结果 EMSA检测到A549细胞和转染NHE-1反义载体的A549细胞均有转录因子C/EBP和HMG样蛋白的表达,且后者表达水平高于前者;采用50倍未标记的片段能完全抑制相应转录因子与32P标记的相同片段的结合.结论 A549细胞核蛋白中存在能与C/EBP结合序列和Poly(dA∶dT)区结合的转录因子,即C/EBP和HMG样蛋白,后者的表达水平高于前者.特异性竞争抑制试验表明外源性特异DNA片段能抑制相同片段与转录因子的结合.
关键词： Na+/H+ 交换蛋白-1 转录调控 电泳迁移率改变分析
