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一种对阿尔茨海默病模型小鼠认知和记忆功能具有明显改善作用的中药方剂
目的:探索对阿尔茨海默病(AD)病人认知和记忆能力具有明显改善作用的中药方剂.方法:通过Balb/c小鼠侧脑室微量注射聚集态β-淀粉样多肽(β-AP25-35),建立模拟AD的小鼠动物模型,并通过行为学实验和脑组织组织化学检测,研究了中医经典药方柴胡加龙骨牡蛎汤、当归芍药散和作者自己研制的两种中药复方CHP I和CHP Ⅱ对该小鼠模型认知和记忆能力的疗效作用.同时,以西药脑复康做对照.结果:CHP Ⅱ对AD模型小鼠的认知和记忆能力具有明显的改善.结论:本研究提示从中药中寻找治疗AD的药物具有较好的前景.
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764-3对Alzheimer’s 病样大鼠的治疗作用
向大鼠侧脑室内注射聚集态的β-淀粉样多肽(Aβ 25-35)15mmol后，动物在三种行为试验中都出现学习记忆障碍，同时海马和大脑皮层的胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性下降。这表明应用Aβ 25-35脑室内注射造成Alzheimer’s病动物模型的可行性。764-3于手术后早期多次给药(2mg/0.5mL 每天1次i.p.)明显改善Aβ 25-35所致的学习记忆缺陷，并使海马的ChAT回升。本文又首次报告Aβ 25-35引起前脑多个脑区的一氧化氮合酶(NOS)表达上调，764-3拮抗此反应。结果提示764-3的作用机制与其在脑内提高ChAT活性和抑制病理性的NOS表达有关。
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灵芝多糖对阿尔茨海默病大鼠海马组织形态学及抗氧化能力的影响
目的 观察灵芝多糖(GLP)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以及空间学习记忆能力等的影响.方法 双侧海马内-次性注射β-淀粉样多肽25～35片段(Aβ25～35)制作大鼠AD模型,腹腔注射灵芝多糖水溶液,1周后进行Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力变化,采用分光光度法测定大鼠海马组织SOD活性和MDA含量,采用透射电镜观察海马神经元的超微结构变化,以及灵芝多糖对上述各指标的影响.结果 灵芝多糖能明显改善AD模型大鼠低下的空间学习记忆能力,显著提高模型大鼠海马组织SOD活性及降低MDA含量,而且灵芝多糖能明显改善模型大鼠脑组织海马CAl区神经元的退行性变化.结论 灵芝多糖能提高海马内抗氧化酶SOD活性,降低丙二醛MDA含量,改善海马CA1区神经元的退行性变化,对老年性痴呆大鼠学习记忆能力可能有增强和提高作用.
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杏仁核注射Aβ1-42大鼠脑内星形胶质细胞形态学变化
目的探讨Aβ1-42诱导模拟人类Alzheimer's病(AD)的大鼠病理模型中星形胶质细胞形态学变化及其在AD中的作用机制.方法双侧杏仁核内注射β-淀粉样多肽1～42片段(Aβ1-42)制作大鼠AD模型,注射一周后采用GFAP免疫组化染色分析大鼠海马GFAP的表达.结果杏仁核内注射Aβ1-42后海马区出现星形胶质细胞增生、肥大、数目明显多于对照组(P＜0.05).结论AD模型神经元损伤、死亡与Aβ神经毒性直接相关,反应性星形胶质细胞参与Aβ导致神经元细胞毒性损伤作用.
关键词： 星形胶质细胞 β-淀粉样多肽 Alzheimer病 -
非肽类β-分泌酶1(BACE1)抑制剂的研究进展
β-分泌酶1 (β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1)是存在于中枢神经系统的天冬氨酸蛋白酶,能够催化β-淀粉样多肽(Aβ)形成中的第一步也是关键一步的反应,因而被认为是调节认知障碍、治疗阿尔兹海默症(AD)的关键靶点.自2000年BACE1的结构被解析出来后,其抑制剂的研究始终是药物化学领域的热点.随着高通量筛选和基于片段的药物发现等技术的广泛应用,大量非肽类小分子BACE1抑制剂被设计与合成,并且部分化合物已经进入了临床研究阶段.本文对近5年来非肽类BACE1抑制剂的研究进展进行综述.
关键词： β-分泌酶1 非肽类BACE1抑制剂 β-淀粉样多肽 -
硫化氢对Aβ25-35致PC12细胞损伤的保护作用
目的 探讨H2S对Aβ25-35致PC12细胞损伤的保护作用.方法 应用NaHS作为H2S的供体,甲氮甲唑蓝法检测细胞成活率,Hoechst染色检测细胞凋亡,碘化丙啶染色流式细胞技术检测细胞凋亡率.结果 5～80 μmol/L的Aβ25-35呈浓度依赖性地引起PC12细胞的存活率显著降低(P＜0.01)、凋亡率明显升高(P＜0.01);100 μmol/L NaHS与20 μmol/L Aβ25-35共同作用于PC12细胞24 h后,NaHS浓度依赖性地阻断Aβ25-35引起的PC12细胞存活率降低,升高了的细胞凋亡率(P＜0.01).结论 H2S对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有保护作用.
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微量Aβ1-40诱导的α3、α7烟碱型乙酰胆碱能受体的低表达(一种老年性痴呆细胞模型)
目的探讨老年痴呆症(AD)患者大脑中,大量神经元烟碱型胆碱能受体(nAChRs)丢失是否与β-淀粉样多肽(Aβ)沉淀的关系及其影响nAChRs表达的机制,建立一种老年性痴呆早期研究离体模型.方法采用MTT、Annexin-V、配体结合实验以及Western Blot、RPA法,观察PC12细胞在Aβ侵害早期,细胞损伤机制.结果显示用纳摩尔浓度Aβ1-40能明显降低PC12细胞[125Ⅰ]α-Bungarotoxin和[3H]Epibatidine结合位点数量,引起α3、α7和β2亚单位蛋白和α3、α7mRNA水平的下降,但不诱导凋亡,却明显抑制MTT.结论Aβ引起的nAChRs生物合成降低,可能部分归因于细胞内在信号传导系统.本研究提示,在AD病程早期大量Aβ纤维形成之前,Aβ可直接引起nAchRs退行性改变.应用药物修复nAChRs,干预Aβ对nAChR,尤其是对α7nAChR的毒性作用是预防和治疗AD的一条重要途径.
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β-淀粉样多肽低分子量寡聚体对大鼠学习记忆功能的影响
目的:探究Aβ低分子量寡聚体对大鼠学习记忆功能的影响；方法:双侧海马内一次性注射Aβ低分子量寡聚体,15天后开始进行行为测试,测试方法采用跳台实验法、穿梭实验法和Moms水迷宫法；结果:跳台实验结果显示,与对照组比较,Aβ组跳台潜伏期短,错误次数多,差异有统计学意义(P＜0.05)；穿梭实验结果显示,与对照组比较,Aβ组由明箱进入暗箱的潜伏期短,错误次数多,差异有统计学意义(P＜0.05)；水迷宫实验结果显示,与对照组比较,Aβ组潜伏期长,跨越原平台次数少,差异有统计学意义(P＜0.01)；结论:Aβ组大鼠学习记忆能力和空间分辨能力降低,Aβ低分子量寡聚体在大鼠体内表现出较强的毒性作用.
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β-淀粉样多肽诱导神经元凋亡和氧化应激机制的实验观察
目的:观察β-淀粉样多肽(Aβ)的神经毒性作用及其氧化应激机制.方法:取20只大鼠,每组10只,实验组双侧海马内注射Aβ25-35,对照组注射生理盐水;HE染色和TUNEL方法检测凋亡;另一侧海马组织制成脑匀浆,比色法测定丙二醛(MDA)、还原型谷光甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)和谷光甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;统计学分析用t检验.结果:HE染色和TUNEL法检测实验组可见散在凋亡神经元.与对照组相比,实验组MDA水平增加,GSH水平降低,CAT和GSH-Px活力降低.结论:Aβ可诱导神经元凋亡,其机制有氧化应激机制介导.
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MK-801对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力及Aβ表达的影响
目的:研究地卓西平(MK-801)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及神经元固缩、β-淀粉样多肽(Aβ)表达的影响.方法:将32只雄性SD大鼠随机分为AD模型+MK-801、AD模型+生理盐水、假手术+ MK-801、假手术+生理盐水4组.向大鼠侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)制备AD模型,侧脑室注射柠檬酸缓冲液制备假手术模型.造模后10 d,4组分别腹腔注射MK-801或生理盐水,连续30 d.在造模后10 d和给药后30 d行水迷宫测试.后将脑组织制作石蜡切片,HE染色观察神经元固缩率,免疫组织化学染色观察神经元Aβ阳性率.结果:给药后30日,AD模型+MK-801组比AD模型+生理盐水组大鼠潜伏期缩短,跨台次数增加,神经元固缩率和Aβ阳性率减少,差异有统计学意义(P＜0.05);比较AD模型两组与假手术两组的差异:腹腔注射MK-801比生理盐水潜伏期差异缩短,跨台次数差异增加,细胞固缩率和Aβ阳性率差异减少,此变化有统计学意义(P＜0.05).结论:腹腔注射MK-801能改善AD模型大鼠的学习记忆功能障碍,抑制神经元固缩、Aβ沉积.
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β-淀粉样多肽25～35片段诱导的大鼠学习记忆功能障碍
目的诱导能模拟人类Alzheimer病（AD）的大鼠病理模型，用于该病的病理机制和治疗药物的研究。方法采用双侧海马内一次性注射β-淀粉样多肽25～35片段（Aβ25～35）诱导大鼠AD模型；行为测试采用跳台法、穿梭法和Morris水迷宫法；病理检测采用HE染色、刚果红染色和银染。结果跳台法、穿梭法和Morris水迷宫法试验结果提示海马内注射Aβ25～35可引起大鼠主动和被动回避性反射及空间分辨力降低；病理检查发现皮质和海马神经元数量减少、退变，皮质下血管淀粉样变及脑内出现纤维蛋白丝状物。结论海马内注射Aβ25～35诱导的大鼠学习记忆功能低下模型在功能和形态上类似于AD。
关键词： β-淀粉样多肽 Alzheimer病 学习记忆 -
运动训练对血管性痴呆大鼠海马β淀粉样蛋白及β分泌酶的影响
目的 研究运动训练对血管性痴呆(VD)大鼠海马β-淀粉样多肽(Aβ)及β分泌酶(BACE)的影响.方法 将30只SD大鼠数字随机表分为运动组,模型组和假手术组,采用结扎双侧颈总动脉法制做VD大鼠模型,术后4周后行水迷宫检测评估大鼠学习记忆能力.采用免疫组化技术检测大鼠海马Aβ,BACE表达.结果 Morris水迷宫实验中,模型组学习记能力下降,逃避潜伏期[分别为(101.34±19.67)s,(95.42±23.89)s,(89.39±22.67)s,(90.12±19.77)s]明显长于假手术组[对应为(62.13±11.38)s,(24.84±13.69)s,(16.98±12.51)s,(11.41±8.93)s] (P＜0.05),运动组较模型组学习记能力增强[对应为(80.15 ±21.56)s,(51.24±20.91)s,(43.78±22.36)s,(45.67±20.87)s],差异有统计学意义(P＜0.05).运动组大鼠海马Aβ灰度值(130.12±19.01),模型动组为(116.77±23.67),假手术组为(148.44±17.67),各组之间差异有统计学意义(P＜ 0.05).运动组大鼠海马BACE灰度值(131.21±25.25),模型组为(120.53±10.21),假手术组为(162.38 ±28.11),各组之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 运动训练可下调VD大鼠海马BACE及Aβ的表达,进而改善VD大鼠学习记忆能力.
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康复训练对血管性痴呆大鼠海马β淀粉样多肽及胰岛素降解酶的影响
目的 观察康复训练对血管性痴呆(VD)大鼠海马β-淀粉样多肽(Aβ)及胰岛素降解酶(IDE)的影响.方法 共选取30只SD大鼠,采用随机数字表法将其分为康复组、模型组及假手术组.选用结扎双侧颈总动脉方法制成VD大鼠模型,康复组每天进行1h康复训练.于术后第4周进行行为学测试,以评估各组大鼠学习记忆能力；待行为学测试结束后采用免疫组化法检测各组大鼠海马(DG)区Aβ及IDE表达.结果 术后第4周时发现康复组大鼠学习记忆功能明显优于模型组(P＜0.05)；且康复组大鼠海马区Aβ表达较模型组显著降低(P＜0.05),IDE表达则较模型组明显增高(P＜0.05).结论 康复训练能改善VD大鼠学习记忆功能,其治疗机制可能与上调IDE表达、减少Aβ在海马中的蓄积有关.
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他汀类药物减少神经细胞内β-淀粉样多肽的聚集
目的:探讨他汀类药物对β淀粉样多肽(Aβ)生成的影响.方法:将入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞分为对照组、转染组、阿托伐他汀干预组和辛伐他汀干预组,对照组不予任何处理,其它3组通过pcDNA3.0-YFP-C99质粒转染构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型,阿托伐他汀干预组和辛伐他汀干预组分别加入不同浓度(5、10、20、50、100 μmol/L)的阿托伐他汀、辛伐他汀.4组均在培养前和培养12、24、48、72 h时,通过荧光显微镜定性观察,ELISA和Western blot定量分析细胞内Aβ的变化.结果:荧光显微镜下观察他汀类药物能显著减少细胞内Aβ聚集.不同浓度的他汀类药物和细胞培养时间均能减少Aβ,呈浓度-时间依赖性.他汀类药物浓度为20 μmol/L和细胞培养24 h时,各组间的Aβ减少有统计学意义(P＜0.05).结论:不同种类的他汀类药物能减少细胞内Aβ聚集,并且具有浓度-时间依赖性.
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姜黄素体外抑制Aβ42聚集和毒性作用及结合老年斑的研究
目的 为了研究姜黄素对β-淀粉样多肽42 (Aβ42)聚集和神经毒性的影响,以及姜黄素对阿尔茨海默病(AD)患者脑组织中老年斑的结合情况.方法 通过硫磺素T(Th-T)荧光分析Aβ42蛋白体外聚集特点和姜黄素对Aβ42聚集的抑制作用;应用培养的SK-N-SH细胞、MTT法观察不同孵育时间的Aβ42神经毒性以及姜黄素对神经毒性的影响;利用姜黄素自发荧光特性观察其对AD病人海马组织石蜡切片中老年斑的结合作用.结果 Th-T荧光分析结果显示随着孵育时间的延长,Aβ42的荧光强度逐渐加强,在6d时荧光强度明显增加(P＜0.01),加入姜黄素(20μmol/L)能够显著降低Aβ42的荧光值;孵育时间超过0.5d的Aβ42对SK-N-SH细胞均可产生毒性作用,细胞存活率、细胞突起和长度均减小.而经姜黄素(20 μmol/L)治疗后,SK-N SH细胞存活率明显升高,细胞突起增多、变长;姜黄素还能够特异性标记AD病人海马组织中Aβ40/42抗体免疫阳性和免疫阴性老年斑.结论 姜黄素能够有效抑制Aβ42体外聚集,并减小其神经毒性.在AD病人海马组织切片上,姜黄素能够特异性结合AD病人脑中沉积的老年斑,具有比抗体更广泛的老年斑结合能力.上述结果提示姜黄素有可能成为阻止AD发生和阻断疾病进展的治疗性药物.
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表没食子儿茶素没食子酸酚对β-淀粉样多肽损伤的星形胶质细胞的保护作用
目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酚(EGCG)对异常蛋白β-淀粉样多肽(Aβ)损伤星形胶质细胞(AS)的保护作用,进一步探讨其作用机理.方法 采用原代细胞培养技术,分离培养新生1d大鼠皮质AS,细胞纯化后,加入Aβ进行处理,随后加入不同浓度(0.1、1、5、10、25、50μmol/L)的EGCG培养24h,观察细胞的形态学变化;MTT比色法进行细胞活性分析、AS中丙二醛(MDA)以及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化的检测;比较上述指标在损伤前后的变化.结果 EGCG能够减轻Aβ对AS的损伤,抑制AS的MDA的产生,降低AS外液中LDH的含量,增强细胞的活性.结论 EGCG能够抑制Aβ对AS的损伤作用,并且对其有神经保护作用,这种保护作用可能与其抑制Aβ引起细胞过度氧化有关.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酚 星形胶质细胞 β-淀粉样多肽 细胞培养 -
ATP敏感钾通道在硫化氢钠对抗β-淀粉样肽诱导细胞损伤中的作用
[目的]探讨ATP敏感性钾通道(KATP)在硫化氢(H2S)对抗β-淀粉样多肽(Aβ)诱导嗜铬细胞瘤细胞(PC12)细胞损伤中的作用.[方法]应用硫化氢钠(NaHS)作为H2S的供体,碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst染色检测细胞凋亡的形态学变化,罗丹明123(Rh123)染色FCM检测细胞线粒体膜电位(MMP),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量.[结果]20μmol/L和40 μmol/L Aβ25-35能明显地诱导PC12细胞凋亡,增加细胞凋亡率,并能明显地抑制PC12细胞MMP及增加细胞内ROS生成;100 mol/L和200 μmol/L NaHS本身不损伤PC12细胞,但能明显地抑制Aβ25-35的致细胞凋亡作用,降低PC12细胞的凋亡率,并能显著地抑制Aβ25-35引起的MMP降低及胞内ROS水平增多;在应用NaHS与Aβ25-35作用PC12细胞之前30 min,应用KATP抑制剂Glybenclamide(Gly)(10 μmol/L)对PC12细胞进行预处理,能部分地对抗NaHS的细胞保护作用,使PC12细胞凋亡率增加,MMP降低及ROS生成增多.[结论]NaHS能明显对抗Aβ25-35对PC12细胞的损伤作用,此细胞保护作用可能与NaHS保护PC12细胞的MMP及抑制胞内ROS生成有关;KATP通道抑制剂Gly能部分地阻断NaHS的细胞保护作用,提示KATP通道开放可能是NaHS对抗Aβ25-35损伤作用的机制之一.
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内质网功能异常与阿尔茨海默病
内质网功能异常可引起一系列神经功能紊乱疾病,包括缺血再灌注损伤、睡眠呼吸暂停综合征、阿尔茨海默病、多发性硬化、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、帕金森病等.在中风过程中,能量缺乏的神经元内质网中未折叠蛋白反应可引起蛋白质错误折叠,此与再灌注的毒性反应有关.在阿尔茨海默病中毒性肽β-淀粉样多肽诱导的ER应激激活类似的途径,而具体机制并不十分清楚.对大多数神经退行性疾病可视为由蛋白折叠缺陷引起.此论证在因突变神经元蛋白错误折叠所导致的罕见疾病如亨廷顿病中得到证实,但也发生在常见疾病如脑缺血性疾病中,低能量可破坏蛋白的正常折叠[1].在散发的阿尔茨海默病中,蛋白聚集可引起细胞应激[2,3].因此,处理错误折叠蛋白的进程是目前研究的重点.尽管这些疾病蛋白错误折叠的亚细胞场所不尽相同,但蛋白折叠的相互依赖性遍及整个细胞,说明内质网功能异常可能是许多神经系统疾病终的共同路径[1,4].充分了解自噬的确切功能对于阿尔茨海默病的治疗和预防具有重要意义.现就内质网功能异常与阿尔茨海默病的相关关系综述如下.
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黄皮酰胺对β-淀粉样多肽25～35片段诱导的大鼠学习记忆功能障碍的影响
目的:研究黄皮酰胺对诱导产生的模拟人类Alzheimer病(AD)的病理模型大鼠的影响.方法:采用文献报道的方法获得病理模型,并以口服方式给予黄皮酰胺,观察其与对照组在行为学上的差异.行为测试采用跳台法和Y型水迷宫法.结果:给药组与对照组在行为学上的差异有统计学意义.结论:黄皮酰胺可显著抑制病理模型的学习记忆功能障碍.
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ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的条件探讨
目的 探讨硫黄素(ThT)结合试验法检测β-淀粉样多肽l～42(Aβ42)聚集情况的条件.方法 Aβ42经六氟异丙醇(HFIP)单体化处理后,进行复溶,然后将Aβ42与ThT溶于缓冲体系,一定温度下于96孔板中共孵育不同时间,酶标仪检测450 nm激发下485 nm的荧光强度.分析Aβ42不同的浓度,孵育温度,96孔板类型,缓冲液种类以及复溶方式对ThT结合试验法测定Aβ42聚集情况的影响.结果 在ThT结合试验法中,Aβ42孵育浓度与荧光值成线性正比关系,孵育温度对此正比关系无较大影响;选用半透明板及PBS缓冲体系与其它条件相比,此线性正比关系更稳定;以终NH3·H2O 20 mmol/L的浓度加入1％ NH3·H2O对单体化处理后的Aβ42复溶,并进行过滤的方法,与其它方法相比,寡聚体更少,以终2％ v/v (DMSO/PBS)的比例加入二甲基亚砜(DMSO)进行复溶的方法,寡聚体较多,且Aβ42更快更多地发生了聚集;而利用ThT结合试验法研究Aβ42由单体到聚合体进程变化的动力学时,使用20 mmol/L NH3·H2O复溶方式进行复溶,观察到的动力学趋势过程更明显直观.结论 不同条件对ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的结果影响较大,条件不同结果不同,实验中应根据实验目的及具体情况来选择不同的条件.
