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Bax α高表达PC12细胞系的建立及(-)黄皮酰胺抗细胞凋亡作用机制的研究
目的用Bax α高表达的PC12细胞研究了(-)黄皮酰胺的抗细胞凋亡作用.方法先将Bax α cDNA从原核载体pBluescript SK克隆到真核载体pcDNA3.用脂质体转染的方法将pcDNA3-Bax α导入PC12细胞.以6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导Bax α高表达PC12细胞的凋亡.结果 (-)黄皮酰胺(0.1～10 μmol·L-1)可使细胞凋亡率显著降低.结论 (-)黄皮酰胺可以抑制细胞凋亡,对神经退行性病变有一定应用前景.
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反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中左旋黄皮酰胺及其主要代谢产物和药代动力学
目的探讨左旋黄皮酰胺[(-)clau]及其主要代谢产物6-OH-clau在大鼠体内的药代动力学.方法建立了RP-HPLC-UV法.固定相为Kromasil-100 C18(5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-甲醇-水(21∶16.5∶62.5), DM-9384作内标,氯仿作提取溶剂.结果测得(-)clau的回收率为96.91%～105.74%,日内、日间RSD低于7%,低检测浓度为24 ng.mL-1,(-)clau和6-OH-clau分别在0.047～968 μg.mL-1和0.049～200 μg.mL-1,线性关系良好(γ=0.999);(-)clau和6-OH-clau血浆浓度-时间曲线符合二室开放模型,同时求得两者的药代动力学参数.结论数据表明(-)clau在大鼠血浆中的分布、代谢转化和消除均较快.
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黄皮酰胺对映体在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学
目的研究黄皮酰胺(clausenamide,Clau)对映体在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学并比较其立体选择性差异.方法应用反相HPLC法测定Clau对映体在体外代谢系统中的产物,并用Eadie-Hofstee作图法分析数据、求算酶促反应动力学参数Km和Vmax以及肝代谢速率Vmax/Km.结果在体外代谢系统中,左旋黄皮酰胺主要生成7-羟-Clau、5-羟-Clau和4-羟-Clau,其优势代谢途径为7位羟化;7位羟化代谢的Vmax/Km值高于5位和4位.右旋黄皮酰胺的4位羟化反应Km小、Vmax大, 因此代谢速率高,是左旋体4位羟化的8倍;而其7-羟-Clau和5-羟-Clau 的产生量很小.结论黄皮酰胺对映体在大鼠肝微粒体中的羟化代谢存在明显的底物立体选择性差异.
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手性黄皮酰胺的研究进展
黄皮酰胺是从中药黄皮叶中提取到的天然成分,现已完成其16个光学活性异构体的合成和拆分.通过对其中一对对映体(-)黄皮酰胺和(+)黄皮酰胺的深入研究发现,其代谢转化、药理作用等均具有立体选择性,即其中(-)黄皮酰胺是有效对映体,具有显著的保肝、促智、抗神经细胞凋亡等作用,而(+)黄皮酰胺为劣映体.现对手性黄皮酰胺的代谢转化、药动学和对神经系统的作用及机制研究进展进行综述.
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光学活性黄皮酰胺类化合物体外对黄曲霉毒素B1损伤大鼠肝细胞非程序性DNA合成的保护作用
目的 研究9 种光学活性黄皮酰胺类化合物体外对黄曲霉毒素 B1(AFB1)引起大鼠肝细胞非程序性 DNA 合成(UDS)损伤和谷丙转氨酶(GPT)释放的保护作用有无差异.方法 用胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞.将分离的大鼠肝细胞与羟基脲(终浓度 10 mmol·L-1)和所试化合物于 37℃ 5% CO2 培养1 h,再加入 AFB1 (终浓度 0.1 μmol·L-1)和[3H]TdR, 测定UDS合成和GPT释放的量.结果 所试9 种光学活性黄皮酰胺类化合物在 0.1 mol·L-1浓度时,右旋(+)黄皮酰胺、左旋(-)新黄皮酰胺、消旋(±)新黄皮酰胺、(-)表新黄皮酰胺和(±)表新黄皮酰胺对 AFB1 引起的大鼠肝细胞 UDS 损伤有显著的阻抑作用;而(-)黄皮酰胺、(+)新黄皮酰胺和(±)新黄皮酰胺、(-)表新黄皮酰胺和(±)表新黄皮酰胺则能显著抑制 AFB1 引起的大鼠肝细胞 GPT 的释放.(±)黄皮酰胺和右旋表新黄皮酰胺二者则对 UDS 损伤和 GPT 释放均无影响.结论 黄皮酰胺类化合物对上述的AFB1引起大鼠肝细胞非程序性UDS合成的损伤和GPT释放的不同作用与其立体结构的不同有关系,5S6R 构型有利于保护 AFB1 引起的大鼠肝细胞 UDS 损伤,而5R6S 构型则利于保护 AFB1 引起的大鼠肝细胞 GPT 的释放.
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黄皮酰胺对高血压局灶性脑缺血-再灌注大鼠Bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的影响
目的观察黄皮酰胺对肾性高血压大鼠(RHR)脑缺血-再灌注后Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响,探讨其脑保护作用机制.方法 75只RHR被随机分成假手术组、单纯缺血-再灌注组和黄皮酰胺组.采用线栓法制作局灶性脑缺血-再灌注模型,假手术组不造成缺血.用免疫组化法和原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL法)分别观察缺血2 h后再灌注6、12、24、48和72 h脑细胞Bcl-2蛋白表达和凋亡细胞数.结果①再灌注6 h即可见Bcl-2蛋白表达较多,24 h达高峰,此后逐渐下降.与单纯缺血-再灌注组比较,黄皮酰胺组Bcl-2蛋白表达于再灌注后各时间点均明显增高,差异均有显著性(P均<0.01).②再灌注6 h后有较多凋亡细胞,于72 h达高峰.与单纯缺血-再灌注组比较,再灌注6～24 h黄皮酰胺组凋亡细胞均显著减少(P均<0.01),但再灌注48 h后细胞凋亡的抑制作用不明显(P均>0.05).假手术组及缺血-再灌注组的非缺血侧无Bcl-2阳性细胞,仅见0～2个凋亡细胞.结论局灶性脑缺血-再灌注后Bcl-2表达显著增高,细胞凋亡参与了脑缺血-再灌注损伤的过程.黄皮酰胺能显著上调Bcl2表达,抑制细胞凋亡,并可能与Bcl-2协同抑制细胞凋亡,这可能是黄皮酰胺脑保护作用的机制.
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(-)黄皮酰胺对硝普钠诱导的海马神经元凋亡的影响
目的探讨黄皮叶分离物(-)黄皮酰胺对硝普钠诱导的体外培养大鼠海马神经元凋亡的影响及其可能机制.方法在硝普钠诱导体外培养的海马神经元凋亡模型的基础上,采用MTT比色分析检测细胞存活率,Western blot及RT-PCR等方法检测bcl-2和bax基因表达.结果不同剂量(-)黄皮酰胺预处理6 h可提高神经元的存活率,增加bcl-2的表达,降低bax的表达.结论 (-)黄皮酰胺可剂量依赖性地对抗硝普钠的神经毒性作用,其机制可能与增加抗凋亡基因bcl-2的表达,降低促凋亡基因bax表达,增高Bcl-2/Bax的比值有关.
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黄皮酰胺对糖尿病大鼠海马COX-2 mRNA和蛋白质表达的影响
目的 讨黄皮酰胺(Clausenamide,Clau)对糖尿病大鼠海马环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA和蛋白质表达水平的影响.方法 ♂ Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(48 mg·kg-1)建立糖尿病模型,给予不同药物治疗3 mon后,分别以RT-PCR法和免疫组织化学法观察大鼠海马COX-2 mRNA和蛋白质的表达.结果 ① RT-PCR结果显示,糖尿病大鼠海马的COX-2 mRNA表达明显增加(P<0.01);而Clau(50、25 mg·kg-1)治疗组大鼠海马的COX-2 mRNA表达明显降低(P<0.01);②免疫组化结果显示,糖尿病大鼠海马COX-2的蛋白质表达明显升高(P<0.01),Clau(50、25 mg·kg-1)治疗组大鼠海马的COX-2 的蛋白质表达明显降低(P<0.01).结论 黄皮酰胺可能通过抑制海马的COX-2 mRNA及蛋白质表达起到糖尿病大鼠海马的保护作用.
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黄皮酰胺对糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2表达的影响
目的 探讨黄皮酰胺(Clausenamide,Clau)对糖尿病大鼠海马血红素加氧酶1和2(HO-1和HO-2)表达的影响.方法 ♂ Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(48 mg·kg-1)建立糖尿病模型,给予不同药物治疗3 mon后,分别以RT-PCR法和免疫组织化学法观察大鼠海马HO-1和HO-2 mRNA和蛋白质的表达.结果 ① RT-PCR结果显示,糖尿病大鼠海马的HO-1和HO-2 mRNA表达水平明显增加(P<0.01);而Clau(50,25 mg·kg-1)治疗组大鼠海马的HO-1和HO-2 mRNA的表达水平明显降低(P<0.01),表明Clau可明显抑制糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2 mRNA的表达水平;②免疫组化结果表明,糖尿病大鼠海马HO-1和HO-2的蛋白质表达明显升高(P<0.01),表明HO-1和HO-2蛋白质的异常表达参与了糖尿病障碍的过程,而Clau通过抑制HO-1和HO-2的蛋白质表达对糖尿病大鼠起到保护作用的.结论 黄皮酰胺可能通过抑制海马的HO-1和HO-2 mRNA及蛋白质表达起到糖尿病大鼠的海马保护作用的.
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黄皮酰胺及其衍生物合成进展
黄皮酰胺是从传统中药黄皮叶中分离出来的一种天然产物，具有良好的保肝和促智活性。为了给生物学评价提供样品，并进行深入的构效关系研究，科研人员展开了大量的合成工作。先后开发了多条全合成路线，针对其多手性中心和多取代基的特点，合成了其全部16个光学异构体，同时，按照结构剖裂原则合成了一系列简化衍生物。
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黄皮酰胺对糖尿病大鼠糖化血红蛋白及海马胶质纤维酸性蛋白mRNA表达的影响
目的 研究黄皮酰胺对糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白及海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA表达的影响.方法 利用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型,将糖尿病大鼠随机分为模型组、胰岛素治疗组(10 U·kg-1胰岛素皮下注射)、黄皮酰胺高剂量治疗组(50 mg·kg-1黄皮酰胺灌胃给药)和黄皮酰胺低剂量治疗组(25 mg·kg-1黄皮酰胺灌胃给药),另取大鼠腹腔注射pH 4.4柠檬酸缓冲液作为对照组,每组15只.给药3个月后,检测比较各组大鼠血糖和糖化血红蛋白的不同;通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术观察海马GFAP mRNA的表达.结果 给药3个月后,与对照组和胰岛素治疗组相比,模型组和黄皮酰胺高、低剂量组大鼠的血糖和糖化血红蛋白值明显升高(P<0.01);而黄皮酰胺组大鼠的血糖和糖化血红蛋白值与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR结果显示,模型组大鼠海马的GFAP mRNA表达水平明显增加(P<0.01);而黄皮酰胺高、低剂量组大鼠海马的GFAP mRNA的表达水平明显降低(P<0.01).结论 黄皮酰胺可能通过抑制海马GFAP mRNA的表达对糖尿病大鼠起到保护作用,但没有降低血糖和糖化血红蛋白的作用.
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黄皮酰胺β-环糊精包合物的研究
目的以β-环糊精(β-CD)对黄皮酰胺(Clausenamide,CLA)进行包合.方法采用饱和溶液法制备CLA-β-CD包合物,测定其包封率及载药量,差示热分析研究CAL-β-CD特征吸收峰,并考察其溶出度与原药粉的区别.结果 CLA-β-CD主、客分子比为2∶1,平均载药量为33.16%±0.11%,平均包合率为96.40%±0.11%,包合物10 min内药物已溶出82.7%,比原药物快3.9倍.结论 CLA-β-CD包合物可显著提高CLA的溶出速度.
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黄皮酰胺对糖尿病导致的学习记忆障碍大鼠行为学和血糖的影响
目的:研究黄皮酰胺(Clausenmaide,Clau)对糖尿病导致的学习记忆障碍大鼠行为学和血糖的影响.方法:50只大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、胰岛素组、Clau高剂量组(50 mg/kg)和Clau低剂量组(25 mg/kg).腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,以Morris水迷宫法考察各组大鼠的学习记忆能力,用血糖GOD-PAP试剂盒法检测血浆葡萄糖浓度.结果:3个月后,比较第7天大鼠在目标区域的时间,模型组大鼠为(42.86±8.69)s,Clau低剂量组大鼠为(37.56±11.48)s,与模型组相比明显缩短(P＜0.05);大鼠第一次穿越目标区域的时间模型组为(51.79±40.66)s,Clau低剂量组为(22.27±25.24)s,较模型组显著缩短(P＜0.05);给药后比较各组血糖值,模型组为(12.87±0.56)mmol/L,Clau高、低剂量组分别为(12.49±0.52)mmol/L、(12.38±0.44) mmol/L,与糖尿病模型组相比没有明显差异(P＞0.05).结论:Clau对糖尿病导致的学习记忆障碍大鼠在行为学上具有一定的保护作用,但并没有降血糖的作用.
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黄皮酰胺对β-淀粉样多肽25～35片段诱导的大鼠学习记忆功能障碍的影响
目的:研究黄皮酰胺对诱导产生的模拟人类Alzheimer病(AD)的病理模型大鼠的影响.方法:采用文献报道的方法获得病理模型,并以口服方式给予黄皮酰胺,观察其与对照组在行为学上的差异.行为测试采用跳台法和Y型水迷宫法.结果:给药组与对照组在行为学上的差异有统计学意义.结论:黄皮酰胺可显著抑制病理模型的学习记忆功能障碍.
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黄皮酰胺的研究进展
实验证明,黄皮酰胺能改善多种原因引起的记忆障碍,对学习记忆功能障碍大鼠在行为学和脑组织病理上有明显的保护作用[1];对胆碱神经系统功能有增强作用,而且能提高突触效能、促进新突触形成和抗神经细胞凋亡作用,还可以提高皮层、海马组织蛋白磷酸酶的活性.现就黄皮酰胺的化学结构、药理活性和临床应用作一综述.
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薄层扫描法测定黄皮酰胺的含量
目的:建立以薄层扫描法测定黄皮酰胺含量的方法.方法:固定相系以硅胶G(过240目筛)加0.5%CMC-Na(1:2.5)所制备的薄层板,展开剂为氯仿-甲醇(85:15),检测波长为λ=259 nm;扫描方式为单波长反射法锯齿扫描,光源氘灯,线性参数Sx=3,振幅为10,背景校正.结果:此法测得黄皮酰胺含量的平均回收率为97.78%,RSD为0.36%;其在5.3～53μg/mL范围内浓度与峰面积线性关系良好(r=0.991 9).结论:用薄层扫描法测定黄皮酰胺的含量,准确度高,重现性好,适合于快速检验.
