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基于表面增强拉曼散射的血清指纹谱检测方法研究
目的:对基于表面增强拉曼光谱检测血清指纹谱的试验条件进行优化。方法以正常人血清为例,银胶溶液为活性基底,分别检测不同血清用量(2.5~500μl)、不同孵育时间(10~30 min)、不同孵育温度(4℃、室温、37℃)及不同血清处理方法(萃取、去蛋白)的增强拉曼信号。结果及结论血清用量不宜超过50μl,与增强基底材料的比例1∶1到5∶1均适宜;孵育时间在10~30 min均可;孵育温度为4℃、室温、37℃均可;血清直接与增强基底混合信号效果极强,进行萃取和去蛋白处理后,拉曼信号会减弱。
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测定植物提取物对细菌MIC的一种敏感快速的微量反应板法
琼脂扩散技术虽被广泛用来测定植物提取物的抗菌活性,但仍存在不少问题,包括琼脂的种类、盐浓度、孵育温度,以及抗菌组分的分子大小都会影响所得到的结果.
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ELISE检测HIV抗体的不确定因素几点探讨
艾滋病(AIDS)是由免疫缺陷病毒(HIV)引起的慢性传染病,特异性HIV抗体检测是诊断HIV感染的主要依据和有效途径,而对疑似艾滋病 HIV感染者的实验确诊是防治艾滋病的重要环节.酶联免疫吸附法(ELISA)检测HIV抗体是卫生部推荐的首选方法,是一种常用的固相酶联免疫测定方法,具有灵敏度高、特异性强、重复性好;所用试剂稳定、易保存;试验操作简便;结果判断客观等特点.既适合大规模筛查试验,又可用于少量标本的检测,因此被广泛应用于临床检验和卫生检验等方面,但实验中许多因素使结果产生不确定性,本文就此作若干探讨.
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扩张性心肌病大鼠心脏左室内皮素受体及其亚型分析
目的:用放射配基分析法检测心肌细胞膜内皮素受体及其亚型,观察其在扩张性心肌病大鼠模型左室中的变化.方法:用[125I]-ET-1探索在大鼠心肌细胞膜中建立内皮素受体及其亚型的放射配基分析法的佳条件,并对扩张性心肌病大鼠左室内皮素受体及其亚型进行饱和结合试验.结果:①适孵育温度为37℃;0~30 min内[125I]-ET-1与内皮素受体的结合量迅速增加,60 min已达平衡;膜蛋白在0~40 μg时,[125I]-ET-1结合量与膜蛋白浓度呈直线关系.②ET-1及非选择性拮抗剂Bosentan、选择性拮抗剂BQ123、BQ788等均能竞争抑制[125I]-ET-1与内皮素受体的结合,而去甲肾上腺素则不能抑制.③正常大鼠左室内皮素受体数量为92.21±34.34 fmol/mg protein.Kd值为0.044±0.007 nmol,扩张性心肌病大鼠左心室内皮素受体数量明显减低,Kd值则无明显变化;内皮素受体亚型A和B的比例不论在正常还是在心肌病大鼠均接近2比1,无明显差异.结论:通过放射配基分析法用[125I]-ET-1可以特异地检测内皮素受体及其亚型,并且扩张性心肌病大鼠左室内皮素受体较正常SD大鼠明显降低,但A和B两种受体亚型的比例均无明显变化.
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不同孵育温度对耐甲氧西林葡萄球菌药敏结果的影响
目的 探讨不同孵育温度对耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)药敏结果的影响,为临床提供更为可靠的用药依据.方法 收集,分离,鉴定耐甲氧西林葡萄球菌.用K-B纸片扩散法于34℃和36℃进行药敏试验.结果 32株耐甲氧西林葡萄球菌对头孢西丁的药敏试验34℃和36℃判读结果存在明显差别.结论 在测定耐甲氧西林葡萄球菌的药敏时,适当控制孵育温度(34℃±1℃)能更好地反映药敏结果的真实情况,为临床提供更为可靠的用药依据.
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ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的条件探讨
目的 探讨硫黄素(ThT)结合试验法检测β-淀粉样多肽l~42(Aβ42)聚集情况的条件.方法 Aβ42经六氟异丙醇(HFIP)单体化处理后,进行复溶,然后将Aβ42与ThT溶于缓冲体系,一定温度下于96孔板中共孵育不同时间,酶标仪检测450 nm激发下485 nm的荧光强度.分析Aβ42不同的浓度,孵育温度,96孔板类型,缓冲液种类以及复溶方式对ThT结合试验法测定Aβ42聚集情况的影响.结果 在ThT结合试验法中,Aβ42孵育浓度与荧光值成线性正比关系,孵育温度对此正比关系无较大影响;选用半透明板及PBS缓冲体系与其它条件相比,此线性正比关系更稳定;以终NH3·H2O 20 mmol/L的浓度加入1% NH3·H2O对单体化处理后的Aβ42复溶,并进行过滤的方法,与其它方法相比,寡聚体更少,以终2% v/v (DMSO/PBS)的比例加入二甲基亚砜(DMSO)进行复溶的方法,寡聚体较多,且Aβ42更快更多地发生了聚集;而利用ThT结合试验法研究Aβ42由单体到聚合体进程变化的动力学时,使用20 mmol/L NH3·H2O复溶方式进行复溶,观察到的动力学趋势过程更明显直观.结论 不同条件对ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的结果影响较大,条件不同结果不同,实验中应根据实验目的及具体情况来选择不同的条件.
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全自动酶联免疫分析系统质量保证的主要影响因素探讨
全自动酶联免疫分析系统应用于临床,不仅减少了主观因素带来的误差,同时又降低了操作者的劳动强度,缩短了全程检测的时间[1].ELISA试验的影响因素多,包括试剂、仪器、加样、孵育温度、洗板、显色、读值等,我们主要探讨加样针的携带污染、洗板方式的选择、反应板的进板等待时间对结果的影响.
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微量稀释法测定抗酵母样菌药物小抑菌浓度(MIC)的两种终点判定法比较
许多因素可影响抗酵母样菌药物体外药敏结果,包括选用的方法,培养基,接种菌量,孵育温度和时间,终点判定方法等.其中终点判定方法是为直接的重要影响因素.本文就两种终点判定即肉眼观察法和分光光度法加以比较讨论.