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044 伏马毒素B1酶联免疫分析方法研究
伏马毒素B1是由串珠镰刀菌属产生的毒性较大的一种真菌毒素,国内外对检测伏马毒素B1的酶联免疫吸附分析方法进行了许多研究.本文主要对酶联免疫分析中的完全抗原制备、抗体的制备以及酶联免疫检测形式进行概述.
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美国Chem Well全自动生化仪的故障维修及系统优化
美国ChemWell全自动生化仪是一台将自动生化分析和自动酶联免疫分析合二为一的独特组合的仪器.该仪器与其他全自动生化仪相比,具有体积小、价格低等优点.由于其操作系统是通过Windows桌面系统对基本菜单选项进行控制,故借此可以实现对仪器的控制和维护.
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风疹病毒IgG抗体检测方法的研究及应用
目的:建立一个以低保护力的抗体水平(15IU/ml)为临界值的风疹病毒特异性IgG抗体的检测方法.方法:用优选的抗原和具有变色功能的标本稀释液,用世界卫生组织提供的标准品标定标准曲线,以常规间接ELISA方法进行检测.结果:对检测方法的各个环节进行了比较研究,确定了检测方法的佳工艺流程.对1005例育龄妇女血清标本进行检测,并与意大利Sorin公司的试剂检测结果进行比较,两种方法呈高度相关(Kappa值为0.85).结论:本文建立的方法具有敏感、特异、简便、快速、可重复性好等特点,适用于育龄妇女风疹病毒抗体水平的筛查.
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血清睾酮酶联免疫吸附分析试剂盒的研制
目的血清睾酮酶联免疫吸附分析试剂盒的研制.方法用人工合成抗原睾酮-3-(O-羧甲基)肟:BSA免疫新西兰大耳白兔,制备出睾酮抗体并测定其效价及亲和常数.在此基础上,采用竞争性结合法,研制血清睾酮酶联免疫吸附分析试剂盒,并对所研制的试剂盒进行方法学鉴定.结果睾酮抗血清滴度1:50 000,Ka=1.22×109L/M(M表示摩尔数).睾酮酶免试剂盒:灵敏度0.1 ng/ml;精密度:批内、批间变异系数分别为CV=3.4%和CV=7.1%.确定了男女性正常值范围:女性为0.15～1.00ng/ml,平均值为0.46 ng/ml;男性为1.21～11.0 ng/ml,平均值为6.6 ng/ml.结论本试剂盒适于临床常规检验和科研工作需要,以国产代替进口,具有广泛应用前景.
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大黄酸兔源多克隆抗血清的制备与鉴定
目的 合成大黄酸人工抗原,制备敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗血清.方法 采用碳二亚胺法制备大黄酸人工抗原,将大黄酸分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联.用紫外扫描法鉴定大黄酸人工抗原是否偶联成功,免疫新西兰兔,制备多抗血清,通过间接竞争ELISA测定抗血清效价,通过间接竞争ELISA鉴定抗血清的敏感性和特异性,并分别用间接竞争ELISA和HPLC检测大黄中大黄酸的含量.结果 2只新西兰兔产生的多抗血清效价在1∶64 000以上,其中,2号兔多抗血清敏感性好,半数抑制浓度为0.09 ng/mL,且具有良好的特异性.兔抗血清测得大黄中大黄酸含量为(0.026±0.001)％,HPLC测得大黄中大黄酸含量为(0.027±0.000)％.结论 本研究制备了敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗体血清,为建立大黄酸免疫亲和色谱分析技术和快速检测方法奠定了基础.
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急性心肌梗死患者血浆BNP、ANP、ET和CRP水平变化
为观察急性心肌梗死(AMI)患者血浆中脑钠肽(BNP)、内皮素(ET)、C-反应蛋白(CRP)和心钠素(ANP)水平变化, 探讨AMI发病机制,为诊断、治疗及预后判断提供依据, 应用酶联免疫及免疫放射分析法对46例AMI患者治疗前后和30名对照者血浆中的BNP、ET、CRP、ANP水平进行检测.结果显示, AMI患者血浆中BNP、ET、CRP、ANP治疗后均明显下降, 与治疗前比较有显著性差异(P＜0.01); AMI患者BNP、ET、CRP、ANP水平明显高于对照组(P＜0.01); BNP与CRP治疗前水平变化比较呈正相关r=0.847, 治疗后呈明显的下降趋势, 其相关系数为r=0.654; AMI患者治疗前后ANP与ET比较呈正相关, 但经溶栓和相应的支持治疗后ANP基本恢复到正常水平(P＞0.05),而BNP、ET、CRP水平虽然下降明显, 但与对照组比较仍有明显差异(P＜0.05).结论: AMI患者血浆中BNP、ANP、ET、CRP水平的变化说明其参与了急性心肌梗死发生、发展, 特别是冠状动脉粥样斑块的形成和(或)破裂及血栓形成, 其炎症因子是主要因素.因此, 四项指标的观察分析对AMI诊断、治疗、预后判断具有重要意义.
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广谱检测磺胺类药物的酶联免疫分析方法的建立
目的 利用抗磺胺类药物多抗建立酶联免疫分析方法,测定磺胺类药物在动物源食品中的残留.方法 以抗磺胺类药物抗体包被微孔板,辣根过氧化物酶(HRP)标记磺胺类半抗原磺胺噻唑(ST),磺胺间甲氧嘧啶为标准品建立酶联免疫分析方法.结果 本方法的标准曲线测定范围为0.3～ 100ng/mL.方法学鉴定结果表明,灵敏度为0.2ng/mL,批内、批间变异分别为9.2％ ～ 14.4％、10.5％～ 12.7％.牛奶、蜂蜜、水产品及鸡肉、鸡蛋样品的添加回收率分别在79.3％～88.9％、65.5％～136.4、63.0％～83.3％、59.3％～78.1％之间.牛奶稀释实验表明,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.997.结论 本方法可同时快速测定动物源性食品中23种磺胺类药物的残留,对19种磺胺类药物的检测灵敏度高于10ng/mL.
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抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用
目的 制备和鉴定抗肌红蛋白(Mb)单克隆抗体,为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础.方法 用人肌红蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA方法筛选,有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞株.ELISA法测定小鼠腹水滴度,CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定.结果 筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水滴度为1∶5×104 ～ 1∶2×105.通过配对实验,有5株抗体6种组合可以成功配对.这5株抗体的亲和常数为6.46×108 ～ 3.68×109 L/mol.用5株抗体所建立的6种化学免疫分析方法与人Hb交叉反应率为7.434×103％ ～2.904×10-2％,与人ALB交叉反应率为4.980×10-7％ ～3.830×10-5％.用Mb17B6与Mb21E8两株抗体建立的CLIA标准曲线的线性系数为0.997,灵敏度为6.02ng/mL.结论 成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白单克隆抗体.
关键词： 肌红蛋白 单克隆抗体 酶促化学发光免疫分析 酶联免疫分析 -
白介素8酶联免疫分析方法及其初步应用
建立高灵敏度和特异性的白介素8(IL-8)ELISA法.用人工重组的IL-8多次免疫兔,获取高效价抗体.纯化抗体经生物素标记,同辣根过氧化酶(HRP)标记的亲和素可特异结合.采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体.加入不同浓度标准品后,反应1.5h,洗净后再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线.该方法测定范围为0.2-10.8ng/mL,低测出值为0.02ng/mL,批内和批间CV小于8%和10%.用该法测得18名正常人血浆中IL-8水平为0.15±0.06ng/mL.18份高低不同浓度IL-8水平的血清样品经本法和RIA测定其均值为0.54±0.35ng/mL和0.63±0.59ng/mL,相关性强(r=0.819,t=5.89).在U937细胞系体外培养液中,LPS刺激24h和48h可测出IL-8水平明显上升;而经TNF-α刺激24h和48h后同对照没有明显变化.该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足人血清和细胞培养液中IL-8水平的检测.
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卵泡刺激素注入胃腔对大鼠胃泌素分泌的影响
目的研究胃腔内卵泡刺激素(FSH)对大鼠胃泌素分泌的影响,为消化道产生的生殖内分泌激素是否有调节消化的功能提供实验依据.方法胃腔直接注射FSH以模拟外分泌产生的FSH,并以免疫组织化学、酶联免疫分析法(ELISA)检测卵泡刺激素刺激后,胃内胃泌素免疫反应阳性细胞的密度,血清和胃液中胃泌素的含量.结果胃腔内注射FSH后,大鼠胃窦壁内单位面积胃泌素免疫反应阳性细胞密度(16.65±2.63)比对照组(9.60±1.72)显著增加(P＜0.01),胃液中胃泌素ELISA检测的A值(0.41±0.037)比对照组(0.28±0.046)显著增加(P＜0.01);血液中胃泌素含量的A值(0.86±0.054)比对照组(0.62±0.070)显著增加(P＜0.01). 结论外源的FSH对胃泌素的合成和释放均起明显的促进作用.
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胃腔内促性腺激素释放激素类似物对大鼠消化道胃泌素细胞功能的影响
目的研究胃腔内促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠消化道胃泌素免疫阳性细胞及血液、胃液中胃泌素含量的影响. 方法应用免疫组织化学和酶联免疫分析(ELISA)方法分别检测大鼠消化道内胃泌素阳性细胞的密度及血液、胃液中胃泌素的含量. 结果胃腔注射GnRH类似物后,胃壁内单位面积胃泌素阳性细胞数为19.60±3.63,与对照组10.30±2.41相比(P<0.01);而十二指肠阳性细胞数为18.00±2.31,与对照组9.00±2.05相比(P<0.01).血液中胃泌素ELISA检测的A值为0.55±0.083,与对照组0.23±0.039相比(P<0.01);胃液中为0.52±0.083,与对照组0.30±0.031相比(P<0.01). 结论外分泌的GnRH对大鼠消化道中胃泌素的合成与分泌均起显著的促进作用.
关键词： 胃泌素 促性腺激素释放激素类似物 免疫组织化学 酶联免疫分析 大鼠 -
卵泡刺激素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌影响的体外研究
目的研究卵泡刺激素(FSH)在体外对胰腺组织分泌胰岛素和胰高血糖素的影响.方法体外孵育大鼠胰腺组织并施加不同浓度FSH,应用酶联免疫分析(ELISA)方法检测上清液中胰岛素和胰高血糖素的含量.结果当FSH浓度小于10-2IU/L时,胰岛素和胰高血糖素分泌量随FSH浓度的增加而减少;当FSH浓度大于10-2IU/L时,胰岛素和胰高血糖素分泌量随FSH浓度的增加而增加.结论FSH在体外对胰岛素和胰高血糖素分泌具有相同的双向调节作用,FSH可能对胰腺内分泌具有调节功能.
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胃腔内促性腺激素释放激素类似物对大鼠胃和十二指肠生长抑素细胞功能的影响
目的研究胃腔内促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)对大鼠胃和十二指肠生长抑素免疫阳性细胞及血液、胃液中生长抑素含量的影响.方法应用免疫组织化学ABC和ELISA方法分别检测大鼠胃和十二指肠生长抑素阳性细胞的密度及血液、胃液中生长抑素的含量. 结果胃腔注射GnRH类似物后,胃壁内单位面积生长抑素阳性细胞数为26.6±3.893,与对照组48.3±6.019相比具有差异(P＜0.01),十二指肠单位面积生长抑素阳性细胞数为51.7±2.214,与对照组58.5±4.454相比具有差异(P＜0.01).血液中生长抑素ELISA检测的A值为0.15±0.018,与对照组0.27±0.036相比具有差异(P＜0.01),胃液中A值为0.32±0.049,与对照组1.022±0.369相比具有差异(P＜0.01). 结论外分泌的GnRH对大鼠胃和十二指肠中生长抑素的分泌起显著的抑制作用.
关键词： 生长抑素 促性腺激素释放激素类似物 免疫组织化学 酶联免疫分析 大鼠 -
卵泡刺激素对体外孵育大鼠下颌下腺分泌NGF和EGF的影响
目的 通过确定卵泡刺激素(FSH)与神经生长因子(NGF)或表皮生长因子(EGF)在大鼠下颌下腺的共定位关系,研究FSH在体外对大鼠下颌下腺组织分泌NGF和EGF的影响. 方法 采用邻片免疫组织化学共定化方法 ;体外孵育大鼠下颌下腺组织并给予不同浓度FSH,应用酶联免疫分析方法 检测上清液中NGF和EGF的含量. 结果 大鼠下颌下腺浆液性腺上皮细胞、颗粒曲管及大于颗粒曲管的导管上皮细胞均呈FSH、NGF及EGF免疫反应阳性,FSH与NGF或EGF有共存性;当FSH浓度大于10-5～10-6时,NGF或EGF分泌量随FSH浓度的递减而降低;当FSH浓度小于10-5～10-6时,NGF或EGF分泌量随FSH浓度的递减而升高. 结论 FSH在体外对NGF或EGF分泌具有相同的双向调节作用,FSH可能对下颌下腺内分泌具有调节功能.
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光激化学发光技术研究进展与应用
近半个世纪以来,临床化学微量免疫分析技术从放射免疫分析、酶联免疫分析,到化学发光免疫分析,经历了检测方法的革新与技术的进步,带来了医学检验质量和数量的迅速提高;20世纪90年代问世的LOCI(Luminescent oxygenchanneling immunoassay,LOCI)技术以其独特检测方法,实现了均相、一步、免清洗和高通量检测,并以其高灵敏度和特异性等突出检测性能为世人所瞩目.
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生物样品中蓖麻毒素的双夹心酶联免疫定量检测方法及应用
目的 建立定量检测生物样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法并研究毒素在大鼠体内的分布.方法 利用抗蓖麻毒素的单克隆抗体(MAb)3D74和辣根过氧化物酶(HRP)标记的小鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体4C13,建立了定量检测血清和组织样品中蓖麻毒素的双夹心ELISA方法,并对方法学进行了必要的验证.结果 建立的双抗夹心ELISA方法检测组织中蓖麻毒素的浓度范围为1.25～320 ng/ml,低定量限为2.5 ng/ml,日内和日间精密度分别小于3.5%和9%.将该方法应用于蓖麻毒素组织分布的定量测定,结果显示,大鼠静脉染毒后毒素可以在心、肝、脾、肺、肾、肠和脂肪等组织分布,以脾脏的分布为高,其次为肝脏,染毒后0.5和2 h脾与血清的比值分别为3.9和7.2.在脑和肌肉中未检出毒素.结论 建立的双夹心ELISA方法简便、灵敏,可以用于定量检测血清和组织等生物样品中的毒素含量,为蓖麻毒素的毒物代谢动力学研究及毒素中毒的快速检测提供了技术支撑.
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免疫测定用人垂体促甲状腺激素第三次国际参考制剂国际协作标定
本文报告了在国际协作研究中,以TSH第2次国际参考制剂为对照品,用化学发光免疫分析、酶联免疫分析、放射免疫分析和免疫放射量度分析试剂盒测定TSH 81/565(候选的TSH第3次国际参考制剂)、TSH 81/615和TSH 81/502以及TSH国家标准品的免疫效价.所有免疫分析法结果:TSH 81/565、TSH 81/615和TSH 81/502效价的几何均数分别为11.5、11.4和7.38 mIU/安瓿,相当于WHO报告中提供的几何均数的99.1%,101.8%和100.4%;TSH国家标准品与第2次国际参考制剂的相对效价为0.942.然而,在不同的免疫分析方法之间存在一定差异.对TSH 81/565而言,酶联免疫分析法测定的效价的几何均数小,为8.07/安瓿;而化学发光免疫分析法测定值大,为12.8/安瓿.双份样品精密性测定:TSH第2次国际参考制剂双份样品之间的相对效价为0.84～1.08,TSH 81/565双份样品之间的相对效价为0.82～1.18.+4℃热加速降解样品测定结果符合WHO报告中所述的免疫活性变化趋势.
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鼠降钙素基因相关肽两种不同检测方法比较
目的 对放射免疫分析法(RIA)和酶联免疫分析法(ELISA)检测鼠降钙素基因相关肽(CGRP)的效能进行评价.方法 分别采用RIA法和ELISA法检测CGRP标准品、质控品和100例正常MCAO模型大鼠血浆标本中CGRP浓度,作精密度和比对分析.结果 RIA法和ELISA法检测正常MCAO模型大鼠血浆中CGRP结果具有显著相关性(P＜0.01),相关系数r分别为0.986和0.962.结论 RIA法和ELISA法检测CGRP结果一致,符合科研检测的要求.
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应用磁分离酶联免疫法评估甲状腺功能状态
本文报告用磁性微粒酶联免疫分析与放射免疫分析法对照甲状腺功能三项(促甲状腺激素TSH、游离三碘甲状腺原氨酸FT3,游离甲状腺素原氨酸FT4)的实验结果.前者具有操作简便、准确、稳定、省时、经济、无放射性危害等优点,易于在广大城市及基层推广应用.
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糖尿病合并高血压患者围术期血浆P物质水平的研究
目的 观察糖尿病合并高血压患者围术期血浆P物质(SP)的变化.方法 选择28例糖尿病(DM)患者作为实验组,分为2个亚组:合并高血压的糖尿病亚组(DM-HP)17例和正常血压糖尿病亚组(DM-NBP)11例,同时选28例无糖尿病和高血压患者作为对照组(C组),应用酶联免疫分析方法,测定各组患者术前、术中、术后血浆SP浓度.结果 DM-HP患者血浆SP显著低于C组和DM-NBP组(P ＜ 0.001),但各组患者围术期SP变化差异无统计学意义(P ＞ 0.05).结论 DM-HP患者血浆SP明显降低,提示SP的降低可能与糖尿病和高血压病有关,手术应激状态下,SP对机体的生理性保护作用可能被削弱,糖尿病合并高血压患者术中发生重要脏器功能障碍的风险增加.
