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小白菊内酯对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究
目的:探讨小白菊内酯对血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制.方法:培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测c-fos, c-myc, p15, p16, p18, p19蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[3H]TdR参入测定VSMC 的DNA合成.结果:小白菊内酯以时间依赖关系抑制c-fos, c-myc蛋白表达,但不影响p15, p16, p18, p19蛋白表达,以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[3H]TdR参入.结论:小白菊内酯可能通过抑制c-fos, c-myc蛋白表达,而不是影响p15, p16, p18, p19蛋白表达来抑制VSMC增殖.
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小白菊内酯对白血病K562细胞及其干细胞的作用
目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对白血病K562细胞及其白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)的作用.方法:以白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性,Annexin V/PI染色法测定细胞凋亡;流式细胞术检测LSC相对含量,甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖能力.结果:PTL显著抑制K562细胞的增殖,24,48,72 h的IC_(50)分别为17.1,8.67,9.42μmol·L~(-1).5,10 μmol·L~(-1)PTL处理48 h,K562细胞的凋亡率分别为(49.56±5.11)%,(71.88±2.12)%.结合干细胞免疫标志分析,K562细胞中LSC样(CD34~+ CD38~-)细胞的凋亡率分别为(52.63±4.14)%,(57.50±4.47)%.K562细胞中LSC的相对含量仅轻度增高,但高浓度(15 μmol·L~(-1))PTL处理,LSC含量则增高15倍.0.5～4.0 μmol·L~(-1)PTL显著抑制K562细胞的集落形成能力,集落数降低24.1%～89.2%;5～15 μmol·L~(-1)PTL预处理,存活K562细胞的集落形成数增高5.0%～50.0%.结论:小白菊内酯可抑制K562细胞及其干细胞的增殖活性,并诱导其凋亡.
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小白菊内酯促进 CD34+ CD38-白血病干细胞凋亡的表面粘附分子 CXCR4机制研究
目的：探讨小白菊内酯促进 CD34+ CD38-白血病干细胞凋亡的表面粘附分子 CXCR4机制，为相关临床治疗提供参考。方法免疫磁珠法分离急性髓系白血病患者骨髓获得 CD34+ CD38-白血病干细胞，不同剂量小白菊内酯干预后分析各组细胞 CXCR4蛋白表达及 CD62L、CD44和 CD49d 的表达量及荧光强度。结果小白菊内酯可明显增强 Caspase 细胞凋亡蛋白家族表达，降低 CXCR4蛋白表达和 CD62L、CD44和 CD49d 表面荧光强度，且与白血病干细胞组相比具有显著的统计学差异性（ P ﹤0.05，P ﹤0.01）；小白菊内酯的促凋亡作用呈现出剂量依从性。结论小白菊内酯主要通过抑制白血病干细胞细胞表面相关粘附分子 CD62L、CD44和 CD49d 及 CXCR4蛋白的表达发挥促白血病干细胞凋亡作用。
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小白菊内酯逆转胰岛素抵抗的研究
目的 探讨NF-κB的抑制剂小白菊内酯(Par)对胰岛素抵抗(IR)的逆转作用及分子学机制.方法 在FAO细胞和高脂饮食诱导IR或肥胖IR(ob/ob)动物模型中,观察Par对细胞和组织NF-κB活性、细胞因子,组织胰岛素敏感性的影响.结果 Par能有效地抑制细胞模型NF-κB活性,逆转高脂饮食和肥胖诱导的IR,降低循环中细胞因子TNF、IL-6和MCP-1的水平.经Par治疗的动物肝糖输出的水平明显降低,而在高胰岛素钳夹稳态时的组织葡萄糖的利用率明显升高.Par治疗能明显抑制胰岛素受体特异色/丝氨酸的磷酸化水平,从而促进胰岛素信号的转导.结论 Par具有抑制NF-κB活性,逆转高脂饮食和肥胖诱导的IR作用.
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小白菊内酯不同给药途径对兔膝骨关节炎的实验研究
目的：通过测定膝骨关节炎兔模型血清和关节液中TNF?α、IL?1β的含量，观察软骨的组织学改变，探讨小白菊内酯不同给药途径治疗骨关节炎的疗效与作用机制。方法健康纯种新西兰兔40只，随机取8只作为正常组（ A组）；其余的32只采用右后肢伸直位管型石膏固定法，建立OA模型。造模后随机分为4组：模型口服对照组（ B组）、模型关节腔注射对照组（C）、小白菊内酯口服组（D组）、小白菊内酯关节腔注射组（E组），每组8只。 B组和D组兔分别予生理盐水、小白菊内酯灌胃，C组和E组兔分别予生理盐水、小白菊内酯关节腔注射，连续治疗6w后，测定各组兔治疗前后血清、膝关节液TNF?α、IL?1β表达水平。所有实验动物在8w处死，应用苏木素?伊红（HE）染色观察各组动物关节软骨的病理组织改变。结果与模型组（ B组、C组）比较，D组、E组关节液及血清中的TNF?α、IL?1β浓度均明显降低（ P＜0?05），且E组降低幅度明显大于D组（P＜0?05）。与A组比较，B组和C组病理显示有关节软骨破坏，病理积分升高（P＜0?05）；D组、E组病理改变较B组、C组显示关节软骨有所修复，病理积分降低（P＜0?05）。结论小白菊内酯可减轻动物模型的关节炎症，其关节腔给药的抗炎疗效优于口服给药，抑制血清和关节腔TNF?α、IL?1β的分泌，可能是小白菊内酯治疗骨关节炎的机制之一。
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小白菊内酯增强人肺腺癌A549细胞对顺铂敏感性实验研究
目的 肺恶性肿瘤无论是发病还是致死率都居高不下,传统化学疗法通常会随着治疗的推移而产生耐药,出现化疗后毒副作用,因此寻找增强顺铂敏感性的药物,对于减少顺铂的使用剂量从而降低顺铂的毒副作用具有重要的临床价值.本研究拟从分子生物水平,探讨小白菊内酯(Parthenolide,PTL)是否具有增强肺腺癌A549细胞对顺铂(DDP)的敏感性.方法 A549细胞经PTL和(或)DDP处理后,以噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tet-razolium bromide,MTT]法检测细胞活力,流式细胞术(flow cytometry,FCM)法检测细胞凋亡及细胞周期,实时荧光定量PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)法检测Bcl-2和Bax的mRNA表达情况.结果 MTT检测结果显示,小剂量PTL(＜10 μmol/L)有促A549细胞增殖作用(P＜0.05),大剂量PTL(＞10μmol/L)可抑制A549细胞增殖(P＜0.05);且大剂量PTL(15和20 μmol/L)与DDP(2 mg/L)联合能够明显抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,与单独用药组相比有明显的协同抑制作用,q值分别为1.181和1.206,P＜0.05.FCM法检测结果显示,PTL(15 μmol/L)与DDP(2 mg/L)联合作用于A549细胞,A549细胞凋亡率为24.45％,较对照组的0.91％及单独用药组的2.8％和3.07％增加;PTL(15 mol/L)和DDP(2 mg/L)联合组G1+S期细胞比例为81.10％,较对照组的60.75％及单独用药组的77.91％和70.83％增加.RT-PCR检测结果显示,PTL(15 μmol/L)和DDP(2 mg/L)联合后,A549细胞的抗凋亡基因Bcl-2的相对表达为0.015±0.002,较对照组及单独用药组的1、23.873±0.76和2.925士0.146显著下调,P＜0.05;凋亡基因Bax的表达为32.175±1.651,较对照组及单独用药组的1、0.284±0.009和0.732±0.022显著上调,P＜0.05.结论 大剂量PTL具有抗肿瘤作用,可增强人肺腺癌A549细胞对DDP敏感性,且PTL(10、15和20,μmol/L)与DDP(2 mg/L)联合后具有协同作用,其作用机制可能与增加G1+S期细胞比例、诱导细胞凋亡及降低Bcl-2/Bax mRNA比例有关.
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益肺活血颗粒对香烟提取物诱导的巨噬细胞NF-κB活性的影响
目的 探讨益肺活血颗粒对香烟提取物诱导的巨噬细胞核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响.方法 用12-豆蔻酸-13-乙酸佛波醇将U937诱导为巨噬细胞,0.6～9.6 g·L-1的益肺活血颗粒及0.5％～10％的香烟提取物处理巨噬细胞,于12、24、48 h细胞活力检测法测定细胞活性;再将巨噬细胞分为对照组、香烟提取物组、香烟提取物+益肺活血颗粒组、香烟提取物+小白菊内酯组,分别于12、24、48 h采用免疫印迹法检测细胞内NF-κB p50/p65/ p-IκB表达水平.结果 香烟提取物能够诱导NF-κB p50/p65/ p-IκB的蛋白表达,而益肺活血颗粒和小白菊内脂能抑制香烟提取物对p50/p65/ p-kB表达的诱导作用(P＜0.05),但小白菊内脂抑制作用强于益肺活血颗粒(P＜0.05).结论 益肺活血颗粒能够抑制香烟提取物诱导的巨噬细胞NF-κB的活化.
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中药单体小白菊内酯的大鼠血浆稳定性及其药动学研究
小白菊内酯是小白菊(Tanacetum parthenium)中的主要活性成分,具有抗炎和抗癌的药理活性.本研究首先建立了一种专属、灵敏、准确的大鼠血浆中小白菊内酯浓度定量的LC-MS/MS检测方法,采用一步液-液萃取法从大鼠血浆中提取待测物及内标,以水-甲醇为流动相系统对待测物进行分离.标准曲线范围为2～128ng·mL-1,精密度、准确度均符合要求,并且提取回收率较高.利用此检测方法对体外放置大鼠血浆样品中小白菊内酯的稳定性进行了考察,结果显示高、中、低3个浓度的小白菊内酯在30 min后均有超过15％的分解,表明其在大鼠血浆中稳定性较差.体内药动学实验分别静脉给予大鼠20、40及80 mg·kg-1的小白菊内酯,药动学参数显示其在大鼠体内消除较快,半衰期小于90 main.高剂量80 nmg·kg-1给药组初始浓度也仅为138.86±21.07ng·mL-1,并且药时曲线下面积与给药剂量非等比例增加.本研究结果为进一步开发小白菊内酯成为抗肿瘤药物提供了重要的药动学信息.
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小白菊内酯的生物特性与药理作用研究进展
小白菊内酯是草本类植物艾菊的主要药物活性成分.大量的研究证实小白菊内酯具有多种药理作用,包括抗炎免疫抑制作用、抗氧化、抗肿瘤、抑制血管平滑肌细胞的增殖、抑制破骨细胞的活性及抑制细胞核因子-κB的表达等.文中就小白菊内酯抗炎、抗肿瘤等的新研究做一综述,为该植物提取物的进一步研发提供参考.
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小白菊内酯抑制胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及信号转导机理
目的探讨小白菊内酯的抗动脉粥样硬化机理与IκBα, 环氧合酶-2(COX-2), p21, p27蛋白表达的关系.方法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),Western印迹杂交法检测IκBα, COX-2, p21, p27蛋白表达,流式细胞仪检测VSMC周期情况,[3H]TdR参入测定VSMC的DNA合成.结果小白菊内酯(30 μmol·L-1)以时间依赖关系上调IκBα, p21, p27蛋白表达和以时间依赖关系抑制COX-2蛋白表达,10～30 μmol*L-1以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例显著减少,同时抑制VSMC的[3H]TdR参入.结论①小白菊内酯可能通过上调IκBα蛋白表达抑制核因子-κB活性,从而抑制COX-2蛋白表达,通过抑制COX-2蛋白表达来抑制VSMC增殖;②小白菊内酯可能通过上调调控G1-S周期转换的p21,p27蛋白来抑制VSMC增殖.
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小白菊内酯抑制紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡
目的探讨NF-κB在紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡中的作用及小白菊内酯对紫杉醇诱导凋亡的影响.方法以人乳癌BCap37细胞和人表皮KB细胞为研究对象,用5,10和20 μmol·L-1小白菊内酯预处理细胞,以DNA凋亡梯状条带、DNA含量、MTT、细胞甩片及电泳迁移率变动分析(EMSA)法检测它对紫杉醇诱导细胞凋亡的影响并探索其作用靶点.结果通过检测DNA凋亡梯状条带、DNA含量和细胞生存率,20 μmol·L-1小白菊内酯能显著抑制紫杉醇所诱导的BCap37和KB细胞凋亡,但不影响紫杉醇诱导肿瘤细胞G2/M期阻滞.EMSA实验表明小白菊内酯能抑制紫杉醇诱导激活NF-κB.结论小白菊内酯通过抑制NF-κB的激活来抑制紫杉醇所诱导的肿瘤细胞凋亡,而紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的过程可能与G2/M期阻滞无关.
关键词： 凋亡 小白菊内酯 紫杉醇 核因子-kappaB -
小白菊内酯对细菌脂多糖致大鼠学习记忆功能减退的保护作用
目的 探讨小白菊内酯对腹腔注射细菌脂多糖(LPS)致大鼠学习记忆功能减退的改善作用.方法 健康成年雄性Wistar大鼠36只,随机分为3组,每组12只.对照组腹腔注射生理盐水,致炎组腹腔注射LPS( 10 mg/kg),治疗组腹腔注射LPS( 10 mg/kg)和小白菊内酯(5mg/kg).依据测试时间不同,每组再分为两个亚组,近期组在LPS注射后第3天开始实验；远期组在LPS注射后第12天开始实验.应用Morris水迷宫实验测试系统,采用定位航行实验和空间探索实验测试大鼠认知功能改变.结果 炎症近期,与对照组和治疗组相比,致炎组寻台持续时间显著延长(P＜0.05),第二象限停留时间和路程显著缩短,第一次穿越时间显著延长,穿越次数显著减少(P＜0.05)；炎症远期,3组动物学习记忆能力差异无统计学意义,各组游泳速度差异无统计学意义.结论 小白菊内酯可改善腹腔注射LPS近期大鼠学习记忆功能减退.
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小白菊内酯对人胃癌细胞株SGC-7901增殖及Livin和Ki67蛋白表达的影响
目的 观察小白菊内酯(Par)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖及Livin、Ki67蛋白表达的影响.方法 将人胃癌细胞SGC-7901分为空白对照组、阳性对照组和Par作用组,分别用普通培养液、氟尿嘧啶培养液、Par培养液进行培养.采用MTT法测定Par对人胃癌细胞SGC-7901的体外生长抑制率,并用免疫组化法检测3组细胞的Livin、Ki67蛋白表达量.结果 细胞培养24、48、72 h,Par作用组SGC-7901体外生长抑制率显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);而与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).Par作用组Livin和Ki67蛋白表达量均较空白对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);而与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Par可抑制入胃癌细胞株SGC-7901的生长,其机制与降低Livin、Ki67蛋白表达量有关.
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小白菊提取物的药理作用
小白菊主要含倍半萜内酯类、黃酮类等成分,小白菊的地上部分为小白菊内酯、木香烯内酯等倍半萜内酯类,现有大量研究证实其中的小白菊内酯具有抗炎、抗肿瘤、治偏头痛等特性.另外,在小白菊的叶、花、种子中都含有黄酮类成分,经研究发现小白菊内酯和黄酮类化合物的药理作用都是相当广泛的,并且随着科学研究的不断深入,它们的药理作用还在不断地扩大中.
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小白菊内酯对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制及其凋亡诱导作用
目的 探讨小白菊内酯(parthenolide,PTL)对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的体外作用及其机制.方法 培养人MM细胞系PRMI8266,在不同浓度的PTL作用不同时间后,以四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)及台盼蓝拒染检测细胞增殖及活性,用AO/EB染色荧光显微镜及Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,应用膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)染色流式细胞仪检测细胞凋亡率,酶底物法测定细胞半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性.结果 (1)1～10μmol/L的PTL对MM细胞生长曲线和活性有明显抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,5 μmol/L作用48 h,可达到接近50%的活性抑制;(2)5μmol/L PTL作用48 h后可见到细胞出现明显形态学改变,细胞形态变小、胞质减少、胞体胞核固缩、出现凋亡小体;(3)2μmol/L、5 μmol/L、10μmol/L的PTL作用48 h后MM细胞的凋亡率分别为17.1%±2.6%、33.6%±3.8%、40.9%±3.1%,与对照组5.6%±1.2%相比,差异有显著统计学意义(均P＜0.01);(4)PTL作用48 h后,MM细胞caspase-3活性明显增强,且呈浓度依赖性(P＜0.01).结论 PTL能明显抑制MM细胞体外生长及活性,其作用机制为增强caspase-3活性而诱导MM细胞凋亡;PTL作为新的MM细胞凋亡诱导剂,其作用靶点及体内效应值得深入研究.
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云南含笑果实中倍半萜类化学成分研究
目的 对云南含笑Michelia yunnanensis果实的化学成分进行研究.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20等多种色谱技术进行分离纯化,根据波谱数据鉴定化合物的结构.结果 从云南含笑果实甲醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为13-甲氧基-11β,13-二氢木香烃内酯(1)、毛叶含笑内酯(2)、北美鹅掌楸内酯(3)、鹅掌楸内酯(4)、木香烃内酯(5)、小白菊内酯(6)、11β,13-二氢小白菊内酯(7)、4α,5β-环氧-13-甲氧基-11βH-吉玛烷-1(10)-烯-12,6α-内酯(8)、长莎草醇C(9)、香橙烷-4β,10α-二醇(10)、9-氧代橙花椒醇(11)、11,13-去氢台湾含笑内酯(12).结论 化合物1为新天然产物,并且首次全面报道化合物1和2的1H-NMR、13C-NMR数据.除化合物6,其余化合物均为首次从该植物中分离得到.
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观光木树皮的生物活性成分研究
目的研究观光木树皮的化学成分和生物活性.方法运用生物活性跟踪的方法,对中国特有植物观光木(学名:宿轴木兰)树皮乙醇浸膏的乙酸乙酯萃取部分和正丁醇萃取部分进行体外抗肿瘤活性筛选.结果这2个萃取部分均具有抗肿瘤活性.用柱层析对活性部位进行化学成分研究,从乙酸乙酯部分分得3个吉马烷型半萜内酯:木香烯内酯(I)、小白菊内酯(Ⅱ)和11,13-二氢小白菊内酯(Ⅲ).从正丁醇部分得到1个阿朴菲类生物碱:鹅掌楸碱(Ⅳ)、1个呋喃酮类化合物:2,3-二羟基-2-甲基-丁内酯(V).结论上述5个化合物均为首次从该植物中分离得到.化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ分别对所测试的不同肿瘤细胞株具有较好的细胞毒活性.
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小白菊内酯对U-87 MG迁移、侵袭的影响及其机制研究
目的：研究小白菊内酯对恶性人脑胶质瘤细胞系U-87 MG细胞迁移、侵袭的抑制作用，并探讨其作用机制。方法采用CCK-8比色检测法筛选小白菊内酯处理细胞的IC50浓度；采用细胞划痕实验观察小白菊内酯处理0、12、48 h后U-87 MG细胞的迁移情况，并且测量48 h后迁移的距离；采用Transwell实验观察穿膜细胞数，判断细胞的侵袭能力；并采用qPCR以及Western blotting法研究了小白菊内酯处理后，U-87 MG细胞的SNAIL、E-Cadherin的表达变化，以及GSK3β-Ser9蛋白质磷酸化变化。结果 CCK-8比色检测法筛选的小白菊内酯IC50浓度为39μmol/L。与对照组比较，在小白菊内酯处理48 h后，U-87 MG细胞迁移的距离和穿膜细胞数都明显减少，且与浓度呈正相关（P＜0.01）；与对照组比较，小白菊内酯处理的U-87 MG细胞内SNAIL基因表达下降，同时E-Cadherin表达上调，且表达差异明显（P＜0.05）；GSK3β-Ser9残基磷酸化水平下降。结论小白菊内酯能够抑制U-87 MG细胞的迁移、侵袭，可能是通过下调GSK3β磷酸化从而抑制了SNAIL蛋白表达入核，从而促进了E-Cadherin蛋白的表达而引起的。
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小白菊内酯对U-87 MG细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究
目的考察小白菊内酯对于人脑恶性胶质瘤细胞U-87 MG细胞系的增殖、细胞周期及凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法采用CCK-8比色法和克隆形成检测法检测小白菊内酯对U-87 MG的增殖抑制作用;采用碘化丙啶(PI)染色后的流式细胞仪检测小白菊内酯处理前后对细胞周期、凋亡的影响;采用qPCR以及Western blotting法研究药物处理后U-87 MG细胞的Caspase 3、Bax、Cyclin D1的表达变化以及P53-Ser392蛋白质磷酸化激活.结果小白菊内酯可明显抑制U-87 MG的细胞增殖、克隆形成数量及克隆大小.处理48 h后,U-87 MG细胞的S期、G2/M期受到了阻滞,G0/G1期细胞比例明显减少,同时细胞的凋亡也明显增多.Caspase 3、Bax基因的mRNA及蛋白表达明显上升,而Cyclin D1基因的mRNA表达明显下降.同时P53-Ser392残基的磷酸化水平也明显上升.结论 小白菊内酯可通过调节P53基因的Ser392残基磷酸化抑制其下游的细胞凋亡、细胞周期途径上Caspase 3、Bax、Cyclin D1的基因表达,影响细胞周期及凋亡,从而抑制肿瘤细胞的增殖.
关键词： 小白菊内酯 人脑恶性胶质瘤细胞U-87MG P53 凋亡 -
小白菊内酯对人乳腺癌细胞株增殖敏感性的影响
目的:观察小白菊内酯(PN)单独及联合顺铂(DDP)对人乳腺癌细胞株BT549生长的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养人乳腺癌BT549细胞株,分别加入不同浓度的PN、DDP及PN+DDP至细胞中,作用48 h后,分别采用CCK8细胞增殖实验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期.结果:随着PN工作液浓度的升高,BT549细胞48 h的细胞存活率逐渐降低.同样,随着DDP工作浓度的升高,BT549细胞48 h的细胞存活率也逐渐下降.并且相应浓度的PN和DDP联合作用于BT549细胞48 h的存活率降低更加明显,且差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪测细胞周期实验发现,这两种药物主要通过阻滞细胞周期G1/S期的转化.结论:PN单用及联合DDP作用均可抑制BT549细胞的增殖,且呈浓度-剂量依赖性,两药联合应用对细胞增殖的抑制作用更加明显,表明这两种药物具有协同作用.
