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新型汽油防爆剂MMT对人前列腺细胞系PC-3M的凋亡作用
2000年1月1日,我国颁布新的汽油标准,改用甲基环戊二烯羰基锰(MMT)替代四乙基铅作为新的汽油防爆添加剂,使人群,尤其是交通警察、炼油厂工人、加油站职工和繁华马路附近居民等通过大气接触MMT的机会大大增加[1].研究表明锰在肾脏和前列腺中蓄积量高[2].因此对新型大气污染物MMT的前列腺毒性进行研究,阐明其作用机制十分必要.本实验利用人前列腺细胞系PC-3M研究MMT对PC-3M细胞的影响.
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新型大气污染物MMT诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制
目的 研究甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人SK-N-SH细胞凋亡的分子机制.方法 MMT诱导SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测活性氧(ROS)生成;化学发光法检测Caspase-3活性;Western blot法检测p38 MAPK磷酸化程度.结果 在MMT诱导SK-N-SH细胞过程中,细胞ROS生成量为正常组的5.2倍(P＜0.01);抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及二硫苏糖醇(DTT)可有效抑制细胞ROS生成(P＜0.01).提高细胞存活率(P＜0.01);在这一过程中,Capase-3活性明显增强,为对照组的3.01倍(P＜0.01);同时p38 MAPK磷酸化程度加强;p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可提高细胞存活率(P＜0.05),抑制Caspase-3的活性(P＜0.01).结论 MMT诱导的SK-N-SH细胞凋亡与ROS升高,激活Caspase-3有关,这一过程有p38 MAPK相关信号转导途径参与.
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Caspase-3和p38 MAPK在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中的作用
目的 确定Caspase-3和p38 MAPK在大气污染物甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人前列腺细胞系PC-3M凋亡过程中的作用.方法 1 mmol/L MMT诱导PC-3M细胞后,化学发光法检测细胞Caspase-3活力的变化,MTS法检测Caspase-3特异性多肽抑制剂Z-DEVD-FMK对细胞存活率的影响,Western blot法检测p38 MAPK在细胞凋亡过程中的活性变化,MTS及化学发光法检测p38 MAPK抑制剂SB203580对细胞凋亡率和Caspase-3活力的影响.结果 在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中,Caspase-3被明显激活差异有统计学意义(P＜0.01);Z-DEVD-FMK可明显提高PC-3M细胞存活率差异有统计学意义(P＜0.01);p38 MAPK磷酸化程度明显升高;SB203580可抑制细胞凋亡差异有统计学意义(P＜0.01),同时使Caspase-3活力下降差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Caspase-3及p38 MAPK参与了MMT诱导的PC-3M细胞凋亡.
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甲基环戊二烯羰基锰对PC-3M细胞损伤作用
目的:确定甲基环戊二烯羰基锰(MMT)对人前列腺细胞系PC-3M的损伤作用.方法:利用MTS法确定MMT对PC-3M细胞诱导的时间和浓度曲线;分光光度法检测MMT诱导的细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的变化.结果:MMT可明显降低PC-3M细胞的存活率并与诱导时间及浓度呈正相关,其中2 mmol/L MMT诱导细胞24 h后,细胞存活率降为48.55%(P＜0.01);在诱导过程中,细胞ROS及LDH释放量明显上升(P＜0.01),SOD活性被抑制(P＜0.01),MDA生成量增加(P＜0.01).结论:MMT可对PC-3M细胞造成氧化损伤,使细胞存活率下降.
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灯盏乙素对MMT诱导SK-N-SH神经细胞凋亡的保护作用
目的 研究灯盏乙素对新型大气污染物甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人SK-N-SH细胞凋亡的保护作用及可能机制.方法 将SK-N-SH细胞随机分为5组:正常组,MMT诱导组,1.2×10-1mg/L灯盏乙素组,3.0×10-2mg/L灯盏乙素组,7.5×10-3mg/L灯盏乙素组.灯盏乙素预保护2 h,1 mmol/L MMT诱导24 h后,MTT法检测细胞存活率,分光光度法检测细胞活性氧(ROS)生成、细胞培养液和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)产量;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)释放量及Caspase-3活性变化.结果 灯盏乙素预保护的细胞在MMT诱导后,与MMT诱导组相比,细胞存活率上升(P<0.05),细胞ROS生成量受到抑制(P<0.01);细胞培养液和细胞内SOD活性增高(P<0.05),MDA产量降低(P<0.01);在这一过程中,细胞ATP的释放量有所恢复(P<0.05),同时Capase-3活性受到抑制(P<0.05).结论 灯盏乙素通过抗氧化作用,抑制MMT对SK-N-SH细胞的凋亡作用.
