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蝎毒多肽提取物对K562细胞PI3K和p-Akt信号蛋白表达及细胞增殖的影响
本研究旨在探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对人慢性髓系白血病细胞系K562细胞凋亡调控的PI3K和p-Akt信号蛋白的影响及作用机制.将体外培养的K562细胞,经PESV处理不同时间后,通过MTT法检测细胞增殖曲线,Western blot法检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化.结果表明,与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率增加,PI3K及p-Akt蛋白表达降低.结论:PESV可能通过抑制凋亡调控的PI3K、p-Akt信号蛋白,抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡.
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鼻咽癌组织P-Akt和p27Kip1表达及其相关性研究
目的:观察P-Akt和p27Kip1蛋白在鼻咽癌组织中的表达并分析两者之间的相互关系.方法:应用免疫组织化学技术(SABC)检测60例手术活检切取的鼻咽癌组织蜡块,与30例非肿瘤鼻咽组织石蜡标本作比较,分析鼻咽癌组织中磷酸化Akt(P-Akt)和p27Kip1蛋白的表达之间的相关性.结果:P-Akt蛋白在鼻咽癌中胞质表达高于非肿瘤鼻咽组织,P＜0.001,p27Kip1蛋白在鼻咽癌细胞核表达较非肿瘤鼻咽组织降低,P＜0.01；鼻咽癌细胞中P-Akt的表达与胞核p27Kip1的表达呈负相关,与胞质p27Kip1的表达呈正相关.结论:P-Akt蛋白过表达的鼻咽癌患者p27Kip1蛋白胞核表达降低,提示P-Akt蛋白和p27Kip1蛋白可能分别作为正性和负性调控因子,共同作用于细胞恶性增殖的过程.
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槐耳浸膏联合化疗药物对人胃癌MGC803的体外抑制作用
目的 筛选出槐耳浸膏与化疗药物的佳组合并探讨槐耳浸膏和化疗药物5-氟尿嘧啶诱导人胃癌MGC803细胞凋亡的机制.方法 以不同浓度槐耳浸膏和化疗药物(5-氟尿嘧啶,紫杉醇)作用于体外培养的人胃癌细胞MGC803,通过MTT法检测槐耳浸膏对MGC803细胞增殖的作用,倒置显微镜观察其形态的变化;将0.2 mg· mL-1的槐耳浸膏分别与5-FU(2.5 μg·mL-1)或紫杉醇(0.5μg· mL-1)联合处理细胞,比较存活率.流式细胞术检测0.2 mg· mL-1槐耳浸膏联合5-FU(2.5 μg·mL-1)干预MGC803细胞24、48 h后细胞的凋亡情况;Western Blot法检测0.2 mg·mL-槐耳浸膏联合5-FU(2.5 μg·mL-1)干预MGC803细胞24、48 h后细胞的P53、T-Akt和P-Akt蛋白的表达.结果 槐耳浸膏及化疗药物(5-氟尿嘧啶,紫杉醇)均能降低MGC803细胞存活率,并呈时间和剂量依赖性;倒置显微镜下可见细胞胞体缩小、核碎裂,且呈浓度与时间依赖性(P＜0.01).相较于单独应用化疗药物,联合用药能够显著降低细胞的生存率.槐耳浸膏联合5-FU联合给药上调人胃癌细胞MGC803 T-Akt及P53蛋白表达量,同时下调P-Akt的表达量.结论 槐耳浸膏联合5-FU在体外诱导胃癌细胞MGC803凋亡作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路来实现的.联合使用槐耳浸膏和化疗药物可能会更有效发挥槐耳抗肿瘤增殖的作用.
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肉桂醛对呼吸道合胞病毒感染宿主HeLa细胞Caspase-9和p-AKT表达的影响
目的 观察肉桂醛对呼吸道合胞病毒感染宿主HeLa细胞后,测定促凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-9和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达的影响.方法 实验分为正常组,病毒组,肉桂醛低、中、高浓度组.在以下四种情况下(直接灭活阶段、生物合成阶段、病毒吸附阶段、药物预处理作用)用肉桂醛处理,Western印迹法测定Caspase-9蛋白和p-AKT蛋白的表达.结果 肉桂醛组与病毒组相比(除药物预处理作用外),肉桂醛组p-AKT蛋白表达明显增加(P<0.001),而Caspase-9蛋白表达明显下降(P<0.001).结论 肉桂醛能够抗呼吸道合胞病毒与促凋亡蛋白Caspase-9和抑凋亡蛋白p-AKT表达有关.
关键词： 肉桂醛 Caspase-9蛋白 p-Akt蛋白 呼吸道合胞病毒 -
涎腺肿瘤中的p-AKT蛋白表达与彩色多普勒影像的相关性研究
目的:研究涎腺肿瘤的彩色多普勒影像表现、病理分级、分型与p-AKT蛋白表达的相关性,探讨p-AKT蛋白联合彩色多普勒影像对涎腺肿瘤的评估价值.方法:选取125例经病理证实的涎腺肿瘤患者的术前超声检查图像及病理组织,并运用免疫组织化学技术S-P法对活检切除的标本进行p-AKT蛋白检测.分析涎腺肿瘤的某些彩色多普勒特征性图与p-AKT蛋白表达之间的关系.结果:①p-AKT蛋白在涎腺恶性肿瘤中有较高的阳性表达率,为82％,p-AKT蛋白在良性涎腺肿瘤中的阳性表达为17.5％,1明显低于恶性涎腺肿瘤组的阳性表达,差异有统计学意义(P＜0.05);②在涎腺恶性肿瘤的彩色多普勒血流各级别中p-AKT蛋白表达有明显差异(P＜0.05),显示随着肿瘤内血流分布的增多,p-AKT蛋白在涎腺肿瘤的表达也随之增高.④从影像上特征性表现的评分来看,分值越低,p-AKT蛋白表达越低;分值越高,p-AKT蛋白表达越高.结论:p-AKT蛋白在涎腺恶性肿瘤的发生、发展中起着重要的作用,其阳性表达与涎腺恶性肿瘤的恶性度有一定的相关性且呈正相关,并且涎腺瘤彩色多普勒超声特征性表现与p-AKT表达有一定的相关性呈正相关.
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p-AKT、IGF-1蛋白在涎腺肿瘤中的表达
目的:研究涎腺肿瘤中p-AKT、IGF-1蛋白的表达情况,探讨p-AKT蛋白、IGF-1蛋白与涎腺肿瘤的发生、发展及临床病理的关系.方法:选取125例经病理证实的涎腺肿瘤患者病理组织,运用免疫组织化学技术S-P法对活检切除的标本进行p-AKT蛋白和IGF-1蛋白的检测.结果:①p-AKT蛋白和IGF-1蛋白在涎腺恶性肿瘤中都有较高的阳性表达率,分别为82％和71.4％ ;p-AKT蛋白和IGF-1蛋白在良性涎腺肿瘤中的阳性表达分别为17.5％,16.4％明显低于恶性涎腺肿瘤组的阳性表达,差异有统计学意义(P＜0.05)；②涎腺恶性肿瘤有、无转移的发生与p-AKT、IGF-1蛋白阳性表达无显著性差异(P＞0.05).而在临床分期中:Ⅰ-Ⅱ期恶性肿瘤p-AKT阳性表达72.2％,IGF-1蛋白阳性表达66.7％; Ⅲ-Ⅳ期恶性肿瘤p-AKT阳性表达100％,IGF-1蛋白阳性表达80％；临床的Ⅰ-Ⅱ期与Ⅲ-Ⅳ期比较,p-AKT、IGF-1蛋白表达有显著性差异(P＜0.05).结论:p-AKT蛋白和IGF-1蛋白在涎腺恶性肿瘤的发生、发展中起着重要的作用,其阳性表达与涎腺恶性肿瘤的恶性度有一定的相关性呈正相关.
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先天性巨结肠乳鼠肠组织中PI3K/AKT/eNOS信号通路相关标志物的表达及意义
目的:建立乳鼠模型,模拟人类先天性巨结肠(HD)的发生,观察其结肠组织中p-Akt蛋白、 NO及eNOS的表达情况,并探讨其意义.方法:本研究分为正常组、对照组和实验1、 2、 3组,每组3窝,每窝10只,共计15窝,所选对象为6～7日龄SD乳鼠,实验组以0.1%苯扎氯铵(BAC)处理降结肠15 min、对照组则用生理盐水代替,正常组不做任何处理.实验2、 3组饲养满6周后,开始分别予每天腹腔注射10 mg/mL的LY294002 (100 mg/kg)和50 mg/mL的L-NAME (10 mg/kg),直至7周整.术后的第1、 3、 5、 6和7周行乳鼠降结肠组织解剖,观察结肠大体形态,运用Western blotting法检测各组乳鼠结肠组织p-Akt蛋白表达水平,结肠组织中NO和eNOS含量检测采用传统的ELIS A试剂盒法.结果:①术后观察,实验组5周开始出现排便减少,直至7周发生不同程度的腹胀、神萎及消瘦,较对照组相比,粪便颗粒变大且干燥,处死后,解剖BAC处理段结肠,可见肠道蠕动变差或无蠕动,肠管痉挛、狭窄,近端肠管扩张,并可见肠内容物潴留.②术后1、 3、 5、 6和7周,随时间延长,实验1组结肠组织中p-Akt呈逐渐下降趋势,实验2组7周(LY294002组) p-Akt表达量较实验1组7周有所减少,而实验3组7周p-Akt (L-NAME组)表达量较实验1组7周增加.③实验1组术后结肠组织中NO和eNOS含量,在第1、 3、 5、 6和7周呈逐渐增加趋势.结论:本实验模型成功模拟了人类先天性巨结肠的发生,通过本次实验,我们推测PI3K/AKT/eNOS信号通路很有可能参与了乳鼠HD的发生,为进一步研究HD的病因及相关分子生物学机制奠定理论基础.
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子宫腺肌病中PTEN和Akt的表达及其相关性研究
目的 探讨子宫腺肌病病灶中10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(PTEN)和蛋白激酶B(PKB/Akt)的蛋白表达情况,旨在为子宫腺肌病的发生发展以及治疗提供理论依据.方法 采用免疫组织化学SP法检测子宫腺肌病异位内膜(30例)、在位内膜(27例)、正常子宫内膜(20例)的腺上皮细胞和间质细胞中PTEN、Akt、磷酸化Akt(P-Akt)蛋白的表达并进行比较.结果 PTEN蛋白在腺上皮细胞中的表达,正常子宫内膜表达高于在位内膜和异位内膜(P<0.05,P<0.01),子宫腺肌病在位内膜的表达高于子宫腺肌病异位内膜的表达(P<0.01);Akt、P-Akt蛋白在子宫腺肌病异位内膜的腺上皮细胞中的表达强度高于在位内膜(P<0.05)和正常子宫内膜(P<0.01),其在位内膜腺上皮细胞中的表达强度高于正常子宫内膜(P<0.01).PTEN蛋白在间质细胞中的表达,正常子宫内膜明显高于子宫腺肌病的在位内膜和异位内膜(P<0.05),但在位内膜与异位内膜之间比较差异无统计学意义(P>0.05):Akt、P-Akt蛋白在间质细胞中的表达,异位和在位内膜明显高于正常内膜,异位内膜和在位内膜两组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).FIEN与Akt、PTEN与P-Akt在子宫腺肌病异位内膜、在位子宫内膜和正常子弓内膜中的表达均呈负相关(r=-0.444;r=-0.546).结论 PTEN蛋白表达在子宫腺肌病的在位、异位内膜中减少;Akt、P-Akt蛋白表达增加.FIEN蛋白低表达不能有效的抑制Akt的激活,从而对子宫腺肌病的发生与发展起重要的作用.
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慢传输型便秘大鼠胃肠组织中 PI3 K／AKT／eNOS信号通路相关标志物的表达变化及意义
目的：观察慢传输型便秘（ STC）大鼠胃肠组织PI3K／AKT／eNOS信号通路相关标志物（ p-Akt蛋白、NO及eNOS）的表达变化，并探讨其意义。方法84只健康成年Wistar大鼠，随机分为对照1组、对照2组、模型1组、模型2组、模型3组及模型4组，各14只。模型1、2、3、4组每日予以苯乙哌啶（8 mg／kg）灌胃制作STC模型，对照1、2组予以等量生理盐水灌胃。模型3组及模型4组大鼠饲养第70天时，每天腹腔分别注射10 mg／mL 的LY294002（100 mg／kg）和50 mg／mL的L-NAME（10 mg／kg）。对照1组60 d时、对照2组90 d时、模型1组60 d时、模型2组90 d时、模型3组90 d时及模型4组90 d时，采用Western blotting法检测各组大鼠胃窦、小肠和远端结肠组织p-Akt蛋白。对照1组60 d时、对照2组90 d时、模型1组60 d时、模型2组90 d时采用ELISA试剂盒法检测胃肠组织中NO和eNOS含量。结果模型1组远端结肠组织p-Akt蛋白表达较对照1组低，模型2组小肠、远端结肠组织p-Akt蛋白表达较对照2组低，模型3组远端结肠组织p-Akt蛋白表达较模型2组低，模型4组远端结肠组织p-Akt蛋白表达较模型2组高（ P均＜0．05）。模型1组、模型2组大鼠胃窦、小肠、远端结肠组织NO和eNOS含量呈逐渐增高趋势（P均＜0．05）。结论 STC大鼠胃窦组织p-Akt表达变化不明显，小肠组织p-Akt表达有减少趋势，远端结肠组织p-Akt表达明显降低，胃窦、小肠、远端结肠组织NO和eNOS含量增多且呈逐渐增高趋势。推测PI3K／AKT／eNOS信号通路参与了大鼠STC的发生，而且主要是通过影响远端结肠组织来完成。
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P-AKT蛋白在乳腺良、恶性病变组织中的表达及与HER-2、P53的关系
目的 检测P-AKT(Ser473)蛋白、HER-2、P53在人乳腺良、恶性病变组织中的表达,分析P-AKT、HER-2、P53在乳腺肿瘤进展中的作用及临床意义,探讨P-AKT蛋白、HER-2、P53之间的关系. 方法 应用免疫组化Envi-sion法,检测P-AKT蛋白、HER-2、P53在10例乳腺增生症、19例乳腺非典型增生疾病、13例乳腺导管原位癌及26例乳腺浸润性导管癌(IDC)中的表达,结果用SPSS12.0软件分析. 结果 P-AKT蛋白、HER-2、P53在乳腺浸润性导管癌的表达(57.6％、65.3％、57.6％)和原位癌的表达(46.2％、61.6％、53.8％)显著高于在乳腺非典型增生性疾病(26.3％、5.3％、0.0％)及乳腺良性增生症的表达(0.0％,P＜0.05).P-AKT蛋白、HER-2和P53在乳腺浸润性导管癌的表达与其在乳腺原位癌中的表达之间表达差异无统计学意义(P＞0.05);三者在乳腺增生症与非典型增生之间的表达差异均无统计学意义(P＞0.05);三者在有无淋巴结转移的浸润性乳腺导管癌之间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).在乳腺良、恶性病变中P-AKT蛋白的表达与HER-2、P53的表达均有相关性(P＜0.01). 结论 P-AKT(Ser473)蛋白、HER-2、P53的高表达在乳腺癌发生、发展起重要作用,并且之间存在显著的正相关性.
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卵巢癌组织中Notch1和P-AKT相关性及与血管生成的关系
目的：研究转移相关基因 Notch1和磷酸化 AKT（P - AKT）在15例正常卵巢组织、32例卵巢良性肿瘤组织和48例卵巢癌组织中的表达及相关性。方法：采用免疫组化 SP 法检测各组 Notch1、P - AKT 的表达情况和微血管密度（MVD），MVD 采用 CD34标记。分析其表达与临床病理特征的关系及相互间的关系。结果：Notch1在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织和卵巢癌组织中的阳性表达率分别为13.33%（2/15）、31.25%（10/32）和81.25%（39/48），呈递增趋势，在卵巢癌组织中随临床分期、组织学分级的增加和淋巴结的转移呈明显增高趋势（P <0.05）；P - AKT 在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织和卵巢癌组织中的阳性表达率分别为0（0/15）、40.63%（13/32）和87.5%（42/48），在卵巢癌组织中临床分期较晚和伴随淋巴结的转移明显增高（P <0.05）；CD34主要表达于各种卵巢组织的血管内皮细胞，MVD 值在有淋巴结转移的卵巢癌组织中明显高于无淋巴结转移者（P <0.05）。Spearman 相关性分析 Notch1和 P - AKT 在卵巢癌组织中呈现显著正相关（P <0.05）。结论：Notch1、P - AKT 是鉴别卵巢良恶性肿瘤的指标之一，检测淋巴结转移者中的MVD 值对卵巢癌的恶性程度判断有帮助。
