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补肾中药通过调控Notch1蛋白的表达治疗大鼠骨质疏松性骨折的作用研究
目的 探究补肾中药对大鼠骨质疏松骨折的治疗作用和机制.方法 选取老年雌性大鼠60只,分为正常组、骨质疏松骨折模型组、高、中、低剂量补肾中药治疗组,各组均摘除卵巢,术后3个月形成骨质疏松模型.随后除正常组外,其余各组均建立股骨骨折模型.骨质疏松骨折模型建立后,每日给予正常组与模型组生理盐水进行灌胃,治疗组分别给予高、中、低剂量补肾中药灌胃12 w进行治疗.末次实验结束后麻醉大鼠,应用双能X射线检测大鼠股骨的骨密度.采取血清样品通过ELISA法测量碱性磷酸酶、骨钙素、TRAP破骨标志物等指标含量,对股骨样品进行病理学检查以及Western blot法检测Notch1蛋白的表达.结果 病理组织学切片结果显示,高剂量治疗组在骨折端的成骨细胞数量较多,破骨细胞数量较少,提示补肾中药具有促进骨性愈合的效果.经补肾中药治疗后,高剂量治疗组的骨密度与模型组相比骨密度显著回升.研究发现,strACP经过补肾中药治疗后,治疗组中的碱性磷酸酶与血清抗酒石酸性磷酸酶的含量显著降低,骨钙素含量明显提升,上述指标在高剂量治疗组中与模型组相比差异均具有统计学意义(P＜0.01),呈明显的剂量依赖性.另外,Western blot法检测结果也显示,Notch1蛋白的表达在模型组中受到显著抑制(与正常组相比,P＜0.01),而补肾中药具有调节Notch1蛋白表达的作用,成明显剂量相关性,且高剂量治疗组的表达水平与正常组接近.结论 补肾中药能够通过调节Notch1蛋白的表达来抑制血清中破骨标志物碱性磷酸酶和TRAP的水平,并提高骨钙素的含量来刺激成骨细胞生成、抑制破骨细胞分化,从而加速骨折的愈合,提高骨密度,对大鼠股骨骨质疏松骨折具有良好的治疗作用.
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胃腺癌组织Notch1和Jagged1蛋白表达临床意义分析
目的:探讨胃腺癌组织Notch1和Jagged1蛋白的表达及其与临床病理学特征的关系和意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测2009-01-01-2012-12-12泰山医学院附属莱芜医院60例胃腺癌组织和癌旁组织中Notch1和Jag-ged1蛋白表达水平.结果:Notch1在胃腺癌组织中的阳性表达率为41.7％(25/60),癌旁组织为81.7％(49/60),差异有统计学意义,x2 =20.31,P＜0.001;Jagged1在胃腺癌组织中的阳性表达率为71.7％(43/60),癌旁组织为96.7％(58/60),差异有统计学意义,x2=14.07,P＜0.001.Notch1表达与肿瘤分化程度(P=0.006)、淋巴结有无转移(P=0.005)和浸润深度(P=0.009)有关,Jagged1的表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、浸润深度(P=0.009)和淋巴结有无转移(P=0.006)有关.Spearman相关分析结果显示,胃腺癌组织中Notch1和Jagged1蛋白表达呈正相关,r=0.460,P＜0.001.结论:胃腺癌组织中Notch1和Jagged1蛋白表达下调,且两者呈正相关,可能与胃腺癌的发生、浸润及转移等多个环节有关;检测Notch1和Jagged1的表达有助于判断胃腺癌的生物学行为.
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地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响
目的 探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响.方法 取大鼠P3-P5代BMSCs,随机分为正常对照组(CON组)、神经生长因子组(BDNF组,10μg/ml)和地黄多糖诱导A、B、C组(RGP组,浓度分别为50、100、200μg/ml),诱导后连续培养7d.观察细胞一般形态.采用Western blotting检测CON组与RGP C组神经标志物相关蛋白神经巢蛋白(Nestin)、βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光法和Western blotting分别检测各组诱导后0、1、3、7d时Notch1、Jagged1蛋白和Notch1胞内段NICD的表达.结果 CON组始终以梭形细胞为主,RGP C组第5天起出现神经元样细胞.Western blotting检测到RGP C组Nestin蛋白表达由强到弱,NSE和βⅢ-tubulin蛋白表达由弱到强,GFAP蛋白呈弱表达.免疫荧光结果显示,RGP各组各时间点Notch1蛋白阳性细胞率均显著低于CON组(P＜0.05),且随时间延长Notch1蛋白表达阳性率逐渐降低;RGPC组中Jagged1阳性细胞率诱导后1d时具有明显的上升趋势,而后显著下降(P＜0.05),BDNF组基本无Jagged1蛋白表达.Western blotting检测结果与免疫荧光检测结果类似.结论 地黄多糖具有诱导BMSCs向神经元样细胞分化的作用,且可影响Notch1和Jagged1蛋白的表达.
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Notch1蛋白-人类HBx相关性肝癌治疗新靶点
肝细胞肝癌(HCC)发病率不断增加,但迄今尚缺乏有效的治疗方法和药物.因此,迫切需要寻找一种有效的治疗方法.慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是导致肝癌的重要原因之一,其中乙肝病毒X蛋白(HBx)是导致肝癌发生的直接原因.我们近发现HBx可以活化Notch1蛋白从而促进肿瘤生长,而Notch1短发夹RNA(shRNA)可以抑制Notch1表达从而抑制肿瘤的生长.本文综述了近年有关Notch1与HCC的关系,提出HCC基因治疗的新靶点.
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肝细胞癌中Notch1和Notch2蛋白表达及其意义
目的:探讨原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,PHCC)中Notch1和Notch2蛋白的表达及临床病理学意义.方法:采取免疫组织化学ENVISION法对78例PHCC组织和对照组10例癌旁组织中Notch1和Notch2蛋白的表达进行检测,并结合临床病理学及随访资料,进行统计分析.结果:在PHCC组织中Notch1阳性表达52例(66.67％),Notch2阳性表达12例(15.38％),而对照组癌旁组织Notch1阳性表达2例(20.00％),Notch2阳性表达8例(80.00％).Notch1阳性表达率PHCC组织高于对照组癌旁组织(P＜0.01),而Notch2在PHCC组织中的阳性表达率低于对照组癌旁组织(P＜0.01),两者比较差异均有统计学意义.Notch1的表达与有无肝硬化、肿瘤大小、HBsAg是否阳性、肿瘤分期及转移呈正相关,而Notch2的表达与患者年龄、组织分级以及TNM分期呈正相关.随访9年,死亡53例,存活25例,≥24个月38例,生存时间＜24个月40例,平均生存时间34.96个月,2年生存率48.72％.Spearman等级相关性分析显示,随着Notch1阳性表达率提高,PHCC患者术后生存率下降,两者呈负相关,Notch2阳性表达率与PHCC患者的生存时间无相关性.结论:Notch1作为促癌基因,在PHCC的发生发展、浸润和转移起着重要作用,而Notch2在肝细胞癌中表达较低,可能具有抑制肝细胞癌生长的作用.
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结肠癌组织中Notch1、 NF-κB、 uPA及p-Akt的表达变化及意义
目的 观察Notch1、核转录因子κB(NF-κB)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及p-Akt在结肠癌组织中的表达,并探讨其意义.方法 收集结肠癌手术标本86例,其中高分化腺癌33例,中分化腺癌39例,低分化腺癌14例;结肠腺瘤手术标本25例;手术切端正常结肠黏膜组织30例作为对照.应用免疫组化法分别检测Notch1、NF-κB、uPA和p-Akt在腺癌组织、腺瘤组织和正常结肠黏膜组织中的表达,分析Notch1、NF-κB、uPA和p-Akt表达与结肠癌患者临床病理特征的关系,各指标间的相关性分析采用Pearson相关分析法.结果 从正常结肠黏膜组织到结肠腺瘤和结肠癌组织,Notch1、NF-κB、uPA和p-Akt表达阳性率呈逐渐增加趋势,且差异有统计学意义(P均＜0.05);Notch1、NF-κB、uPA和p-Akt表达与结肠癌患者的组织分化程度、淋巴结转移、浸润深度及Dukes分期相关(P均＜0.05);Notch1和p-Akt、Notch1和NF-κB、NF-κB和uPA及p-Akt和NF-κB阳性表达均呈正相关关系(r分别为0.225、0.434、0.751、0.683,P均＜0.05).结论 Notch1、NF-κB、uPA和p-Akt在结肠癌组织中的表达升高,这些指标与结肠癌的发生发展有关.
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肺癌组织中Notch1、Bmi-1蛋白的表达变化及其意义
目的 观察肺癌组织 Notch1、Bmi-1蛋白表达变化,探讨检测肺癌组织 Notch1、Bmi-1蛋白表达的临床意义.方法 选择67例肺癌组织标本为观察组,30例行肺支气管镜检查者的正常肺组织标本为对照组.用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(S-P法)检测两组Notch1、Bmi-1蛋白表达.分析肺癌组织 Notch1、Bmi-1蛋白表达与肺癌临床病理参数的关系.结果 观察组、对照组Notch1阳性表达率分别为62.69%(42/67)、13.33%(4/30),Bmi-1阳性表达率分别为49.25%(33/67)、10.00%(3/30).观察组Notch1、Bmi-1蛋白阳性表达率均高于对照组,P均<0.05.肺癌组织Notch1、Bmi-1表达与淋巴结转移、分化程度、临床分期有关(P均<0.05),与年龄、性别、病理类型无关(P均>0.05).结论 肺癌组织Notch1、Bmi-1表达升高.检测肺组织Notch1、Bmi-1表达有助于肺癌的诊断及病情评估.
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胃癌组织中Notch1、Jagged1表达变化及意义
目的 观察胃癌组织中Notch1及其配体Jagged1的表达变化,并探讨其临床意义.方法 采用免疫组化法检测26例胃癌组织及其20例相应的癌旁正常胃组织中的Notch1、Jagged1蛋白,并分析其与胃癌临床病理参数的关系.结果 在胃癌组织和癌旁组织中Notch1阳性表达率分别为38.5%、75.0%,Jagged1阳性表达率分别为34.6%、80.0%,P均<0.05;Notch1、Jagged1表达与胃癌有无脉管浸润、分化程度、浸润深度有关(P均<0.05),而与患者的年龄、性别及肿瘤TNM分期、有无淋巴结转移无关(P均>0.05).Spearman相关性分析显示,在胃癌组织中Notch1和Jagged1表达呈正相关(r=0.032,P<0.05).结论 Notch信号信号通路中Notch1受体及其配体Jagged1在胃癌组织中低表达,二者在胃癌的发生、发展中起重要作用.
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ATRA诱导鼠胚神经干细胞向神经元分化过程中Notch1的表达变化及意义
目的 观察全反式维甲酸(ATRA)体外诱导鼠胚神经干细胞(NSCs)分化为神经元过程中Notch1的表达变化,并探讨其机制.方法 将NSCs分为两组,观察组加入终浓度为1.0 μmol/L的ATRA,对照组不加ATRA.采用免疫细胞化学法检测NSCs Notch1蛋白,采用实时荧光定量PCR法检测NSCs Notch1 mRNA.结果 观察组NSCs 经ATRA诱导3、5、7、9 d,Notch1蛋白积分光密度值分别为539.43±13.46、488.67±13.12、437.54±13.10、434.32±13.04, Notch1 mRNA相对表达量分别为0.412 2±0.080 2、0.216 4±0.125 2、0.022 1±0.135 5、0.017 7±0.006 1;对照组分别为591.35±15.61、0.624 3±0.274 5,与对照组相比,P均＜0.05.结论 在ATRA体外促鼠胚NSCs分化为神经元过程中,Notch1表达减少;ATRA诱导NSCs向神经元的分化与抑制Notch信号途径有关.
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乙型肝炎患者外周血CD4+T细胞Notch1蛋白的表达
目的 探讨CD4+T细胞Notch1蛋白在乙型肝炎病人发病机制中的作用.方法 采用流式细胞仪检测23例慢性乙型肝炎患者、8例急性乙型肝炎患者和10例健康对照者的外周血CD4+T细胞Notch1蛋白表达水平,并应用荧光定量PCR方法测定上述研究对象血中HBV-DNA滴度.结果 慢性乙型肝炎组外周血CD4+T细胞Notch1蛋白的平均百分率为(3.17±0.65)%,与急性乙型肝炎组(1.85±0.46)%和健康对照组(2.18±0.57)%比较都有极其显著差异(P<0.001);急性乙型肝炎组外周血CD4+T细胞Notch1蛋白的百分率与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);慢性乙型肝炎患者外周血CD4+T细胞Notch1蛋白的百分率与HBV-DNA滴度争正相关.结论 Notch1蛋白在慢性乙型肝炎患者外周血中表达增高,说明其可能参与乙型肝炎病情的发展及病毒的清除.
关键词： Notch1蛋白 乙型肝炎 CD4+T细胞:HBV-DNA -
Notch1蛋白表达在儿童急性B淋巴细胞白血病预后预测中的意义
目的 研究Notch1蛋白在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达及其对预后的影响.方法 采用免疫组织化学(SABC)法检测初诊的63例B-ALL、14例T系ALL(T-ALL)及34例非恶性血液病患儿(对照组)骨髓白血病细胞中Notch1蛋白表达；反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测ALL患儿中Notch1 mRNA表达.结果 Notch1蛋白在T-ALL及B-ALL中有异常高表达,分别为71.4％和31.7％,与对照组(8.8％)比较差异有统计学意义(P ＜0.001、0.05).多因素分析显示:Notch1蛋白在B-ALL中的表达与患儿初诊时的性别、年龄、外周血白细胞数均无相关性(P均＞0.05),也与早期治疗反应无关.然而,长期治疗效果经Kaplan-Meier分析表明:Notch1蛋白阴性组患儿长期无病生存率高达92.7％,而Notch1蛋白阳性组患儿长期无病生存率仅为54.5％(P=0.0054).结论儿童B-ALL中Notch1蛋白的阳性表达可能是预后不良的指标,干预Notch1信号传导通路有望成为治疗此部分患儿分子靶向治疗的新靶点.
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肿瘤坏死因子α对Raji细胞Notch1蛋白表达的影响
目的 通过探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)作用淋巴瘤细胞系Raji细胞后Notch1蛋白表达的变化,进一步明确TNF-α对淋巴瘤细胞Notch信号途径的影响.方法 采用半定量RT-PCR方法检测Raji细胞Notch1 mRNA的含量;用流式细胞术分析Raji细胞Notch1蛋白的表达及TNF-α作用后Notch1蛋白的变化.结果 ①半定量RT-PCR检测结果表明Raji细胞经TNF-α作用后Notch1 mRNA的含量明显增高,且随TNF-α浓度的增加而增高,与对照组比较,差异有极显著性意义(P<0.01);②流式细胞术分析表明,Notch1蛋白在Raji细胞呈阳性表达,TNF-α作用组Notch1蛋白的平均荧光强度明显高于对照组,差异亦有极显著性意义 (P<0.01).结论 TNF-α可上调Raji细胞内Notch1蛋白的表达;TNF-α可通过影响Notch信号途径在淋巴瘤细胞内发挥作用.
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Notch1蛋白在人心脏瓣膜间质细胞凋亡与钙化关系中的作用
目的 用人心脏瓣膜间质细胞(hVICs)在体外培养并用钙化诱导液建立瓣膜钙化模型,观察hVICs钙化过程中Notch1蛋白表达及细胞凋亡情况,探讨Notch1蛋白在hVICs凋亡与钙化关系中的作用.方法 将体外培养的hVICs随机分为两组,钙化组用含钙化诱导液的培养基培养,以建立钙化模型,并按1～7天分别诱导细胞,观察钙化的动态过程;空白组用正常培养基(I-GRO PLUS)培养.所有hVICs均培养7天.检测两组细胞钙化结节数目、BMP-4蛋白、Notch1蛋白的表达及hVICs凋亡率.然后将钙化组中诱导钙化细胞再随机分脂多糖组(LPS)、Notch1抑制剂组(γ分泌酶抑制剂,DAPT)、对照组(只加钙化诱导液)体外培养3天,检测BMP-4、Notch1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (Caspase3)的表达.结果 与空白组细胞比较,钙化组细胞钙化及Notch1蛋白的表达均高于空白组,且随着诱导天数的增加而增加;细胞凋亡率在钙化诱导3天时高,随后逐渐下降.LPS组与对照组比较,细胞凋亡和钙化均随着Notch1蛋白的表达增加而增加;DAPT组与对照组比较,细胞凋亡和钙化均减少.结论 hVICs钙化与细胞凋亡有着密切的关系,且Notch1蛋白在hVICs凋亡与钙化关系中起着重要的作用.
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EGCG通过降低Notch1和Jagged1表达抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抑制鼻咽癌干细胞SP18增殖的机制. 方法 采用MTT法检测EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50；选用细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验观察EGCG对鼻咽癌干细胞SP18增殖的影响；采用Westem blot检测Notch1和Jagged1蛋白表达. 结果 EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50值为149.02 mg/L; EGCG呈浓度和时间依赖性抑制SP18细胞的增殖(n=3,P＜0.05)；EGCG呈浓度依赖性抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达. 结论 EGCG能有效抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖,其可能通过降低Notch1和Jagged1蛋白的表达而发挥作用.
关键词： EGCG 鼻咽癌干细胞SP18 细胞增殖 Notch1蛋白 Jagged1蛋白 -
Notch1、P21 WAF1和Involucrin在鼻咽癌组织中的表达及意义
背景与目的:Notch1受体蛋白的异常表达常见于多种原发性肿瘤,但它与鼻咽癌的关系仍不清楚.本研究拟探讨鼻咽癌组织中Notch1受体蛋白、其下游蛋白P21WAF1和Involucrin蛋白的表达,以及它们与鼻咽癌分化程度的关系.方法:采用免疫组织化学SP法检测101例鼻咽癌组织和20例鼻咽慢性炎症组织中Notch1、P21WAF1和Involucrin蛋白的表达.结果:20例鼻咽慢性炎症组织中Notch1、P21WAF1和Involucrin蛋白表达率分别为100%(20/20)、90.0%(18/20)、100%(20/20);鼻咽癌组织中Notch1、P21WAF1和Involucrin蛋白的表达率分别为77.2%(78/101)、89.1%(90/101)和80.1%(81/101);三者在不同组织类型鼻咽癌组织中的表达均有显著差异,随着分化程度的下降表达明显减弱,分别为P=0.000,P=0.026和P=0.000;并且在角化性鳞状细胞癌、分化型非角化癌和未分化癌之间两两比较,表达均有显著差异,分别P＜0.05;Notch1的表达水平分别与P21WAF1和Involucrin的表达水平正相关,P=0.002和P=0.001;而P21WAA1与Involucrin的表达水平无明显的相关.结论:鼻咽癌组织中Notch1、P21WAF1和Involucrin的表达与鼻咽癌细胞分化程度密切相关.
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大鼠创伤性颅脑损伤后脑室下区Notch1蛋白表达的时程变化研究
目的 观察创伤性颅脑损伤(TBI)后脑室下区(SVZ)Notch1蛋白表达的动态变化,探讨其与Notch信号通路开放及TBI后神经干细胞(NSCs)增殖的相关性. 方法 96只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(仅切开头皮和颅骨开窗,n=16)、对照组(不做任何处理,n=16)和实验组(采用Feeney's自由落体模型建立中型TBI模型,n=64),其中实验组大鼠依据取材时间不同分为1、3、7、14d亚组,每亚组16只.采用免疫荧光化学染色检测各组大鼠SVZ区脑组织Notch1/巢蛋白(nestin)双标染色阳性细胞表达,采用Western blotting检测Notch1蛋白表达. 结果 免疫荧光化学染色结果显示,实验组SVZ区脑组织Notch1/nestin双标染色阳性细胞数量在TBI后1d时即升高出现峰值,达对照组的2～3倍,其后逐渐下降,14d时基本恢复正常,4个亚组间差异有统计学意义(P＜0.05);实验组1、3、7d亚组Notch1/nestin双标染色阳性细胞数量分别与对照组、假手术组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blotting结果显示,对照组及假手术组Notch1蛋白表达量无明显差别,实验组TBI后1d时SVZ区Notch1蛋白表达量相对较多,后逐渐下降,14d时降至正常水平. 结论 大鼠TBI后可激活Notch1蛋白表达,使Notch信号通路开放,从而影响NSCs增殖的调控.
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结肠癌中DLL4/Notch-1的表达及意义
目的：探讨 DLL4、Notch1在结肠癌中的表达及其临床意义。方法：收集十堰市人民医院病理科2009年1月至2012年10月存档的结肠蜡块标本95例，其中正常黏膜组织8例，结肠癌70例，包括高分化腺癌30例、中分化腺癌25例、低分化腺癌15例；结肠腺瘤17例。运用免疫组织化学 SP 法检测DLL4、Notch1在组织中的表达，分析其表达水平与临床病理之间的关系。结果：(1)在结肠正常黏膜-腺瘤-癌序列中，DLL4的阳性率呈递增趋势，其在结肠癌组中的表达率高于正常黏膜组(P<0.05)；(2) Notch-1的阳性率在结肠正常黏膜-腺瘤-癌序列中亦呈递增趋势，其在结肠癌组中的表达率高于正常黏膜组(P<0.05)；(3)DLL4、Notch-1在结肠癌不同分化程度中的表达率不同，分化越低，阳性率越高(P<0.01)。结论：DLL4/ Notch1的表达与结肠癌的发生、发展有关，可为结肠癌基因治疗提供靶点。
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地黄多糖在诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化过程中对Notch1蛋白表达的影响
目的 探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的作用,及其对Notch1蛋白表达的影响.方法 以大鼠BMSCs为研究对象,取第3代细胞,分为对照组、β-巯基乙醇诱导组(5 mmol/L BME)和地黄多糖诱导组(0.2 mg/mL)进行诱导实验,应用流式细胞仪检测诱导前后细胞生长周期改变情况,免疫细胞化学染色法检测神经标志物:神经巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Notch1蛋白的表达,Western blot检测Notch蛋白胞内片段(NICD)的表达情况.结果 流式细胞仪检测示地黄多糖诱导后G0/G1期细胞比例明显升高,而S+G2/M期的细胞比例明显下降.免疫细胞化学染色显示,对照组不表达神经细胞标志物,各诱导组诱导后产生特异性神经细胞标志物表达.其中地黄多糖组nestin及NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组(P<0.05);GFAP阳性细胞率低于β-巯基乙醇诱导组,差异有统计学意义(P<0.05);免疫细胞化学染色示地黄多糖诱导组诱导前为Notch1蛋白强阳性或阳性染色,并随诱导时间延长阳性细胞逐渐减少.Western blot结果显示地黄多糖诱导组诱导分化24 h后细胞内NICD含量逐渐下降,到第5天时,低于诱导前水平,且仍明显低于对照组.结论 地黄多糖可能通过抑制Notch1蛋白表达而诱导BMSCs向神经样细胞分化,且主要向神经元样细胞方向分化.
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长链非编码RNA ROR通过notch1蛋白调控胰腺癌细胞的增殖凋亡
目的:研究长链非编码RNA ROR(lncRNA ROR)对胰腺癌细胞增殖凋亡的影响,并探讨其机制.方法:以胰腺癌细胞BxPC-3为研究对象,RT-PCR检测ROR与notch1的RNA水平,Western blot检测notch1蛋白的变化.通过RNAhybird及萤光素酶报告实验,探索ROR对notch1的调控机制;采用CCK-8、TUNEL检测细胞增殖凋亡的变化.结果:ROR与notch1在胰腺癌组织中均高表达,两者存在正相关性.BxPC-3细胞过表达ROR后,细胞增殖活性升高,DNA损伤阳性细胞比例降低,伴随notch1的mRNA及蛋白水平升高.萤光素酶报告实验显示:ROR可与notch1的调控因子miR-137结合并抑制其活性.将ROR与si-notch1共转染BxPC-3细胞,与对照组相比,pcDNA-ROR+si-notch1组细胞增殖活性降低,TUNEL阳性细胞比例增加,差异均具有统计学意义.结论:lncRNA ROR通过促进notch1蛋白表达,调控胰腺癌细胞的增殖凋亡.
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γ-促分泌酶抑制剂对Notch1蛋白表达阳性的原代非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用及其机制
目的 探讨γ-促分泌酶抑制剂MW167Ⅱ对Notch1蛋白表达阳性的原代非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用及其机制.方法 收集11例非小细胞肺癌患者的癌组织标本,应用胶原酶消化法获取细胞后进行细胞培养,采用染色、免疫组化法鉴定为Notch1蛋白表达阳性非小细胞肺癌细胞.将细胞分为对照组、实验1组、实验2组、实验3组,分别加入生理盐水、0.25μmol/L MW167Ⅱ、0.50μmol/L MW167Ⅱ、0.75μmol/L MW167Ⅱ,观察各组细胞周期分布情况、细胞存活率及Notch1 mRNA表达情况.结果 与对照组比较,各实验组的G0/G1期细胞比例增高、细胞存活率及Notch1 mRNA表达量均降低(均P<0.05).G0/G1期的细胞比例与MW167Ⅱ的浓度呈正相关(P<0.05).培养24 h及48 h后,实验1组、实验2组、实验3组的细胞存活率及Notch1 mRNA表达量依次降低(均P<0.05),且各实验组细胞培养48 h后的细胞存活率均低于培养24 h后(均P<0.05).结论 γ-促分泌酶抑制剂可抑制Notch1蛋白表达阳性的非小细胞肺癌细胞的增殖分化,且呈浓度和时间双重依赖性,这可能与其抑制γ-促分泌酶的活性阻断Notch信号通路有关.
