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地黄多糖对大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化作用的研究
目的:探讨地黄多糖体外对大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs)分化为神经样细胞的诱导作用.方法:以大鼠BMSCs为研究对象,采用流式细胞仪检测BMSCs表面标志,MTT法检测细胞生长曲线,当第3代细胞爬片达到80％以上汇合时,分为对照组、化学方法诱导组(5 mmol·L -1,β-mercap toethanol)、脑源性神经生长因子(10 μg·L-1,BDNF)组和地黄多糖组(200 mg·L-1)进行诱导,6h后应用免疫细胞化学染色法检测各实验组神经元巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,RT-PCR检测nestin,NSE,βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)和GFAP mRNA的表达情况.结果:经分离鉴定培养5代以内大鼠BMSCs增殖旺盛、具有较好的细胞活力；免疫细胞化学染色和RT-PCR检测结果显示,对照组不表达神经细胞标志物,各诱导组诱导后有特异性神经细胞标志物表达.其中地黄多糖组Nestin,NSE阳性细胞率分别为( 56.74±1.36)％,(73.37±1.27)％,高于化学诱导组(28.21±2.43)％,(2.31±2.72)％和神经生长因子组(31.3±1.61)％,(28.87±1.65)％,(P＜0.05)；GFAP阳性细胞率(20.17±1.27)％低于化学诱导组和神经生长因子组,差异具有统计学意义(P＜0.05)；化学诱导组Nestin,NSE和GFAP阳性细胞率与生长因子组比较,差异无统计学意义.结论:地黄多糖具有诱导BMSCs向神经样细胞分化的作用,主要向神经元样细胞方向诱导.
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中药诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化研究进展
用计算机检索中国知网、万方数据库和PubMed中近10年相关文献,检索词分别为“中药、骨髓间充质干细胞、神经样细胞、分化”和“Traditional Chinese medicine,Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,neural cells,differentiation”,检索式分别为“并”和“and”.共检索到中文文献630篇,英文文献363篇,根据文献筛选标准剔除重复及不规范的文献,共纳入39篇文献.发现中药诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经样细胞分化的研究以中药复方制剂、单味中药、中药有效成分或部位的内容为多,这表明目前此方面研究为热点.中药有效成分或部位作用机制的解释更符合现代医学药理理论,而且更易结合并体现现代实验方法和技术的运用.用现代医学药理实验方法与技术研究中药诱导MSCs向神经元样细胞分化的同时,应当深化并体现传统中医药学药性法则、中药炮制方法、辨证论治理论等特色.为用中药作为诱导剂来防治缺血性脑疾病等神经系统疾病提供了一定理论依据.
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GM1体外诱导人脐带血间充质干细胞分化为神经样细胞研究
目的 研究单唾液酸四己糖神经节苷脂通过体外诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞并探索其佳诱导浓度.方法 取足月妊娠剖宫产健康胎儿的脐带,剔除脐动脉和脐静脉,用酶消化法获得MSCs,贴壁培养,采用流式细胞技术行细胞表型检测.扩增后,取第4代细胞,分为A、B、C、D、E5组,前4组为实验组,E组为对照组,实验组各组GM1浓度分别为:A组50μg/mL、B组100μg/mL、C组150μg/mL、D组200μg/mL,诱导液用L-DMEM培养基配制,对照组仅使用L-DMEM培养基.观察5组诱导人脐带血间质干细胞向神经样细胞分化的作用,每60min观察细胞诱导前后的形态,在第360min时采用免疫细胞染色法检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经丝蛋白(neurofilaments protein H,NF-H)以及神经元特异性标记物微管结合蛋白-2(microtubule associated protein 2,MAP-2)的表达情况,并计算阳性细胞率.结果 ①大部分原代细胞在接种9h后贴壁,呈多边形、菱形,之后变为长梭形,细胞开始以漩涡、放射状生长.②P3、P5和P10代细胞表面的分子标记经流式细胞术检测发现,均表达CD105、CD90和CD73,却不表达HLA-DR、CD19、CD11b、CD45以及CD34.③诱导至第360分钟后,实验组各组细胞均有神经样细胞出现,表现为细胞胞体收缩成椭圆形,伸出较长突起,以双极细胞居多.免疫细胞化学检测显示实验组各组NF-H、MAP-2表达阳性,胶质纤维酸性蛋白GFAP表达为阴性,C组(150μg/mL)细胞NF-H、MAP-2阳性表达率高.对照组细胞诱导前后变化不明显.结论 GM1可以诱人脐带间充质干细胞向神经样细胞分化,150μg/mL为合适诱导剂量.
关键词： 单唾液酸四己糖神经节苷脂 人脐带间充质干细胞 诱导分化 神经样细胞 -
bFGF和EGF诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成神经样细胞
目的 探讨bFGF和EGF诱导大鼠BMSCs成神经分化潜能及其表型变化.方法 全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,流式细胞仪检测P3代细胞表面标志物CD90、CD45.P3代细胞分为1)对照组(1％胎牛血清+DMEM/F-12),2)EGF组(20 ng/mL EGF),3)bFGF组(20 ng/mL bFGF),4)EGF +bFGF组(20 ng/mL EGF+ 20 ng/mL bFGF)进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态,Western blot检测细胞内NSE及GFAP蛋白的表达,RT-PCR检测其mRNA.结果 BMSCs呈长梭形或扁平形,漩涡样排列,CD90表达高达98.72％,而CD45仅1.05％；诱导后胞体收缩,折光性增强,呈双极甚至复杂的多极,向周围伸出明显突起,呈典型的神经样细胞；NSE、GFAP蛋白EGF组、bFGF组、EGF +bFGF组表达均高于对照组,bFGF组、EGF+ bFGF组高于EGF组,且EGF+ bFGF组高于bFGF组,EGF组高于对照组(P＜0.05)；mRNA变化与上述结果类似.结论 bFGF和EGF可促进大鼠BMSCs向神经分化,二者合用时效果显著,且bFGF促BMSCs向神经分化的能力强于EGF.为BMSCs移植治疗周围神经疾患提供了理论依据.
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SD大鼠羊水间充质干细胞向神经样细胞体外诱导分化
目的:探讨体外诱导羊水间充质干细胞(AF-MSCs)分化成神经干细胞.方法:10只SD怀孕大鼠,180-240 g,胎龄16d,过量腹腔麻醉致死,开腹全部切除子宫,在无菌的条件下抽取全羊水,采用贴壁法分离AF-MSCs,体外培养扩增,观察细胞生长特性,流式细胞仪检测AF-MSCs表面抗原表达及细胞周期.取第3代AF-MSCs,加入预诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、1 mmol/Lβ-MEM)诱导24 h,然后加入诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、5 mmol/L β-MEM)诱导24 h,后在分化维持培养液(DMEM/F12、20μg/L EGF、20μg/L bFGF)中培养,行免疫荧光染色,检测NSE和GFAP的表达.结果:成功分离、培养和传代SD大鼠AF-MSCs,流式细胞术检测提示大鼠AF-MSCs的G0/G1期细胞比例约为87.5%、S+G2+M期比例为12.5%,表达CD44为98.3%、GD29为70%、和CD105为33.2%、不表达CD45为0.5%,CD34为1%,DLA-DR(MHC class Ⅱ)为0.1%.诱导后,AF-MSCs能表达神经细胞标示物NSE和GFAP,且可在体外继续存活2 wk左右.结论:羊水中也存在MSCs,与其他来源的MSCs特点相符:羊水可以作为一种新的胎儿MSCs来源,而且能在体外诱导分化为神经细胞.
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体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经样细胞的实验研究
目的探讨在体外诱导骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经样细胞的可行性.方法采用Percoll(1.077g/L)离心分离MSCs,然后进行培养,以流式细胞仪进行荧光三标检测,并用免疫细胞化学法鉴定经β-巯基乙醇(BME)、二甲亚砜(DMSO)、丁羟茴醚(BHA)诱导分化的细胞是否为神经样细胞.结果分离后的MSCs在生长因子的作用下出现增殖性生长,经流式细胞仪检测显示CD90和CD106阳性、CD45阴性,经诱导后MSCs分化的细胞经免疫细胞化学证实巢蛋白(nestin)、神经元特异性核蛋白(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、2-3-环核苷酸磷酸二脂酶(CNP)阳性.结论MSCs经诱导可分化为神经样细胞.
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关键词：
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中药诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的研究进展
骨髓间充质干细胞是骨髓内的另一种干细胞，具有很强的增殖能力和可塑性，在体外能跨胚层分化，可定向分化为神经样细胞。与胚胎干细胞和神经干细胞相比，具有取材方便，回植后不发生免疫排斥，易被外源基因转染并能高效、稳定表达多种治疗性外源基因等多种优势，将为神经系统疾病的治疗提供崭新的思路，本文对近年来中药诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的研究进展作一综述。
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骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化的影响因素
骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有干细胞的一般特性,主要存在于骨髓基质中,具有横向分化潜能,可以向3个胚层细胞进行分化.近年来,许多学者通过实验研究BMSCs在体外诱导分化为神经样细胞的机制.体外培养、扩增BMSCs分别采用化学诱导剂或生物诱导剂可诱导BMSCs分化神经样细胞,并表达神经元标志物.本文就对BMSCs向神经样细胞诱导分化的影响因素予以综述.
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人脐带间充质干细胞的生物学特性及向神经样细胞分化的研究
目的 探究人脐带间充质干细胞具有的生物学特性,并对其向神经样细胞的分化进行研究.方法检测人脐带间充质干细胞细胞表面的标记;以β巯基乙醇与丹参诱导其向神经细胞分化,并为分化细胞与未分化细胞进行免疫细胞化学鉴定.此外,半定量RT-PCR检测细胞神经相关基因表达.结果分离自人脐带的贴壁细胞在体外可以生长成类似成纤维细胞的形态,在未分化状态下可以维持稳定增殖形态,且体外增殖远超10代,这类细胞表面标记CD105、CD59、CD44、CD29有较高的表达,而造血细胞的表面标记CD117、CD45、CD34、CD33、CD28、CD14则无表达或低表达,而与其相同表达的还有移植免疫排斥相关的表面标记,如CD86、CD80、CD40.经诱导分化的细胞表达神经元标记β-Ⅲ类神经微管和神经微丝、神经干细胞标记巢蛋白、神经胶质细胞标记的胶质纤维酸性蛋白.经过RT-PCR检测可知,经丹参诱导后的间充质干细胞表达神经干细胞的相关基因Neatin,而诱导前后间充质干细胞全部表达神经细胞基因Pleiotrophin并且在诱导后表达增强.结论人脐带间充质干细胞具有易于培养扩增的生物学特性,其表达间充质干细胞的表面标记,低或不表达造血细胞、与移植排斥有关的细胞标记.同时,其可以分化为神经样细胞并表达神经细胞的基因与相关标记,这种细胞可以作为肝细胞的一个来源,用于中枢神经系统细胞的移植.
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NT-3在骨髓间充质干细胞诱导神经分化的应用研究
骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）是成体干细胞中的一种，是存在于骨髓中的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞群体，BMSCs具有来源丰富，扩增简单，不受伦理限制的特点，且近年来很多研究表明BMSCs可分化为神经样细胞，使其成为治疗神经系统疾病的种子细胞［1－3］。然而，目前BMSCs移植分化率低下成为其治疗神经系统疾病大的技术难题。神经营养因子-3（ neurotrophin-3， NT-3）是神经营养因子超家族成员之一，其生理功能广泛，可在体或离体调节周围神经系统和中枢神经系统的神经元形态、维持发育中的神经元的存活、促进其分化与增殖、诱导轴突生长和促进损伤神经元修复等［4－5］。近年来应用分子生物学技术将NT-3基因导入BMSCs，通过体内及体外实验探讨NT-3对BMSCs神经分化的影响成为研究的热点。
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川芎嗪联合创伤性脑组织匀浆液诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化
背景:川芎嗪和创伤性脑组织匀浆液均可诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化.目的:探讨川芎嗪与创伤性脑组织匀浆液诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的联合效应.方法:分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞后分为4组,加入不同的诱导培养基分别干预:空白对照组、川芎嗪诱导组、创伤性脑匀浆液诱导组和川芎嗪联合创伤性脑匀浆液诱导组.诱导后采用倒差显微镜观察细胞形态变化,并统计不同时段四组细胞分化率.分别取部分细胞进行神经元特异性烯醇化酶染色,胶质纤维酸性蛋白免疫细胞化学与免疫荧光细胞化学双标检测.结果与结论:川芎嗪及受损大鼠脑匀浆液上清液可诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,随诱导时间的延长,诱导分化率越高,具有较重要的应用价值,而神经元特异性烯醇化酶与胶质纤维酸性蛋白在其分化信号中起重要作用.
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脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子单独或联合体外诱导人脐带血来源的间充质干细胞向神经样细胞分化
背景:体外培养条件下脐血间充质干细胞可向神经样细胞诱导分化.一定浓度范围的脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子联合体外诱导可获得较高的神经元分化比例.目的:观察脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子单独或联合体外诱导人脐带血来源的间充质干细胞分化成神经样细胞的可行性.方法:取第5代的脐血间充质干细胞,分别用5,10,20 μJ/L的脑源性神经营养因子和5,10,20 μg/L.睫状神经营养因子单独或联合诱导脐血源间充质干细胞向神经样细胞分化,另设空白对照组无任何干预措施.倒置相差显微镜观察细胞形态变化,于实验第1,3,6天分别进行神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色,并计数分化为神经元样细胞及神经胶质细胞的比例.结果与结论:①向神经细胞诱导后,人脐血源间充质干细胞形态明显改变,胞体收缩,胞核部分折光性增强,出现类似于树突及轴突样结构.②与空白对照组相比,脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子能显著提高人脐血源间充质干细胞分化为神经元的比例.其中20 μg/L.的脑源性神经营养因子联合20 μg/t.睫状神经营养因子诱导人脐血源间充质干细胞分化为神经样细胞的比例高.提示人脐血间充质干细胞经脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子体外诱导,均能够分化为神经样细胞.
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Jagged1蛋白在肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中的表达差异
目的 Jagged1蛋白在大鼠肌源性干细胞(MDSCs)体外增殖分化为神经样细胞过程中的表达差异研究.方法大鼠乳鼠骨骼肌消化后体外培养增殖,第5代传代后细胞分为2组:对照组完全培养基培养,诱导组加入诱导剂诱导.6 d后观察2组细胞的形态变化,并进行NSE免疫细胞化学鉴定.然后通过免疫荧光观察Jagged1蛋白的表达差异.结果诱导组细胞NSE染色阳性,免疫荧光结果显示对照组Jagged1蛋白表达阳性,实验组基本不表达.结论大鼠肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中Jagged1蛋白表达存在明显差异.
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川芎嗪联合脑源性神经营养因子诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化
目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)、川芎嗪定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经样细胞的潜能.方法 分离并培养大鼠股骨的BMSCs,细胞分4组进行药物诱导,对照组、BDNF组、川芎嗪组及BDNF联合川芎嗪组.诱导过程中用倒置显微镜观察细胞的形态变化,并应用实时荧光定量PCR技术和免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞内巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)mRNA和蛋白表达量的变化.结果 川芎嗪联合BDNF组诱导BMSCs向神经细胞分化的效率明显高于其他诱导组.结论 川芎嗪联合BDNF可以明显提高BMSCs向神经细胞分化的效率和存活率.
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脑组织匀浆诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞
目的 模拟体内微环境,研究人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)在脑组织匀浆诱导下向神经样细胞的分化程度.方法 体外分离、培养、扩增hUCMSCs,流式细胞仪鉴定其表面抗原CD29、CD44、CD45、CD105、CD34、HLA-DR；制备大鼠脑组织匀浆与hUCMSCs共培养,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,并应用免疫细胞化学技术检测共培养3d后细胞内神经干细胞表面标志物巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 脑组织匀浆培养hUCMSCs后,细胞表达nestin、NSE及GFAP,而正常培养的hUCMSCs不表达.结论 脑组织匀浆可以诱导hUCMSCs向神经样细胞分化.
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以羊膜为载体应用β-巯基乙醇诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的分离、培养与鉴定
目的;以羊膜为载体应用β-巯基乙醇诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化成为神经样细胞,探讨组织工程化的神经细胞的构建.方法:分离、培养大鼠BMSCs,应用流式细胞仪进行细胞表面标志物检测及鉴定.以人羊膜基质为载体负载大鼠BMSCs,用β-巯基乙醇将其诱导定向分化成神经样细胞.应用免疫组织化学方法检测神经上皮干细胞蛋白nestin、神经元特异性标记物GAP-43的表达.结果:经流式细胞仪检测第3代BMSCs,CD90、CD71、CD29均呈现阳性表达,CD45呈现阴性表达.BMSCs接种羊膜后贴附生长,折光性好.经β-巯基乙醇诱导3 h后,细胞可见突起长出,形态呈典型神经细胞改变,nestin和GAP-43表达阳性,未诱导的细胞呈阴性.结论:以人羊膜基质为载体的大鼠BMSCs经β-巯基乙醇诱导后可以定向分化成神经样细胞,可构建出组织工程化的神经样细胞.
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骨髓间充质干细胞在脊髓损伤模型大鼠体内的转化
目的 观察静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)在脊髓损伤模型大鼠体内向神经样细胞转化的情况.方法 体外扩增培养MSCs,流式细胞仪检测表面标志CD34和CD44的表达;采用击打法制备大鼠脊髓损伤模型;Brdu标记的MSCs经尾静脉移植入脊髓损伤模型大鼠体内,输注后21 d,取脊髓组织进行免疫组化染色,检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达.结果 体外扩增的MSCs经流式细胞仪检测不表达CD34,表达CD44;激光共聚焦显微镜下观察可见,移植Brdu标记的MSCs组在大鼠损伤的脊髓组织中可同时表达Brdu和NSE.结论 移植的MSCs可迁移到损伤的脊髓组织,并可转化为神经样细胞.
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Detla1基因在肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中的表达
目的:研究Detla1基因在大鼠肌源性干细胞体外诱导分化为神经样细胞过程中的表达.方法:大鼠乳鼠骨骼肌体外培养增殖,分为对照组完全培养基培养,实验组加入诱导剂培养.通过RT-PCR、免疫荧光和免疫印迹法观察Detla1基因存诱导组和对照组的表达差异.结果:对照组Detla1基因表达强阳性,实验组基本不表达.结论:大鼠肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中Detla1基因表达减低.
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大鼠乳鼠肌源性干细胞体外诱导分化为神经样细胞
目的:探讨神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导大鼠乳鼠肌源性干细胞(MDSCs)分化为神经样细胞的可行性.方法:取SD大鼠乳鼠骨骼肌,差速贴壁至第5代时培养液中加入诱导培养基培养,行神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学鉴定和RT-PCR分析.结果:分化后细胞NSE染色阳性,RT-PCR结果显示,诱导后MDSCs样品中检测到NSE、GFAP特异性条带.结论:在一定条件下NGF和bFGF联合诱导法可以诱导MDSCs分化为神经样细胞.
关键词： 肌源性干细胞 神经样细胞 碱性成纤维细胞生长因子 神经生长因子
