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我的“羊穿”60天
名词解释:羊膜穿刺(简称“羊穿”)是用于确诊胎儿是否有染色体异常、神经管缺陷以及某些能在羊水中反映出来的遗传性代谢疾病.穿刺时用穿刺针穿过孕妇的腹壁刺入宫腔吸出少许羊水,进行羊水细胞和生物化学方面的检查.产前唐氏综合征筛查(简称“唐筛”):唐氏综合症是一种染色体异常造成的婴儿畸形的疾病,对孕妇进行产前的检查,能查出大部分有唐氏综合征的胎儿,通过终止妊娠来避免畸形儿出生而造成家庭痛苦.让人惶恐的唐筛结果
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1例三倍体胎儿产前筛查和诊断结果分析
1 临床资料某女,G2 P0,年龄30岁,妊娠17+2周时产前血清学筛查:甲胎蛋白(AFP) MOM值为1.31,游离β亚基绒毛膜促性腺激素(β-hCG) MOM值为0.12,游离雌三醇(UE3) MOM值为0.1,结果提示18三体风险1/15.妊娠19周时行外周血胎儿非整倍体无创基因检测,结果:21三体风险1/409 189,18三体风险1/11 333 473,13三体风险1/12 351 577727,均提示低风险.孕19+4周时超声影像检查提示胎儿多发畸形:前全脑;颜面部异常(眼、鼻、上唇、下颌);脊柱裂;右侧足内翻;双肾回声增强,左室强回声点;胎盘成熟度Ⅰ～Ⅱ级.经本院遗传门诊咨询后,接受羊膜腔穿刺术行羊水细胞胎儿染色体诊断,染色体核型为69,XXY,为三倍体综合征胎儿.
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羊水细胞染色体产前诊断264例分析
产前诊断是指诊断胎儿是否患有某种遗传病或先天畸形的一种手段[1].羊水细胞染色体核型分析足产前诊断染色体病的安全有效又经济的方法[2].近年来,本中心通过羊水细胞盖玻片原位培养法对264例胎儿羊水细胞染色体进行产前诊断.
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改良式羊水细胞培养及收获在产前诊断染色体检查中的应用
目的 探讨改良式羊水染色体细胞培养和收获方法的成功率和效率.方法 收集2016年3-4月在本院行羊水染色体检查的标本780例,分部进行传统方法和改良后方法的细胞培养、收获,比较两种方法的质量及效率.结果 传统方法和改良方法的细胞培养成功数均为779例.接种后第7、8、9天,传统方法能够收获的标本数为733例,改良方法的为725例,两者差异无统计学意义;第14天未能收获的标本数,传统方法和改良式方法的均为1例;收获耗时,传统方法为(81 ±6) min/10个标本,改良式方法的为(50 ±4) min/10个标本;收获到适用分裂相数≥20个的标本例数,传统方法的为689例,改良式方法的为779例,两者差异有统计学意义.结论 改良式方法在不影响培养成功率和不延长收获周期的同时,提高了收获的成功率,缩短了耗时,简化了操作流程,值得推广应用.
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SD大鼠羊水间充质干细胞向神经样细胞体外诱导分化
目的:探讨体外诱导羊水间充质干细胞(AF-MSCs)分化成神经干细胞.方法:10只SD怀孕大鼠,180-240 g,胎龄16d,过量腹腔麻醉致死,开腹全部切除子宫,在无菌的条件下抽取全羊水,采用贴壁法分离AF-MSCs,体外培养扩增,观察细胞生长特性,流式细胞仪检测AF-MSCs表面抗原表达及细胞周期.取第3代AF-MSCs,加入预诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、1 mmol/Lβ-MEM)诱导24 h,然后加入诱导液(DMEM/F12、100 mL/L FBS、5 mmol/L β-MEM)诱导24 h,后在分化维持培养液(DMEM/F12、20μg/L EGF、20μg/L bFGF)中培养,行免疫荧光染色,检测NSE和GFAP的表达.结果:成功分离、培养和传代SD大鼠AF-MSCs,流式细胞术检测提示大鼠AF-MSCs的G0/G1期细胞比例约为87.5%、S+G2+M期比例为12.5%,表达CD44为98.3%、GD29为70%、和CD105为33.2%、不表达CD45为0.5%,CD34为1%,DLA-DR(MHC class Ⅱ)为0.1%.诱导后,AF-MSCs能表达神经细胞标示物NSE和GFAP,且可在体外继续存活2 wk左右.结论:羊水中也存在MSCs,与其他来源的MSCs特点相符:羊水可以作为一种新的胎儿MSCs来源,而且能在体外诱导分化为神经细胞.
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荧光原位杂交技术在羊水染色体数量分析中的应用
目的 研究荧光原位杂交技术在快速诊断胎儿染色体数目异常的价值.方法 对248例孕18～24周,具有产前诊断指征者,在B超引导下经腹抽取249例羊水后,应用特异性探针对未经过培养的羊水间期细胞进行荧光原位杂交.结果 共检出染色体数目异常6例,异常率为2.4％.异常类型包括21三体,13三体,XO和嵌合型XO,以及XXX.21三体占全部异常的33.3％.其中,B超畸形提示异常诊断率高,唐氏筛查高风险为指征的诊断异常率次之.孕妇年龄大于35岁组中诊断的染色体数目异常率低于年龄组小于35岁.怀孕次数1次、2次和3次组中分别有3例、1例和2例染色体数目异常胎儿.生产次数分为0次和1次的组别中各有3例异常核型胎儿.结论 FISH技术用于羊水细胞13、18、21、X,Y染色体数目检查时具有快速、准确的特点,可以用于比例高的嵌合细胞的检测.血性羊水细胞可以进行FISH检测.
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常见染色体病的快速产前诊断方法
1前言染色体不分离和结构不平衡在新生儿中的发生率为1/200[1],成为发育缺陷和先天畸形的主要原因.因此,细胞遗传学分析一直被认为是很重要的有创性产前诊断方法.从1966年首次应用孕中期羊水脱落细胞培养或孕早期绒毛采样进行产前检测,到19世纪70年代常规应用染色体显带分析(核型分析)以来,此方法已经成为经典的产前诊断技术[2].核型分析作为一种可靠的方法,可以诊断染色体数目异常及500万至1000万对碱基对的结构重排.羊水细胞核型分析的准确率为99.4％～99.8％,绒毛膜细胞核型分析的准确率为97.5％～99.6％[3].
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临床上利用全基因组测序对常见胎儿非整倍性进行非侵入性产前检查结果进行验证
文章发表在2013年6月的《Gynecoloncol》杂志上。
作者通过5个案例报道临床上利用全基因组测序对常见胎儿非整倍性进行非侵入性产前检查（NIPT）的次要发现。这5个案例分别为：案例1， NIPT发现染色体18p 的巨大的复制，这一结果被羊水细胞CG H 芯片分析结果所支持，终核型分析证实为18p 四体镶嵌性；案例2，NIPT 怀疑母源性的18q近端缺失，被 CGH 芯片检测母亲白细胞DNA证实；案例3，NIPT筛查结果显示21和18三体阴性，但随后常规产检中发现胎儿结构异常，回头深度分析早期NIPT 结果的缺失或重复，结果通过核型分析证实为3 q近端缺失；案例4，NIPT正确预测局限性胎盘嵌合体，包括 X、7、21染色体三体嵌合；案例5，NIPT 正确检测到一种先前不知道的45X母源性嵌合。 -
细菌人工染色体标记-微球鉴别/分离法对1973份羊水的快速产前诊断
目的 探讨细菌人工染色体标记-微球鉴别/分离法(bacterial artificial chromosomes-on-beads,BoBs)在产前诊断中的应用价值.方法 对2015年1月至2016年6月西京医院产前诊断中心1973例有产前诊断指征的孕妇羊水细胞进行BoBs检测和染色体核型分析.结果 1973例羊水中,共发现异常核型150例,其中染色体核型分析检出145例,BoBs检出133例.不同产前诊断指征下,无创DNA产前检测(NIPT)高风险组的染色体异常检出率高,占该指征的81.82％.150例异常核型中,BoBs和核型分析均检出染色体非整倍体124例,占异常核型的82.67％;BoBs检出染色体微缺失/微重复综合征5例,核型分析结果均未见异常;染色体核型分析检出性染色体嵌合7例,BoBs检出4例;染色体核型分析检出结构异常14例,BoBs结果未见异常.结论 BoBs技术可以快速检测染色体非整倍体和基因微缺失/微重复,联合染色体核型、基因芯片(chromosomal microarray analysis,CMA)及荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)可对染色体结构异常和低嵌合正确检出,大大提高了产前诊断的效率与准确性.
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多色探针荧光原位杂交技术用于诊断羊水细胞染色体异常
应用羊水细胞进行产前诊断,已广泛应用于临床.用间期细胞行原位杂交是检测染色体异常的新技术[1].我们应用双色X/Y计数探针,多色X/Y、13、18、21探针荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,对妊娠12～22周孕妇行羊膜腔穿刺抽取羊水细胞,诊断染色体非整倍体和胎儿性别,现将结果报道如下.
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胎儿ABO血型的产前诊断
母儿血型不合中以ABO血型不合多见,常导致早期流产、胎儿贫血、水肿、甚至胎死宫内.为探讨产前诊断胎儿ABO血型的简便、准确、敏感性高、特异强的方法,我们根据B基因、A2基因、O1基因、O2基因与A1核苷酸序列突变位点的不同,设计出相应的特异性引物,用特异性序列-聚合酶链反应法,对2000年3月～2001年9月,在我院产科分娩的56例未破膜孕妇(新生儿、胎儿)及其丈夫[其中足月分娩28例(剖宫产23例,阴道分娩5例),引产28例(死胎9例,妊娠合心脏病2例,肺部恶性肿瘤1例,再生障碍性贫血2例,胎儿畸形8例,妊娠合并糖尿病酮症酸中毒1例,重度妊高征2例,羊膜带综合征1例,胎儿生长受限并巨细胞病毒感染2例)]进行羊水细胞A1、A2、B、O1、O2血型基因型检测.
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不同羊膜腔穿刺适应证患者的染色体异常核型检出情况分析
目的：分析不同羊膜腔穿刺适应证患者的染色体异常核型检出率及其遗传咨询方法。方法选择2009年1月至2013年12月于内蒙古医科大学附属医院行羊膜腔穿刺胎儿染色体检查的523例患者中羊水细胞培养成功的520例患者为研究对象。本研究遵循的程序符合本研究遵循的程序符合内蒙古医科大学附属医院人体试验委员会所制定的伦理学标准，得到该委员会批准，并征得受试对象本人的知情同意，与之签署临床研究知情同意书。分析不同羊膜腔穿刺适应证患者的染色体异常核型检出率。结果520例羊水细胞培养成功的患者中，异常核型检出率为4.42%(23/520)。高龄妊娠患者染色体异常核型发生率为1.45%(3/206)，中孕期母体血清筛查高危患者为3.15%(7/222)，胎儿超声结果异常患者为12.72%(7/55)，夫妇一方系染色体平衡结构异常患者为66.67%(2/3)，无创产前 DNA 检测示高危为80.00%(4/5)，有染色体异常儿生育史患者为0(0/29)。23例检出异常核型胎儿中，染色体非整倍体异常胎儿为19例(82.6%)，染色体结构异常为4例(17.4%)。结论目前羊膜腔穿刺染色体异常核型检出率较低。对胎儿进行超声检查和无创产前 DNA 检测有助于提高羊膜腔穿刺染色体异常核型检出率。
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胎儿染色体异常诊断方法的研究进展
胎儿细胞培养、染色体核型分析是胎儿染色体异常经典的检测方法.诊断的准确性在培养的羊水细胞中可达99.4%～99.8%,绒毛取样(chorionic villus sampling,CVS)培养为97.5%～99.6%.但对小于10 Mb碱基的染色体片段缺失或重复,普通核型难以检出,即使是高分辨染色体核型有时也难作出确切诊断.
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247例妊娠中、晚期羊水细胞产前诊断及异常核型分析
通过分析妊娠中、晚期胎儿羊水细胞染色体核型,了解该时期异常核型出现的频率、类型及与各种产前诊断指征的关系.从247例有产前诊断指征的孕妇,在妊娠13-34周行羊膜腔穿刺取羊水细胞培养,检查胎儿染色体核型.结果显示:羊膜腔穿刺247例,羊水细胞培养成功221例,成功率90%.检出染色体异常13例(5.9%),其中,妊娠中期检出异常4.7%,(9/193);妊娠晚期14.3%(4/28),X2=4.1,P＜0.05.染色体平稳重排(平衡易位,倒位)为主要的异常,占异常核型的46.2%(6/13).三体占异常核型30.8%(4/13).46,XY,女性1例,46,XY/46,XY,t(9;15)1例,46,XX/46,XX,inv(2)1例.高龄孕妇异常检出率为6.3%(2/32),非高龄组为5.8%(11/189),P＞0.05.妊娠晚期羊水过多组异常检出率为10%(2/20),IUGR异常检出率为20%(1/5).可以结论,在有产前诊断指征的孕妇中,胎儿染色体异常的发生率为5.9%,平衡易位、倒位及部份三体为主要的染色体异常,是染色体平衡重排携带者、高龄孕妇、IUGR及羊水过多常见的异常核型.
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荧光原位杂交技术在唐氏综合征筛查中的应用
目的 探讨荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)在唐氏综合征筛查的应用,评价其应用的可行性.方法 采集200名妊娠16～20周孕妇的羊水标本,应用荧光标记21号染色体特殊位点探针(locus-specific probe,LSP)及X/Y染色体着丝粒探针(centromeric probe,CEP)对未培养的细胞进行FISH;同步进行羊水细胞培养,通过染色体核型分析,并以核型分析为金标准,评价FISH技术准确性.结果 FISH分析羊水问期细胞性染色体数量均正常(XX107例,XY93例);200例标本中21号染色体异常者3例,经核型分析为典型的21三联体,取脐血进行G带染色体核型分析得以验证2例为47,XY,+21;1例为47,XX,+21.产前诊断正常者进行产后新生儿外周血染色体检查无异常.结论 荧光原位杂交技术FISH是快速进行产前唐氏综合症筛查的一个简易可靠值得推广的技术.
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羊水细胞及羊水细胞培养的研究
近些年来随着人们对优生优育意识的提高,这对产前诊断工作的要求大大提高了.孕期中羊水细胞培养检查是经典的方法之一.由于过去羊水细胞的培养一直存在技术要求高,容易污染、分裂相对少、成功率低的情况.为了提高了羊水细胞培养的质量,人们进行了大量的探索.本文对这方面的研究进展进行综述.
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胎儿颈项透明层值与羊水细胞染色体核型的关系分析
目的：分析胎儿颈项透明层(NT)值与羊水细胞染色体核型分析的关系。方法对我院孕11~13+6周的1000例孕妇给予超声检查NT值，并对有必要行产前介入性诊断的孕妇给予羊水染色体核型分析。根据超声检查结果分为增厚组(NT≥2.5 mm)和正常组(NT<2.5 mm)，每组各500名患者。计算异常染色体比例及类型。结果增厚组检出异常染色体共97例，正常组无异常染色体者，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论胎儿NT值较高者，其发生羊水细胞染色体核型的异常比例也较高，此研究有助于筛查胎儿染色体的异常情况。
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妊娠中期孕妇羊水细胞检测指征及结果分析
目的 探讨胎儿染色体异常的类型及羊水细胞检测应用于产前诊断的意义.方法 回顾性分析2010年4月至2012年4月于暨南大学附属第一医院产前诊断中心进行产前诊断的650例行羊膜腔穿刺术的高危孕妇的病历资料,了解其检测指征及羊水细胞培养情况,分析羊水细胞核型检测结果.结果 650例高危孕妇中,产前诊断指征分布由高到低依次为:高龄孕妇49.4％(321/650)、血清学筛查21-三体综合征高危42.2％(274/650)、系统超声筛查胎儿结构异常2.9％(19/650)、非整倍体胎儿妊娠史2.2％(14/650)、夫妇一方染色体异常1.7％(11/650)、孕早期服药可能致畸者0.9％ (6/650)、孕早期放射线接触史0.8％(5/650).羊水细胞核型分析共检测出36胎胎儿染色体异常,异常率为5.5％,其中包括28例染色体数目异常和8例染色体结构异常.结论 对于有指征的高危孕妇进行进一步的羊水细胞检测是有临床意义的,随着我国高龄孕妇在产前诊断人群中所占比例增加,羊水细胞检测及合理干预对减少染色体异常胎儿的出生具有重要意义.
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孕中期羊水中细胞研究进展
孕中期羊水中细胞培养和核型鉴定广泛应用于产前诊断领域,可以发现一系列胎儿发育异常.近来,许多研究表明羊水中含有胎儿的干细胞,这些细胞能否应用于干细胞和组织工程学领域成为研究热点.综述了羊水中细胞的组成、来源、生物学特性、干细胞特性及组织工程学应用等方面的内容,并对研究前景进行展望.
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两步法分离和培养人羊水来源胚胎间充质干细胞及其向神经元样细胞诱导分化的实验研究
目的 建立两步培养法分离培养人孕中期羊水间充质干细胞(MSCs)的方法,观察羊水MSCs向神经元样细胞的诱导分化.方法 采用改进的两步培养法分离和培养人羊水MSCs,以β-巯基乙醇诱导其向神经元样细胞方向分化;并使用流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法研究人羊水MSCs的生物学特性.结果 成功分离、培养和传代出人羊水MSCs.流式细胞术检测人羊水MSCs表达CD44、CD29、CD105,不表达CD45、CD34、人白细胞DR抗原(HLA-DR);免疫荧光法和RT-PCR检测表明,部分人羊水MSCs表达转录因子Oct-4.两步培养法羊水MSCs集落形成率[(15.0±2.3)%]和Oct-4阳性细胞率[(1.2±0.3)%]均高于一步法[分别为(10.0±1.8)%,(0.9±0.2)%,P均<0.05].羊水MSCs经β-巯基乙醇诱导后细胞形态发生改变,伸出突起并呈神经球样改变;免疫细胞化学法检测显示(54.76±3.65)%的细胞表达神经元特异性烯醇化酶(NSE),同时(36.28±4.27)%的细胞表达神经胶质酸性蛋白(GFAP).结论 人羊水中存在MSCs,两步培养法是一种高效、简便、实用而且不干扰常规产前诊断程序的方法.在体外条件下,利用β-巯基乙醇和适宜的培养液可使羊水MSCs定向分化为神经元.
