人脐带基质间充质干细胞免疫调节机制及其相关应用的研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是成体干细胞的一种,因其具有自我更新、多向分化潜能、高可塑性、调节免疫应答、易于遗传修饰的特性[1],在细胞治疗及组织工程等领域显示出极大的应用价值.目前,MSC的常见来源有骨髓、胚胎、脂肪、脐带等.一般认为骨髓是MSC的经典来源,而人脐带来源的MSC因其易于获得,获取方法具有非侵袭性及无伦理学问题,故其相关研究进展迅速[ 2].人脐带来源MSC简单可分为脐血来源MSC (human umbilical cord blood MSCs,hUCB- MSC)和脐带MSC (human umbilical cord MSCs,hUC-MSC).hUC-MSC主要来自脐带胶质,也称华尔通胶或沃顿胶(Wharton's jelly),因此hUC-MSC亦常称为hWJ-MSC.

人脐带间充质干细胞对毛细支气管炎大鼠模型免疫调节作用

毛细支气管炎是一种婴幼儿时期以喘息发作为临床表现的疾病，日后易发展为支气管哮喘，有研究表明毛细支气管炎与哮喘有相似的免疫学发病机制。间充质干细胞（ MSC）是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，目前研究多的主要是骨髓来源的间充质干细胞（ BM-MSC ），人脐带来源的间充质干细胞（ hUC-MSC ）更易于制备以及低风险病毒感染，更重要的是hUC-MSC更具有免疫耐受性。本研究对 hUC-MSC对毛细支气管炎大鼠模型免疫调节作用做了初步研究。

人脐带间充质干细胞移植治疗中枢神经系统疾病研究新进展

中枢神经系统损伤后自身修复能力相当有限，目前在治疗中枢神经系统损伤性疾病方面仍仅限于保守治疗，尚无促进神经再生等有效治疗手段，中枢神经系统损伤可以导致脑瘫、精神发育迟滞、学习障碍和癫痫等一系列后遗症。因此，寻找一种特效的治疗手段，为神经系统损伤性疾病提供一条崭新的治疗途径，刻不容缓。近年来应用干细胞移植修复神经损伤越来越受到广泛重视，继骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）后，人脐带间充质干细胞（human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells，hUC-MSCs）成了研究热点。hUC-MSCs具有来源丰富、取材无创、低免疫原性、无伦理争议、尤其可以变废为宝等独特的优势，其在干细胞移植治疗中枢神经系统疾病领域必将展现广阔的前景。以往有关于骨髓来源和脐血来源的间充质干细胞的报道甚多，而报道hUC-MSCs甚少，故有必要就hUC-MSCs的生物学特性及其近年来相关的基因治疗，尤其在中枢神经系统疾病保护方面的相关研究报道作一综述。

人脐带血干细胞移植挽救小鼠缺血心肌并改善心脏功能

来源于人脐带华通胶间充质干细胞的研究进展

临床工作中遇到各种原因所致的组织损伤和缺损，损伤后的组织及时修复及功能重建对病人术后的生存质量起着决定性的意义，往往用自体组织移植修复同时会造成新的组织损伤，并且自体组织由于技术应用和供区选择等原因的限制，常常不能满足组织损伤修复的临床的需要。如何利用组织工程学技术获得组织移植成为医学领域重大研究课题。成体干细胞的研究正在兴起，广泛应用于组织修复和再生研究等多个领域。本文就脐带华通胶间充质干细胞（WJMSC）研究进展及应用前景作一综述。

脐带血间质干细胞生物学特性研究

本文旨在探讨从人脐带静脉血是否可分离出基质干细胞,如果可以,确定它们的特性,方法是采用不支持造血干细胞生长的培养基培养脐血单个核细胞,对其生物学特性进行研究.1 资料与方法1.1 12份脐血采至厦门市中山医院,每份30～60 ml.1.2 基质细胞的分离与培养经新生儿父母同意,于厦门市中山医院采集正常足月新生儿脐带血12份,用L-DMEM培养液悬浮制备好的细胞,接种于25 cm2培养瓶中培养.细胞达到70%汇合时进行传代.

人脐带间充质干细胞的生物学特性及向神经样细胞分化的研究

目的 探究人脐带间充质干细胞具有的生物学特性,并对其向神经样细胞的分化进行研究.方法检测人脐带间充质干细胞细胞表面的标记;以β巯基乙醇与丹参诱导其向神经细胞分化,并为分化细胞与未分化细胞进行免疫细胞化学鉴定.此外,半定量RT-PCR检测细胞神经相关基因表达.结果分离自人脐带的贴壁细胞在体外可以生长成类似成纤维细胞的形态,在未分化状态下可以维持稳定增殖形态,且体外增殖远超10代,这类细胞表面标记CD105、CD59、CD44、CD29有较高的表达,而造血细胞的表面标记CD117、CD45、CD34、CD33、CD28、CD14则无表达或低表达,而与其相同表达的还有移植免疫排斥相关的表面标记,如CD86、CD80、CD40.经诱导分化的细胞表达神经元标记β-Ⅲ类神经微管和神经微丝、神经干细胞标记巢蛋白、神经胶质细胞标记的胶质纤维酸性蛋白.经过RT-PCR检测可知,经丹参诱导后的间充质干细胞表达神经干细胞的相关基因Neatin,而诱导前后间充质干细胞全部表达神经细胞基因Pleiotrophin并且在诱导后表达增强.结论人脐带间充质干细胞具有易于培养扩增的生物学特性,其表达间充质干细胞的表面标记,低或不表达造血细胞、与移植排斥有关的细胞标记.同时,其可以分化为神经样细胞并表达神经细胞的基因与相关标记,这种细胞可以作为肝细胞的一个来源,用于中枢神经系统细胞的移植.

玻璃酸在眼科药物中的应用与研究进展

玻璃酸及其盐(hyaluronan,HA)是1943年首先在眼玻璃体中发现得到并由此而命名的.Balazs等于1971年分别从人脐带和雄鸡鸡冠内提取纯化得到的HA组分,作为眼科手术黏弹性辅助剂应用于临床,在眼科界形成了黏性手术.HA除了作为主要成分配制成滴眼液治疗眼干燥症外,还作为眼用制剂的媒介(vehicle)而广泛应用于眼用制剂中.有学者对HA在眼科中的应用与研究进展作过介绍[1].现作一概述.

组织块培养的人脐带源性间充质干细胞的生物学特性

背景:间充质干细胞主要来源于骨髓,但骨髓源性间充质干细胞存在病毒污染的可能,且随年龄增长其细胞数量和扩增分化能力会出现明显下降,因此需要寻找新的间充质干细胞来源.目的:拟采用组织块培养法从人脐带中分离间充质干细胞,并观察其生物学特性.设计、时间及地点:观察性实验,于2007-03/2008-05在吉林大学白求恩医学院组胚教研室完成.材料:脐带来自正常足月产健康婴儿,产妇及家属均知情同意.方法:采用组织块法分离培养和扩增间充质干细胞:将脐带剪碎至1 mm×1 mm×1 mm大小组织块,置于培养瓶中,并在组织块表面覆盖载玻片防止其漂浮,加入含体积分数为0.10胎牛血清的DMEM/F12培养液培养.细胞贴壁后,每隔三四天更换培养基,待细胞出现集落生长达60%以上汇合后,弃组织块,消化后,按1:2～1:3的比例传代.取第7代细胞在含地塞米松、抗坏血酸、β-磷酸甘油、含体积分数为0.10胎牛血清的DMEM/F12培养液与含体积分数为0.10胎牛血清、地塞米松、胰岛素、吲哚美辛、1-甲基-3-异丁基一黄嘌呤、抗坏血酸、青霉素和链霉素的DMEM/F12培养液中诱导其成骨及成脂分化.主要观察指标;光、电镜观察获得的人脐带源性间充质干细胞形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期、免疫表型,碱性磷酸酶染色及油红0染色鉴定细胞分化能力.结果:组织块贴壁后1周可见多数呈长梭形或扁平形的成纤维样细胞,2周后,细胞形态变为均一的纺锤形.透射电镜观察第5代和第7代细胞均为幼稚形态的细胞,细胞膜表面不光滑,核大,不规则,核仁明显,常染色质多,异染色质少,胞浆少,胞浆内可见较多游离核糖体,此外还可见粗面内质网和线粒体.流式细胞术分折细胞周期显示,第3,5,7代70%以上的细胞处于Go/G1期;第3,5,7代细胞均强烈表达CD105、CD90、CD44,不表达CD34、CD31、CD45.第7代细胞在体外可定向诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞.结论:采用组织块培养法可从人脐带中分离出具有间充质干细胞特性的细胞.

人脐带Wharton's jelly源间充质干细胞培养中碱性成纤维细胞生长因子的作用

背景;培养脐带源间充质干细胞过程中,细胞形态常易变得宽大不规则,传代不易贴壁,死亡率高,找到一个维持细胞稳定的方法是有必要的.目的:拟采用组织块培养法从人脐带Wharton'sjelly中分离培养问充质干细胞,观察碱性成纤维细胞生长因子对其生物学特性的影响.方法:采用组织块法分离培养和扩增脐带组织间充质于细胞,对照组用DMEM/F12培养基+体积分数为10%胎牛血清培养,实验组用DMEM/F12培养基+体积分数为10%胎牛血清+20 pg/L碱性成纤维细胞牛长因子培养.观察组织块游出细胞的时间和细胞形态,每隔3 d或4 d更抉培养液,待细胞达到80%～90%融合时,用0.25%胰酶消化后,按1:2或1:3的比例传代.结果与结论:倒置显微镜下观察对照组中从8～10 d开始有细胞从组织块四周游出贴壁,实验组中从6～8 d开始有细胞从组织块四周游出贴壁.1周后可见多数呈长梭形或扁平形的成纤维样细胞,围绕组织块成旋涡状,前3代细胞形态及传代间隔时间两组基本相同; 3代以后实验组细胞较对照组易于贴壁,传代死亡率低,生长曲线提示增殖能力强.流式细胞术分析两组细胞周期显示第3,6代70%以上的细胞处于G0/G1期,且第3,6代细胞均阳性表达CD29,CD44,弱表达HLA-ABC,不表达CD34、CD45和HLA-DR.结果提示采用组织块培养法可从人脐带Wharton'sjelly中分离出具有间充质干细胞特性的细胞,且碱性成纤维细胞生长因子能使细胞从组织块游出时间提前和有助于促使细胞贴壁,一定程度上维持细胞形态稳定性,提高增值能力,并且不改变细胞的表面标志物表达.

人脐带来源间充质干细胞移植急性阿尔茨海默病模型小鼠引发的免疫应答反应

背景:阿尔茨海默病患者的外周血和脑脊液中相应细胞因子浓度较正常人相比有明显的改变,加强了阿尔茨海默病伴随着免疫应答的结论,提示炎性应答可能参与了阿尔茨海默病神经改变的级联反应.目的:探讨人脐带间充质干细胞在急性阿尔茨海默病小鼠模型中引发的免疫应答反应与外周血中各细胞因子水平的关系.方法:取第5代人脐带间充质干细胞,调整细胞浓度为1×109 L-1待用.C57小鼠随机分为4组,间充质干细胞组侧脑室注射β-淀粉样蛋白1～42,尾静脉注射1 mL人脐带间充质干细胞;模型组侧脑室注射β-淀粉样蛋白1～42,尾静脉注射等体积生理盐水;生理盐水组不造模,尾静脉给予等体积的生理盐水;正常组不造模,不给予任何干预措施.结果与结论:与正常组相比,模型组小鼠在Morris水迷宫实验中逃避潜伏期延长、第一次穿环时间增加而穿环次数减少,间充质干细胞组小鼠逃避潜伏期有所减少,第一次穿环时间减少,穿环次数有所提高,但改善情况较模型组比较不明显.与正常组小鼠相比,模型组在造模后4 d出现N-乙酰天冬氨酸降低,肌醇升高,造模后7 d外周血炎性因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平升高,白细胞介素10水平升高不明显;与模型组相比,注射脐带间充质干细胞7 d后外周血各炎性因子水平有所降低.结果表明人脐带间充质干细胞治疗阿尔茨海默病可能是通过调节免疫应答的途径来实现的.

体外诱导人脐带间充质干细胞分化为许旺细胞

背景:人脐带Wharton's Jelly源间充质干细胞避免了伦理的限制,来源丰富,可以作为种子细胞进行组织修复.目的:观察体外诱导脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞向许旺细胞分化的可行性.方法:分离、培养脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞,流式细胞术鉴定细胞表面标志.利用神经细胞培养基、碱性成纤维生长因子、表皮生长因子、维甲酸、血小板源性生长因子等采用两步法将脐带间充质干细胞诱导分化为许旺细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化.利用免疫细胞化学染色法检测巢蛋白、S-100、纤维酸性蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应、免疫印记技术检测许旺细胞特异性蛋白产物表达.结果与结论:脐带细胞培养第7天形态发生变化,部分细胞变成梭形.原代细胞培养10 d左右可达80%～90%融合,细胞呈梭形.分离培养的细胞表达具有间充质干细胞表面特有标志:CD44(91.4%),CD29(91.3%),CD105(99.2%),不表达CD34(0.2%),CD45(0.9%),CD14(0.6%).脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞经第一阶段诱导后,细胞由短梭形变成长梭形或纺锤形,并出现聚集现象,由形状规则、表面圆滑的球形细胞团形成.第二阶段诱导后,有长梭形细胞从球形细胞团爬出,96 h后细胞形态多为长梭形,伴有多极现象.免疫细胞化学染色结果示:长梭形多极细胞具有许旺细胞特异的纤维酸性蛋白、S100蛋白染色.结果表明脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞可在体外诱导分化为许旺细胞.

人脐带透明质酸制备工艺

透明质酸(hyaluronic acid,HA)是人体必需的一种直链高分子物质,是一种粘性多糖,目前对于HA的研究从分布、生理作用、化学结构、理化性质以及在医疗和化妆品方面的应用均有许多报道,制备工艺多采用提取法和微生物发酵法.本文以人脐带为原料对以前的提取法进行了改进,降低了生产成本,缩短了生产周期,并且提高了成品收率及纯度.

脐带间充质干细胞的生物学特性及其临床应用

脐带来源的间充质干细胞( Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UC-MSCs)有可能成为具临床应用前景的多能干细胞.UC-MSCs表达多种胚胎干细胞的特有分子标志,具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、无道德伦理问题的限制、易于工业化制备等特征,能够成为骨髓间充质干细胞的理想替代物,而且具有更大的应用潜能[1].

妊娠高血压综合征脐带血管内皮细胞损伤与粘附因子的关系

妊娠高血压综合征(妊高征)的病因学随着医学基础研究的深入不断取得新的进展,其重要的病理生理变化是全身小动脉痉挛性收缩和继发性损伤,继而造成血管内水分丢失(水肿)、蛋白外漏(蛋白尿)和血管张力增高(高血压)[1].目前普通认为内皮损伤是妊高征发病的中心环节[2],但这一损伤过程是如何发生的至今仍未阐明.本实验测定了妊高征病人和正常妊娠妇女血清作用于内皮细胞时粘附因子的表达,探讨妊高征病人脐带血管内皮细胞损伤与粘附因子的关系.

透明质酸在骨科领域的应用

透明质酸(haluronic acid,HA),又名玻璃酸,是一种酸性粘多糖,广泛存在于脊椎动物的各种组织细胞间质中,如皮肤、脐带、关节滑液、软骨、眼玻璃体、卵细胞,血管壁等,其中以人脐带、关节滑液和眼玻璃体内含量较高.起初人们认为HA仅为一种大分子黏弹性物质,并没有明显的生理活性.

人脐带间充质干细胞在妇科疾病中的研究进展

人脐带间充质干细胞( hUCMSCs)是来源于中胚层的一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的干细胞。与其他来源的间充质干细胞( MSCs)相比,hUCMSCs具有来源丰富、低免疫原性、对捐献者无损害及不涉及伦理问题等优势,因此hUCMSCs在细胞治疗和再生医学的临床应用方面拥有广阔的前景。近年研究表明,hUCMSCs可能为妇科疾病治疗提供新的思路。

人脐带间充质干细胞对大鼠子宫内膜异位症病灶神经纤维的影响

目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对大鼠子宫内膜异位症(EMs)病灶神经纤维的影响.方法 hUC-MSCs从人新鲜脐带组织中分离和培养,并经过流式细胞仪鉴定.将体质量180 ～ 210 g成年雌性Wistar大鼠,通过手术成功被诱导为EMs模型.将模型鼠随机分为治疗组和对照组,各12只.2周后治疗组接受含有hUC-MSCs的生理盐水尾静脉注射两周,1次/周,对照组接受相同体积和次数的生理盐水注射.4周后子宫内膜异位病灶被收集.标本被切片和用抗神经丝蛋白(NF)和神经生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体进行免疫组化.结果 与对照组相比,治疗组的NF平均光密度值明显低于对照组(P＜0.01)；GAP-43的平均光密度值与对照组相比也明显降低(P＜0.01).结论 hUC-MSCs能够降低EMs病灶的神经纤维密度值.

人脐带间充质干细胞、人脐带间充质干细胞源男性生殖细胞样细胞的免疫学特性

目的 研究人脐带间充质干细胞(huMSCs)及其诱导分化为男性牛殖细胞样细胞后的免疫学特性,为进一步研究huMSCs的移植特性提供实验依据.方法 分离培养huMSCs,在男性生殖细胞培养条件下定向诱导其分化为huMSCs源男性生殖细胞样细胞.采用FACScan流式细胞仪检测诱导前后huMSCs表面抗原CD<,40>、CD<,40>L、CD<,80>、CD<,86>.半定量反转录(RT)-PCR检测诱导前后huMSCs的人类白细胞抗原(HIA)-Ⅰ、HLA-DR基因表达水平.采用CCK-8法检测诱导前后的不同数量级huMSCs对混合淋巴细胞反应体系中经植物血凝素(PHA)激活的同种异体外周血淋巴细胞(PBMC)增殖的影响.采用酶联免疫吸附试验榆测诱导前后huMSCs对经PHA活化的T细胞分泌干扰索-γ(IFN-γ)的影响.结果 HuMSCs在男性牛殖细胞培养条件下能分化为男性生殖细胞样细胞,诱导前后的huMSCs均表达HLA-Ⅰ,不表达CD<,40>、CD<,40>L、CD<,80>、CD<,86>和HLA-DR.huMSCs能抑制经PHA激活的T淋巴细胞增殖,并抑制T淋巴细胞IFN-γ的分泌,但huMSCs源男性生殖细胞样细胞并不能抑制经PHA激活的T淋巴细胞增殖及IFN-γ的分泌.结论 HuMSCs在体外定向诱导为男性生殖细胞样细胞后,诱导后的细胞与huMSCsz一样具有低免疫源性,同时huMSCs在体外具有免疫抑制性,但诱导获得的huMSCs源男性生殖细胞样细胞不能抑制T细胞的增殖.

经囊膜悬吊顺序还纳脏器治疗巨型脐膨出

先天性脐膨出是指腹壁的发育缺损,腹腔内脏通过脐部缺损突人脐带基底部,外面覆盖一层囊膜.巨型脐膨出是指脐周腹壁缺损直径超过6 cm的脐膨出,除肠道外,伴有实质性脏器或膀胱脱出体外,尤其是肝脏的疝出是本型的标志.由于腹壁缺损大,并发畸形多,对于巨大脐膨出的治疗方案,目前还有很多争议.如何提高巨大脐膨出的治愈率仍是小儿外科医师面对的难题.我们尝试使用经囊膜悬吊顺序还纳治疗巨型脐膨出,取得满意疗效.