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人类脐带Wharton's jelly来源的基质细胞
人类脐带Wharton's jelly来源的基质细胞具有干细胞潜能.它们和骨髓来源的间充质干细胞表达一些共有的表面标志物,具有较高的分化率和自我再生能力,能分化成神经细胞、心肌细胞、内皮细胞、脂肪细胞、软骨细胞及成骨细胞.许多实验表明,人类脐带Wharton's jelly来源的基质细胞在再生治疗方面有广阔的应用前景.对其分离和培养的方法及其体外分化和体内外移植实验做一简明综述.
关键词： 人类脐带 基质细胞 Wharton's jelly -
人脐带Wharton's jelly源间充质干细胞培养中碱性成纤维细胞生长因子的作用
背景;培养脐带源间充质干细胞过程中,细胞形态常易变得宽大不规则,传代不易贴壁,死亡率高,找到一个维持细胞稳定的方法是有必要的.目的:拟采用组织块培养法从人脐带Wharton'sjelly中分离培养问充质干细胞,观察碱性成纤维细胞生长因子对其生物学特性的影响.方法:采用组织块法分离培养和扩增脐带组织间充质于细胞,对照组用DMEM/F12培养基+体积分数为10%胎牛血清培养,实验组用DMEM/F12培养基+体积分数为10%胎牛血清+20 pg/L碱性成纤维细胞牛长因子培养.观察组织块游出细胞的时间和细胞形态,每隔3 d或4 d更抉培养液,待细胞达到80%～90%融合时,用0.25%胰酶消化后,按1:2或1:3的比例传代.结果与结论:倒置显微镜下观察对照组中从8～10 d开始有细胞从组织块四周游出贴壁,实验组中从6～8 d开始有细胞从组织块四周游出贴壁.1周后可见多数呈长梭形或扁平形的成纤维样细胞,围绕组织块成旋涡状,前3代细胞形态及传代间隔时间两组基本相同; 3代以后实验组细胞较对照组易于贴壁,传代死亡率低,生长曲线提示增殖能力强.流式细胞术分析两组细胞周期显示第3,6代70%以上的细胞处于G0/G1期,且第3,6代细胞均阳性表达CD29,CD44,弱表达HLA-ABC,不表达CD34、CD45和HLA-DR.结果提示采用组织块培养法可从人脐带Wharton'sjelly中分离出具有间充质干细胞特性的细胞,且碱性成纤维细胞生长因子能使细胞从组织块游出时间提前和有助于促使细胞贴壁,一定程度上维持细胞形态稳定性,提高增值能力,并且不改变细胞的表面标志物表达.
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脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞的生物学特性
背景:脐带Wharton's Jelly中的间充质干细胞免疫原性低,增殖能力优于骨髓间充质干细胞,受到广泛关注.目的:分离、培养人脐带Wharton's Jelly中的间充质干细胞,并观测其生物学特性.方法:利用组织块培养法分离培养脐带Wharton's Jelly中的间充质干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法测定细胞倍增时间,流式细胞仪检测细胞免疫表型.结果与结论:组织块培养第2天时,开始有细胞从组织块爬出;第7天细胞形态开始发生变化,部分细胞呈梭形.传至第3代的细胞形态均一,呈梭形或成纤维形.传至第7代、第10代的细胞形态无明显变化,仍呈梭形.MTT结果示细胞的倍增时间为三四天,传至10代后细胞倍增时间无明显差别.分离培养的脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞表达CD44、CD29、CD105,不表达CD34、CD45、CD14.
关键词： 脐带 Wharton's jelly 间充质干细胞 生物学特性 细胞表型 -
体外诱导人脐带间充质干细胞分化为许旺细胞
背景:人脐带Wharton's Jelly源间充质干细胞避免了伦理的限制,来源丰富,可以作为种子细胞进行组织修复.目的:观察体外诱导脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞向许旺细胞分化的可行性.方法:分离、培养脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞,流式细胞术鉴定细胞表面标志.利用神经细胞培养基、碱性成纤维生长因子、表皮生长因子、维甲酸、血小板源性生长因子等采用两步法将脐带间充质干细胞诱导分化为许旺细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化.利用免疫细胞化学染色法检测巢蛋白、S-100、纤维酸性蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应、免疫印记技术检测许旺细胞特异性蛋白产物表达.结果与结论:脐带细胞培养第7天形态发生变化,部分细胞变成梭形.原代细胞培养10 d左右可达80%～90%融合,细胞呈梭形.分离培养的细胞表达具有间充质干细胞表面特有标志:CD44(91.4%),CD29(91.3%),CD105(99.2%),不表达CD34(0.2%),CD45(0.9%),CD14(0.6%).脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞经第一阶段诱导后,细胞由短梭形变成长梭形或纺锤形,并出现聚集现象,由形状规则、表面圆滑的球形细胞团形成.第二阶段诱导后,有长梭形细胞从球形细胞团爬出,96 h后细胞形态多为长梭形,伴有多极现象.免疫细胞化学染色结果示:长梭形多极细胞具有许旺细胞特异的纤维酸性蛋白、S100蛋白染色.结果表明脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞可在体外诱导分化为许旺细胞.
关键词： 人脐带 Wharton's jelly 间充质干细胞 许旺细胞 诱导分化 -
一种分离培养人脐带Wharton's jelly间充质干细胞的新方法
目的 探讨一种分离培养人脐带Wharton's jelly间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的新方法.方法 取人脐带组织,除去动静脉后剪碎成2～5 mm3,将组织碎片浸入4 g/L Ⅰ型胶原酶和1 g/L透明质酸酶的混合液中,于37℃处理1h,再用0.25％胰蛋白酶在相同条件下消化30 min,得到的消化液经70 μm细胞滤网过滤后,制备单个细胞悬液,培养并传代.取P1、P3、P7代脐带Wharton's jelly MSC,绘制细胞生长曲线；取P3代细胞,采用流式细胞术检测细胞表面标记分子,并分别采用成骨和成脂诱导培养基进行成骨及成脂诱导分化,茜素红染色和油红O染色观察结果.结果 P1、P3代脐带Wharton's jelly MSC的增殖能力强,且P1代细胞的增殖能力强于P3代,P7代细胞的增殖能力较P3代细胞有所减弱.P3代脐带Wharton's jelly MSC高表达CD90(99.8％)、CD105(100％)和CD166(100％),低表达CD45(0.3％)、CD14(0.1％)、CD34(0.2％)和CD79a(0.3％),不表达HLA-DR.P3代Wharton's jellyMSC经成骨诱导后,茜素红染色可见红色结节；经成脂诱导后,油红O染色可见脂质沉积.结论 本方法获得的Wharton's jelly MSC活性好,增殖能力强,为后续实验研究及临床应用提供了理想的种子细胞.
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人脐带Wharton's jelly间充质干细胞生物学特性的研究
目的 探讨人脐带Wharton's jelly间充质干细胞的培养方法及生物学特性.方法 将脐带Wharton's jelly剪成约0.5 mm3种植到培养瓶,3h后添加培养液.细胞达90％融合时用胰酶消化传代.用免疫组化检测波形蛋白的表达;用流式检测细胞膜表型;用诱导液检测其分化为脂肪样细胞和神经样细胞的潜能.结果 培养6d左右,细胞从组织块游出,为长梭形的成纤维样细胞,传代后细胞增殖加快,呈放射状分布.间充质干细胞标记物CD90等为阳性,而CD34等为阴性;波形蛋白呈强阳性.成脂诱导后,细胞质出现脂滴,油红O染色为阳性.经黄芪诱导24 h,细胞表达Nestin和NF,而NSE和GFAP为阴性.结论 人脐带Wharton's jelly中有间充质干细胞,且有多向分化潜能.
关键词： 间充质干细胞 脐带 Wharton's jelly 分离 培养 -
人脐带非酶解法培养MSCs的方法建立
目的 建立从人脐带Wharton's jelly组织中直接培养间充质干细胞(MSCs)的方法.方法 将人脐带切成5 cm左右的片段,纵向剖开,剔除血管,把富含Wharton's jelly组织的脐带面置于10 cm2塑料培养皿的培养面上,加入含20％FBS的LG-DMEM培养基连续培养10 d;移去脐带组织后,培养皿中的细胞继续培养至80％-90％融合.传代和扩增3代(次)后,以倒置光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞免疫表型及细胞周期,用含有成骨细胞诱导剂、脂肪细胞诱导剂对传代培养至第3代的细胞分别定向诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞,并对诱导后细胞用碱性磷酸酶检测试剂、Von-Kossa染色检测试剂和茜苏红染色试剂作细胞生物学检测.结果 脐带组织在贴壁培养5d,组织周围可见有少量细胞贴壁生长,主要呈“成纤维样”,形状不规则,移去脐带组织后继续培养至14-15 d时,细胞达到80％-90％汇合;细胞表面表达CD73、CD105、CD90、CD44、CD29、CD71及CD13,不表达CD34、CD14、CD133、CD45、HLA-DR;培养至第4代时约72.724％的细胞处在G1期,S期细胞占18.069％,第6代时,G1期细胞约为83.875％、S期细胞仅为9.606％左右.细胞经成骨细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色显示呈强阳性,茜苏红染色和Von-Kossa染色显示细胞有钙盐沉积并形成钙结节;细胞经成脂细胞诱导分化后,油红O染色呈红色,显示胞浆内有大量甘油三酯的聚集.结论 采用非酶解法从人脐带Wharton's jelly中分离及培养扩增的细胞具备MSCs的基本特性,具有分化为成骨细胞和脂肪细胞的能力.
