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PKB/CDC25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用
目的 探讨PKB/Cdc25B信号通路对甲状腺鳞癌SW579细胞生长增殖的调控作用.方法 体外培养甲状腺鳞癌SW579细胞,实验分为对照组、Wortmannin组和DMSO组,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;用western blot方法检测PKB、CDC25B蛋白表达和PKB-pS473、CDC25B-pS353及CDC2-pTyr15的磷酸化状态;用ELISA方法检测MPF活性.结果 与对照组相比,DMSO组细胞形态无明显变化,各项检测指标无明显差异(P＞0.05);Wortmannin组细胞形态回缩,PKB和CDC25B蛋白表达明显下降(P＜0.01),PKB-pS473和CDC25B-pS353的磷酸化水平显著下调(P＜0.01),而CDC2-pTyr15的磷酸化水平显著上调(P＜0.01),MPF活性明显下降(P＜0.01).结论 甲状腺鳞癌SW579细胞内源性PKB可以通过调控CDC25B对MPF活性及细胞增殖产生影响.
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从PKA到MPF途径调控卵细胞减数分裂周期的研究进展
在大多数物种中,由于未知的体内信号作用,细胞减数分裂周期停滞在分裂前期到中期的过渡阶段.在促黄体激素作用下,Cdc2/cyclinB复合物(即MPF)的Cdc2激酶组分被活化,进而促发胚泡破裂.这种现象的内在机制为高浓度的cAMP及活化的PKA导致Cdc25B及Wee1b磷酸化从而使Cdc25B失活及Wee1b活化,活化的蛋白激酶Wee1b磷酸化Cdc2使MPF失活,从而使减数分裂停滞在分裂前期.在促黄体激素的作用下,终导致MPF再次活化,减数分裂重新开始.
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Cdc25B蛋白过表达可使小鼠胚胎突破2-细胞期阻滞
目的:探讨Cdc25B蛋白过表达对小鼠2-细胞期胚胎发育的影响.方法:利用体外转录试剂盒将Cdc25B转录成mRNA,将mRNA显微注射入小鼠2-细胞期胚胎中,观察胚胎发育情况和卵裂率.用蛋白激酶活性测定方法和western印迹分别检测Cdc25B蛋白过表达小鼠胚胎MPF的活性及Cdc2-Tyr15的磷酸化状态.结果:hCG后48 h,mRNA注射组有超过40%的2-细胞期胚胎分裂到4-细胞期而对照组仍停留在2-细胞期;激酶活性测定显示注射Cdc25BmRNA后,MPF的活性显著升高;Cdc2-Tyr15的磷酸化状态变化与激酶活性测定结果一致.结论:Cdc25B蛋白过表达可以激活有丝分裂促进因子(MPF),从而使小鼠2-细胞期胚胎突破2-细胞期阻滞,发育到4-细胞期.
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小鼠受精卵早期发育过程中Plk1表达和活性变化及其与MPF关系的研究
目的 研究在小鼠受精卵早期发育过程中,哺乳动物Polo-like激酶(Plk1)的表达和活性变化及其与有丝分裂促进因子(MPF)活性变化的关系.方法 以一细胞期小鼠受精卵为材料,用Western Blotting方法 检测Plk1蛋白含量;用液闪计数分析仪分别测定Plk1和MPF的cpm值来表示各自激酶活性.结果 小鼠受精卵第一次有丝分裂过程中Plk1的含量没有显著变化,而Plk1活性在M期达到高峰,在M期退出时迅速下降.加入MPF抑制剂后MPF和Plk1活性均未在M期出现峰值.结论 Plk1的活性是随着细胞周期的进程而变化的;Plk1在小鼠受精卵早期发育过程中可能参与了MPF的自我催化活化环.
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小鼠受精卵早期发育过程中PDE活性变化及其与MPF关系的研究
目的 研究在小鼠受精卵早期发育过程中,磷酸二酯酶(PDE)的活性变化及与有丝分裂促进因子(MPF)活性变化相比较,初步探讨哺乳动物受精卵早期发育的细胞周期调控机制.方法 以小鼠受精卵为材料,通过离子交换方法,检测PDE和MPF的活性.结果 受精卵早期发育过程中PDE和MPF活性随细胞周期变化而波动,G2期PDE活性升高而MPF在M期活性升高.结论 PDE参与了小鼠受精卵的早期发育并且作用时间早于MPF.
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TOR抑制剂对小鼠受精卵卵裂以及MPF活性的影响
目的 观察哺乳动物雷帕霉素靶(mTOR)抑制剂对小鼠受精卵第一次卵裂及第一次有丝分裂中MPF活性的影响.方法 在小鼠受精卵中加入雷帕霉素后,显微镜观察卵细胞分裂情况,计算卵裂率;用液闪计数仪测定各组分别加入雷帕霉素和渥曼青霉素后的MPF活性;用免疫电泳方法 检测加入雷帕霉素后cyclin B的表达.结果 加入mTOR抑制剂后,卵裂率下降,MPF活性在小鼠受精卵第一次分裂中未见升高,卵细胞中cyclin B的表达下降.结论 mTOR抑制剂可抑制小鼠受精卵第一次卵裂,同时抑制小鼠受精卵第一次分裂时MPF活性的升高.
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CDC25 B与14-3-3相互作用的研究
有研究表明在肿瘤发生发展的过程中，癌细胞的有丝分裂失控是肿瘤发生的主要原因。因此，对细胞分裂调控机制的研究成为目前研究的热点。其中细胞分裂周期25 B （ cell division cycle 25 B， CDC25B）和14-3-3是与细胞分裂有着密切关系的调控子。目前研究已经发现PKA／CDC25B／MPF （ CDC2-cyclinB1）和PKA／CDC25B／14-3-3／MPF是调控细胞有丝分裂的两条重要信号转导途径。蛋白激酶A （ pro-tein kinase A， PKA）是一种环磷酸腺苷（ cyclic adenosine monophosphate， cAMP）依赖性蛋白激酶，可以通过磷酸化下游的靶蛋白，抑制靶蛋白正常发挥作用，从而发挥调节作用。实验研究发现， PKA可以通过磷酸化CDC25B某些位点的丝氨酸残基，使CDC25B处于磷酸化状态，不能使成熟促进因子（ maturation pro-moting factor， MPF）的催化亚基细胞分裂周期2蛋白（cell division cycle 2， CDC2）第15位酪氨酸脱磷酸，因而不能激活MPF，使细胞分裂发生阻滞，不能发生G2／M的转化。14-3-3可以通过CDC25B／14-3-3／MPF途径调节有丝分裂，14-3-3通过结合已经发生磷酸化的CDC25 B的氨基酸（丝氨酸或者苏氨酸）残基，阻止CDC25B进入细胞核，从而引起细胞分裂的阻滞畅这样也就提示可以将14-3-3作为靶位点进行靶向治疗，治疗肿瘤疾病。
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Cdc2激酶与肿瘤的相关性研究进展
细胞周期蛋白依赖性激酶Cdc2在细胞周期调控中起着调控G2至M期的作用.在G2后期Cdc2与周期蛋白B(Cyclin B)结合形成Cdc2-Cyclin B激酶复合物,称有丝分裂促进因子(MPF),促使细胞从G2期进入M期.MPF是真核细胞有丝分裂G2~M期转换所必需的蛋白激酶,是调节细胞进入有丝分裂期关键的蛋白酶[1].当Cdc2过表达时往往会导致细胞恶性增殖,形成肿瘤.
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哺乳类卵母细胞成熟调节机制的研究进展
关于哺乳类卵母细胞的成熟机制的研究,近几年在爪蟾等低等脊椎动物卵母细胞成熟机理的研究基础上,取得许多显著的进展.主要体现在:①哺乳类的促性腺激素介导的信号不同于两栖类.②随着原始卵泡过渡到初级卵泡阶段,卵母细胞内的cAMP水平升高,并且维持在较高的水平,一直到卵母细胞长足.cAMP高水平维持需要多种因子参与,其水平的下降引发卵母细胞的成熟启动,即生发泡破裂,整个过程涉及复杂的机制.③MPF是从时间和空间上协调卵母细胞成熟事件的关键因素,而MPF活性的自放大系统又受到多种信号途径的调控.
