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基于P38信号传导通路探讨丹枝饮治疗盆腔炎性疾病后遗症机制的实验研究
目的 观察丹枝饮对单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白-2(macrophage inflammatory protein 2,MIP-2)炎性因子表达影响,以P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 Mito-gen Activated Protein Kinase,P38)和磷酸化P38(p-P38)为观察指标,探讨丹枝饮和P38信号传导通路的相关性.方法 选用雌性小鼠24只,随机分为空白组、模型组、丹枝饮组及阿司匹林组.采用宫腔种植鼠衣原体方法建立SPID小鼠模型.治疗后取小鼠子宫组织采用PCR方法检测MCP-1 、MIP-2 的蛋白基因相对表达水平,采用Western Blot检测P38和p-P38相对蛋白含量,以评估P38的磷酸化水平.结果 与空白组比较,模型组MCP-1 、MIP-2炎性因子及P38磷酸化水平明显升高(P＜0.01);与模型组比较,丹枝饮组MCP-1 、MIP-2 炎性因子及P38磷酸化水平明显降低(P＜0.01).结论 丹枝饮能够缓解盆腔炎性疾病后遗症的机制可能为阻断P38 信号传导通路,从而使能够引起炎性反应的MCP-1 及MIP-2表达降低而起到改善效果.
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桃叶珊瑚苷对紫外线B波损伤皮肤角质形成细胞的保护作用
目的 探讨桃叶珊瑚苷对紫外线B波损伤的皮肤角质形成细胞的保护作用及其机制.方法 用64 mJ·cm-2的紫外线B波照射角质形成细胞建立光损伤模型,以不同浓度桃叶珊瑚苷处理损伤细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活力,用试剂盒分别检测细胞中超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化酶活性、过氧化氢酶活性、丙二醛含量,逆转录-聚合酶链反应法检测细胞中P38、肿瘤坏死因子-α及白介素-6 mRNA的表达量,酶联免疫法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α及白介素石的含量.结果 紫外线B波照射细胞后,细胞活力、超氧化物歧化酶活性、谷胱甘肽过氧化酶活性、过氧化氢酶活性明显降低,丙二醛含量、P38 mRNA表达量、肿瘤坏死因子-α和白介素-6 mRNA及蛋白的表达量明显升高(P＜0.01);1 ×10-5和1×10-6 mol·L-1桃叶珊瑚苷能够显著改善角质形成细胞的光损伤(P ＜0.05或P＜0.01).结论 桃叶珊瑚苷能改善紫外线B波对角质形成细胞的光损伤,其机制可能与抑制氧化损伤,调控P38信号通路,调节肿瘤坏死因子-α和白介素-6的表达有关.
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p38信号通路在内皮细胞微粒诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间黏附分子-1中的作用
目的 观察p38信号通路(P38MAPK)在内皮细胞微粒(EMPs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)中的作用.方法 将体外培养的HUVECs随机分组:①EMPs不同时点观察组:用EMPs(终浓度105/ml)分别刺激细胞0、3、6、12、24 h；②EMPs不同剂量作用组:分别用终浓度为0、102、103、104、105/ml的EMPs刺激细胞24 h；③EMPs+p38MAPK特异性抑制剂SB203580组:在EMPs(终浓度105/ml)刺激前,与终浓度为5μmol/L的SB203580共同孵育30 min.用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定p38MAPK磷酸化表达,实时荧光定量PCR测定ICAM-1mRNA的表达.结果 EMPs可激活p38MAPK,使磷酸化p38MAPK蛋白表达量及ICAM-1 mRNA表达量增加,且呈剂量和时间依赖性.p38MAPK特异性拮抗剂SB203580可显著抑制EMPs的此作用.结论 p38信号通路可能部分参与了对EMPs诱导HUVECs表达ICAM-1的调控.
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P38MAPK在脂多糖诱导人单核细胞产生肿瘤坏死因子中的作用
目的:探讨P38信号通道(P38MAPK)在脂多糖(LPS)诱导人单核细胞表达肿瘤坏死因子(TNFα)中的作用.方法:采用免疫沉淀法、免疫复合物蛋白激酶测定法、Western blotting检测P38MAPK在LPS诱导的人单核细胞产生TNFα中的激活程度,应用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)观察P38信号通道抑制剂SB203580对单核细胞TNFα mRNA和蛋白质表达的影响.结果:LPS刺激单核细胞引起P38MAPK激活和TNFα表达明显增多,P38MAPK抑制剂SB203580对单核细胞TNFα表达有显著抑制作用.结论:P38MAPK可能是LPS诱导人单核细胞表达TNFα的重要通路.
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Cofilin、CREB及P38/MAPK分子信号与宫内生长受限大鼠学习记忆障碍的关系
[目的]研究宫内生长受限(intrauterine growth restriction,IUGR)大鼠前额叶皮质内Cofilin、CREB和P38蛋白及其磷酸化表达状况.[方法]通过孕鼠子宫动脉结扎方法建立宫内生长受限大鼠模型,对30 d大鼠进行新位置/新物体实验和y-型迷宫测试以反映其学习记忆能力.应用Western blotting方法检测30 d大鼠前额叶皮质中Cofilin、CREB、磷酸化CREB、P38及磷酸化P38的表达变化.[结果]IUGR大鼠探索新事物和新空间的时间百分数均明显低于对照组(P＜0.05),表明IUGR大鼠学习记忆能力较弱.Western blotting检测显示,IUGR大鼠前额叶皮质中Cofilin蛋白相对表达量与对照组相比明显降低;CREB和P38蛋白相对表达量与对照组相比未见明显差异,但p-CREB明显低于对照组(P＜0.01),而p-P38明显高于对照组(P＜0.05).[结论]IUGR大鼠学习记忆功能障碍与Cofilin蛋白的相对表达量下降以及CREB和P38的磷酸化修饰异常有关.
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吡格列酮对新生大鼠成骨细胞p38和ERK1/2信号通路的影响
目的 观察吡格列酮对新生大鼠成骨细胞增殖、凋亡及分化的影响,并初步探讨相关分子机制.方法 获取新生大鼠颅骨成骨细胞,应用倒置显微镜观察并通过茜素红染色鉴定.将第3代成骨细胞接种至含不同浓度吡格列酮(0、10、20、40 μmol/L)的培养基中培养.应用MTT实验检测成骨细胞活性.应用Hoechst33258染色检测细胞凋亡.应用碱性磷酸酶(ALP)活性检测和钙结节染色评估吡格列酮对成骨细胞分化能力的影响.应用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹评估吡格列酮对成骨细胞内BMP-2、Runx2、OSX等成骨分化相关基因和蛋白表达的影响.应用蛋白免疫印迹评估p38和ERK1/2信号通路内相关蛋白表达情况.结果 随着吡格列酮(0、10、20、40 μmol/L)浓度的增加,各组细胞活性逐渐降低(F=282.629,P＜0.01).与空白对照组(0μmol/L)相比,经10、20 μmol/L吡格列酮处理组荧光阳性成骨细胞数量减少(P＜0.05).与空白对照组及吡格列酮10μmol/L组、20 μmol/L组相比,吡格列酮40 μmol/L组荧光阳性成骨细胞数量显著增多(P＜0.05).随着吡格列酮(0、10、20、40 μmol/L)浓度的增加,各组细胞ALP活性逐渐降低(F=64.247,P＜0.01).随着吡格列酮浓度的增加,钙化结节数量逐渐增多(F=672.644,P＜0.01).与空白对照组相比,经10、20、40 μmol/L吡格列酮处理后,细胞内BMP-2、Runx2、OSX mRNA和蛋白表达水平均以剂量依赖形式显著降低(P＜0.05).与空白对照组相比,经10、20、40 μmol/L吡格列酮处理后,细胞内p-p38 MAPK蛋白表达水平均显著增加(P＜0.05),而p-ERK1/2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).各组细胞内p-JNK蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 吡格列酮以剂量依赖的方式调节大鼠成骨细胞增殖、凋亡和分化,且p38信号通路活化和ERK1/2信号途径抑制在这一过程中起重要调控作用.
关键词： 吡格列酮 成骨细胞 P38信号通路 ERK 1/2信号通路 细胞凋亡 -
白细胞介素1β通过p38信号通路上调系膜细胞表达白细胞介素6
目的:探讨p38信号通路(p38MAPK)在白细胞介素1(IL-1)β上调肾小球系膜细胞表达白细胞介素6(IL-6)中的作用.方法:应用Western Blotting检测p38MAPK 在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应中的活化程度,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法检测IL-1β诱导的系膜细胞促炎症介质IL-6的表达水平并观察p38MAPK特异性抑制剂SB203580对其mRNA的转录和蛋白质生成的影响.结果:IL-1β以时间和剂量依赖方式刺激系膜细胞引起p38MAPK的活化,并明显上调系膜细胞IL-6表达.SB203580以剂量依赖方式从基因转录和翻译水平显著抑制IL-1β诱导的IL-6表达.结论:p38MAPK在IL-1β诱导的肾小球系膜细胞炎症反应产生炎症介质IL-6中起重要作用.
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葛根素调控p38信号通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的影响
目的 探讨葛根素调控p38信号通路对H2 O2诱导心肌细胞凋亡的影响.方法 葛根素处理大鼠H9c2心肌细胞,分为对照组(细胞无特殊处理)、H2 O2组(200μmol/L H2 O2干预细胞)和葛根素+H2 O2组(250μmol/L葛根素和200μmol/L H2 O2干预细胞),SB203580作为p38信号通路抑制剂,各组细胞处理24 h,通过流式细胞仪检测各组凋亡率;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(酶切caspase3)、p53、p-p38的蛋白表达.结果 与对照组比较,H2O2组细胞凋亡率显著升高,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著升高(P<0.05);与H2O2组比较,葛根素+H2O2组凋亡率显著降低,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著降低(P<0.05);与葛根素+H2O2组比较,葛根素+H2O2+SB203580组细胞凋亡率显著降低,酶切caspase3、p53、p-p38蛋白表达均显著降低(P<0.05).结论 葛根素可通过抑制p38信号通路及下调酶切caspase3和p53表达降低H2 O2诱导的心肌细胞凋亡.
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糖基化终末产物抑制骨髓间充质干细胞增殖的机制研究
目的:通过分析糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖的影响,探讨骨髓MSCs移植在合并糖尿病的冠心病患者中疗效不佳的潜在机制.方法:应用不同浓度的AGEs-BSA(0、25、50、100、200 μg/mL)分别对骨髓MSCs刺激6、12、24 h,检测骨髓MSCs增殖及活性氧物质(reactive oxygen species,ROS)累积情况；并观察AGEs对细胞信号通路P38磷酸化水平的影响.结果:AGEs可加速ROS生成,并呈剂量与时间依赖性地抑制骨髓MSCs增殖活性,该效应与AGEs诱导激活P38磷酸化水平相关;P38活性的抑制可逆转AGEs对骨髓MSCs增殖抑制的影响.结论:AGEs可能通过激活P38信号通路磷酸化,诱导骨髓MSCs中ROS蓄积,进而抑制骨髓MSCs的增殖能力,减弱了骨髓MSCs移植对于合并糖尿病的冠心病患者的疗效.
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MG-132对高氧肺损伤中细胞凋亡的保护作用及对p38信号通路的影响
性炎症反应.高氧组的凋亡指数、p38MAPK表达均高于正常对照组和MG-132高氧组(P<0.05或P<0.01).结论 高氧可以导致肺组织细胞发生凋亡,可能是通过激活p38MAPK信号通路来调控的.蛋白酶体抑制剂MG-132可以减轻高氧引起的肺损伤,可能对p38MAPK信号通路有抑制作用.
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三氧化二砷诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡P38信号通路的研究
目的:探讨P38信号通路在三氧化二砷(As2 O3)诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡中的作用. 方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20 μmol/L)As2O3作用PC-3细胞24、48、72h后的细胞生长抑制情况.Western印迹检测As2O3作用PC-3细胞后P38信号转导通路的表达.Annexin V/PI双染色法检测As2O3作用PC-3细胞后细胞凋亡,同时检测应用P38通路高选择抑制剂SB203580干扰P38信号通路后As2O3诱导PC-3细胞凋亡的变化. 结果:As2O3诱导PC-3细胞凋亡呈现时间、剂量依赖性.As2O3可以使P38信号通路蛋白快速磷酸化,激活P38信号通路.2、10、20 μmol/L As2O3作用PC-3细胞24h后,PC-3细胞凋亡率分别为(18.9±0.43)％、(24.7±0.29)％和(49.7±1.79)％.应用P38信号通路高选择抑制剂SB203580干扰P38信号通路后,PC-3细胞凋亡率分别降低为(14.8±0.81)％、(22.1±0.51)％和(39.6±1.74)％,抑制P38信号通路可以显著降低As2O3诱导PC-3细胞的凋亡(P＜0.05). 结论:P38信号通路在As2O3诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡中有表达,干扰P38信号通路可影响As2O3诱导PC-3细胞凋亡,提示P38信号通路参与了As2O3诱导的PC-3细胞凋亡.
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P38信号通路在人脐静脉内皮细胞表达环氧化酶-2中的作用
目的:探讨P38信号通路(P38MAPK)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达环氧化酶-2 (COX-2)的作用,从而研究P38MAPK在糖尿病动脉粥样硬化中的作用. 方法:分别以高葡萄糖、糖基化终产物(AGE)、高胰岛素和过氧化氢刺激HUVEC;检测P38MAPK和COX-2在HUVEC的蛋白表达.以P38MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HUVEC后,再用上述四种因素刺激HUVEC,检测COX-2在HUVEC的蛋白表达. 结果:高葡萄糖、AGE、高胰岛素和过氧化氢均可独立激活P38MAPK,使磷酸化P38MAPK表达量增加,COX-2蛋白表达量也增加;SB203580预处理后,COX-2表达被显著抑制. 结论:P38MAPK调控COX-2的表达,它是COX-2的上游信号分子,可能是动脉粥样硬化发生的始动信号之一.
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Kif15调控大鼠星形胶质细胞增殖、细胞周期及凋亡的研究
目的:探讨Kif15调控星形胶质细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响及机制.方法:从出生1 d的大鼠分离出星形胶质细胞,分别用NC-小干扰RANA(siRNA)(NC-siRNA组)、Kif15-siRNA转染细胞(Kif15-siRNA组),不做任何处理的细胞作为空白对照组(Control组),48 h后收集细胞,Western blotting检测各组细胞中Kif15的蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclinD1)、Cleaved caspase3、p38、p-p38蛋白表达情况.结果:转染Kif15-siRNA能显著抑制Kif15的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Kif15-siRNA组细胞存活率、G2/M期细胞及PCNA、cyclinD1、p-p38蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、G1期细胞及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01),p38蛋白表达在各组细胞间差异无统计学意义(P>0.05).结论:抑制星形胶质细胞中Kif15的表达,可显著降低细胞的增殖,阻滞细胞于G1期,促进细胞凋亡,其机制与抑制p38信号通路有关.
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IL-1β抑制硬膜外瘢痕形成的作用与机制研究
[目的]研究白介素1β(IL-1β)对成纤维细胞合成基质金属蛋白酶3的作用及机制,以探讨IL-1β对硬膜外瘢痕形成的影响.[方法]将NIH3T3细胞随机分为3组,分别为IL-1β组、IL-1β+SB202190(p38MAPK特异性阻断剂)组和对照组,各组经无血清培养20 h后,IL-1β组加入10 ng/ml的IL-1β、IL-1β+SB202190组用10 μmol/L的SB202190预作用1 h后加入10 ng/ml的IL-1β,对照组直接加2%血清.各组细胞培养24 h后收集细胞,采用RT-PCR和Western blotting检测MMP-3的表达.[结果]IL-1β组MMP-3表达较对照组明显增加(P<0.01);IL-1β+SB202190组MMP-3的表达较IL-1β组明显减少(P<0.01),但与对照组无明显差异(P>0.05).[结论]IL-1β可促进NIH3T3细胞MMP-3的合成,可能对硬膜外瘢痕的形成有一定的抑制作用,而p38通路在IL-1β抑制瘢痕形成过程中起到重要的作用.
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PBX3基因通过p38信号通路对子宫内膜癌细胞生物学特性的影响研究
目的:探讨前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)对子宫内膜癌细胞活力和凋亡率的影响及p38信号通路调控作用.方法:将靶向抑制PBX3的小干扰RNAs(siR-NA-PBX3)及阴性对照siRNA(siRNA-Ctrl)转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞,SB203580作为p38信号通路抑制剂,未转染细胞为空白对照组,转染48 h.Western blot法检测PBX3、PCNA、Bax、p38和p-p38蛋白表达;MTT及流式细胞术检测细胞活力及凋亡率.结果:siRNA-PBX3转染可明显降低PBX3表达,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).siRNA-PBX3组转染24 h、48 h和72 h的细胞活力均降低,与siRNA-Ctrl组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).siRNA-PBX3转染细胞48 h的细胞凋亡率升高,PCNA和p-p38蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与siRNA-Ctrl组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).与siRNA-PBX3组和SB203580组比较,siRNA-PBX3+SB203580组的细胞活力均明显降低,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:PBX3基因表达抑制可通过下调p38信号通路降低子宫内膜癌细胞活力和诱导凋亡.
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糖痹康对糖尿病大鼠背根神经节组织氧化应激、细胞凋亡的影响及机制
目的 观察糖痹康对糖尿病大鼠背根节神经组织氧化应激、细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 选取SD雄性大鼠60只,随机分为正常对照组、模型组、糖痹康低剂量组、糖痹康中剂量组、糖痹康高剂量组及弥可保组各10只.模型组、糖痹康低剂量组、糖痹康中剂量组、糖痹康高剂量组及弥可保组采用腹腔注射链脲佐菌素法制备糖尿病模型,正常对照组腹腔注射等量注射枸橼酸盐缓冲液.8周后,将各组大鼠麻醉,取出背根神经节,检测背根神经节组织活性氧簇(ROS)水平,采用TUNEL法测算神经节组织细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase3)以及p38丝裂原活性蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路相关蛋白p38、p-p38的表达.结果 ①模型组ROS水平高于正常对照组,糖痹康低、中、高剂量组及弥可保组ROS水平均低于模型组(P均<0.05).②模型组细胞凋亡率高于正常对照组,糖痹康低、中、高剂量组及弥可保组细胞凋亡率均低于模型组(P均<0.05).③模型组Bcl-2蛋白表达低于正常对照组,Cleaved Caspase3蛋白表达高于正常对照组(P均<0.05);与模型组比较,糖痹康低、中、高剂量组及弥可保组Bcl-2蛋白表达均升高,Cleaved Caspase3蛋白表达均降低(P均<0.05).④模型组p38、p-p38蛋白表达均高于正常对照组,糖痹康低、中、高剂量组及弥可保组p38、p-p38蛋白表达均低于模型组(P均<0.05).结论糖痹康可降低糖尿病大鼠背根神经节组织ROS水平、抑制细胞凋亡,其机制可能与抑制p38 MAPK信号通路有关.
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益母草碱对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及机制
目的 探讨益母草碱(LEO)对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响及机制.方法 选择普通级健康雄性昆明小鼠120只,随机分为假手术组、模型组、LEO组3组,每组40只.模型组、LEO组制备小鼠大脑中动脉栓塞模型.假手术组除不插入线栓外,其余操作同模型组.造模后30 min,LEO组腹腔注射LEO溶液15 mg/(kg·d),假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水.造模后24 h,取梗死部位脑组织,采用TTC染色法测定脑梗死体积,称重测脑含水量以评价脑水肿程度,采用伊文思蓝(EB)法测定血脑屏障通透性,采用HE染色法观察脑组织形态,采用免疫印迹法检测脑组织p-p38及紧密连接蛋白(ZO-1)表达,采用RT-PCR法检测脑组织炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达.结果 模型组脑梗死体积比、脑含水量、EB含量均高于假手术组,LEO组脑梗死体积比、脑含水量、EB含量均低于模型组(P均<0.05).模型组皮层及海马大片神经元细胞间疏松水肿,细胞核固缩未见有清晰核仁、炎症细胞浸润等缺血缺氧坏死的病理改变,而LEO组与模型组相比脑组织病理改变显著改善.模型组脑组织p-p38蛋白表达高于假手术组、ZO-1蛋白表达低于假手术组,LEO组p-p38蛋白表达低于模型组、ZO-1蛋白表达高于模型组(P均<0.05).模型组脑组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达均高于假手术组,LEO组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达均低于模型组(P均<0.05).结论 LEO能改善缺血再灌注小鼠的神经损伤,减轻血脑屏障的渗透性;其机制可能与抑制p38 MAPK信号通路,从而减轻炎症反应有关.
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p38信号通路对急性重症胰腺炎大鼠大脑皮层 COX－2表达的影响
目的：观察p38信号通路对急性重症胰腺炎（SAP）大鼠大脑皮层环氧合酶2（COX－2）表达的影响。方法将45只大鼠随机分为模型组、抑制剂组、假手术组各15只。抑制剂组、模型组分别将5％牛磺胆酸钠经胰胆管逆行注入胰腺制备SAP大鼠模型，造模后5 min于大鼠尾静脉分别注射p38信号通路抑制剂SB203580及等量生理盐水；假手术组开腹后翻动胰腺数次立即缝合腹壁，尾静脉注射等量生理盐水。各组于造模后24 h断头取脑，采用Western blot法检测大脑皮层COX－2和磷酸化p38（p－p38），计算其平均光密度（IOD）值。结果抑制剂组p－p38、COX－2蛋白表达的IOD值分别为7．5±0．9、7．5±1．1，模型组分别为18．3±1．3、13．3±3．0，假手术组分别为2．1±0．3、5．3±1．0；三组间两两比较，P均＜0．05。相关分析显示，p－p38与COX－2蛋白表达呈正相关（ r＝0．661， P＜0．05）。结论 p38信号通路具有调控SAP大鼠皮层COX－2表达的作用，抑制该通路可下调COX－2表达。
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TGF-β/Smad、p38MAPK及JNK/SAPK信号通路在糖尿病肾病发生发展中作用机制的研究进展
糖尿病肾病(DKD)是糖尿病常见的微血管并发症,由细胞因子介导的相关信号传导通路在DKD损伤过程中发挥显著作用,其中TGF-β/Smad、p38MAPK、JNK/SAPK是DKD发生发展过程中重要的信号分子.TGF-β/Smad是诱导足细胞凋亡、损伤,介导肾小球硬化及肾间质纤维化的经典信号通路.p38MAPK、JNK/SAPK信号通路可以通过氧化应激、触发炎症因子及活化炎症途径等过程,参与足细损伤,导致肾脏功能性及器质性改变,引起蛋白尿和肾小球硬化.
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PP2A调控p38信号通路对星形胶质细胞迁移能力的影响研究
目的 探讨蛋白磷酸酯酶-2A(PP2A)对星形胶质细胞迁移能力影响及机制研究.方法 体外分离培养乳鼠原代星形胶质细胞,分别用PP2A激活剂DES(激活组)和抑制剂OA(抑制组)作用于星形胶质细胞,同时设置对照组,对照组细胞中加入等量DMSO.PP2A活性检测试剂盒检测细胞中PP2A活性,Transwell小室检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞中p38、p-p38、MMP-2、MMP-9蛋白水平.用p38信号通路抑制剂SB202190和PP2A激活剂DES共同作用于星形胶质细胞,检测细胞的迁移能力及细胞中p38、p-p38、MMP-2、MMP-9蛋白水平.结果 抑制组细胞中PP2A活性明显低于对照组,而激活组细胞中PP2A活性明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01).抑制组细胞迁移能力和细胞中MMP-2、MMP-9水平明显低于对照组(P<0.01).激活组细胞迁移能力和细胞中MMP-2、MMP-9水平明显高于对照组(P<0.01).抑制组细胞中p-p38水平与对照组相比明显升高,而激活组细胞中p-p38水平与对照组相比明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01).p38信号通路抑制剂SB202190和PP2A激活剂DES共同作用后的细胞迁移能力及MMP-2、MMP-9蛋白水平较SB202190单独作用后均明显升高(P<0.01).结论 PP2A负调控p38信号通路促进星形胶质细胞迁移.
