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单侧输尿管结扎对大鼠肾间质PI3K/AKT表达的影响
目的 探讨PI3K/AKT信号通路是否参与肾间质纤维化的发病过程.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组,模型组行左侧输尿管结扎术.术后5、10和15 d分别处死各组中的5只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化方法检测肾小管-间质中TGF-β1、AKT1、磷酸化AKT1的表达.结果 模型组大鼠肾小管-间质细胞增多,肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显,随时间进展而加重.不同时间的UUO模型组肾组织AKT1、磷酸化AKT1、TGF-β1表达显著高于假手术组(P＜0.01);于第10天模型组AKT1表达达高峰,于第15天磷酸化AKT1、TGF-β1表达达高峰;UUO大鼠肾组织第5天和第15天TGF-β1的表达与AKT1活性呈正相关,第10天和第15天梗阻肾的AKT1活性与肾小管-间质纤维化指数呈正相关(均P＜0.05).结论 AKT1、磷酸化AKT1在大鼠梗阻性肾病模型肾小管-间质中表达及AKT1活性明显增加,提示PI3K/AKT信号通路可能参与肾小管-间质纤维化的过程.
关键词： PI3K/Akt信号通路 TGF-β1 肾小管-间质纤维化 -
厄贝沙坦对肾硬化大鼠肾小管间质中MMP-9/TIMP-1表达的影响
为探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其抑制剂(TIMP-1)在单侧肾切除后,重复注射阿霉素复制肾小球硬化大鼠肾小管-间质的表达,以及厄贝沙坦对其的影响和可能的保护作用机制.将肾小球硬化大鼠分为厄贝沙坦治疗组和对照组,设假手术组为正常对照.检测厄贝沙坦治疗4周后,肾功能和组织病理改变,并用免疫组化或原位杂交的方法分别检测肾小球和肾小管-间质中MMP-9/TIMP-1、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达.结果表明肾小球硬化组肾小管中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1显著增加.厄贝沙坦组中肾小管中上述指标表达下降.提示厄贝沙坦在延缓肾小球硬化同时,在减轻肾小管-间质纤维化方面有一定保护作用.
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细胞因子在慢性肾缺血与肾小管-间质纤维化过程中的作用
肾脏慢性缺血随着病情的进展会发展为肾小管间质纤维化.目前研究发现,血管紧张素-Ⅱ(AngⅡ)、低氧诱导因子-1(HIF-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、内皮素(ET-1)、血小板衍生生长因子(PDGF)、结缔组织生长因子(CTGF)在肾纤维化中发挥了重要作用,阻断各细胞因子导致肾小管-间质纤维化的过程是当前的研究热点.
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三七总苷对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞外基质分泌及降解的影响
目的探讨三七总苷(PNS)对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞外基质(ECM)分泌及降解的影响,为临床上应用PNS延缓慢性肾衰竭(CRF)的进展提供理论依据.方法无菌条件下收集40份尿毒症病人血清和20例正常人血清,用相差显微镜、扫描电镜结合细胞角蛋白18(CK-18)免疫组化鉴定人肾小管上皮细胞株HK2.应用消化法检测HK-2细胞培养上清液中羟脯氨酸水平,ELISA方法检测HK-2细胞培养上清液中纤连蛋白(FN)、金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白分泌量,RT-PCR方法检测MMP-1和TIMP-1 mRNA表达.结果10%尿毒血清组与正常对照组相比,HK-2细胞培养上清液中胶原蛋白和FN分泌量显著增高,MMP-1/TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值降低,而PNS 400、600、800 mg/L可使尿毒血清增加的HK-2培养上清液胶原蛋白分泌量回降;200、400、600、800 mg/L可使FN分泌量回降;100、200、400、600、800mg/L可使尿毒血清降低的MMP-1/TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值回升.结论在体外实验中,PNS可降低尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞胶原蛋白及FN的分泌,升高MMP-1/TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值,促进ECM降解,从而有效延缓人肾小管-间质纤维化的进展.
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肾络通对阿霉素诱导的肾病大鼠 TGF-β1、TGF-β1mRNA及c-fos表达的影响
目的: 观察中药肾络通对肾小管-间质纤维化大鼠TGF-β1、TGF-β1mRNA及c-fos基因表达的影响.方法: 建立单侧肾切除加重复阿霉素注射所诱导的肾病模型,采用病理形态学、免疫组化、原位杂交、流式细胞仪检测等方法,观察TGF-β1、TGF-β1mRNA及c-fos基因表达特点及肾络通的影响.结果: 模型组呈强阳性表达,肾络通组较模型组明显减弱.结论: 活血化瘀中药肾络通能够抑制TGF-β1、TGF-β1mRNA及c-fos基因表达,减轻肾小管间质纤维化,减缓慢性肾功能衰竭的进展.
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"慢性肾衰基本方"含药血清对人肾小管上皮细胞转分化的影响
目的:观察经验方"慢性肾衰基本方"对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的肾小管上皮细胞(TECs)转分化及细胞外基质分泌的影响,以进一步证实并初步探讨其延缓慢性肾衰竭肾小管-间质纤维化的作用机制.方法:给予家兔中药灌胃3 d后制备"慢性肾衰基本方"含药兔血清,应用不同浓度含药血清处理经TGF-β1诱导活化的HK-2细胞,然后应用免疫细胞化学方法、流式细胞技术测定HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达率;应用酶联免疫吸附检测法(ELISA)测定培养上清纤维连结蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)水平,并进而计算单个细胞FN及Col-Ⅳ分泌水平.结果:含药兔血清呈剂量依赖方式逆转TGF-β1诱导的HK-2细胞α-SMA的表达,并呈剂量依赖方式抑制单个细胞FN及Col-Ⅳ的分泌.结论:"慢性肾衰基本方"至少部分是通过抑制肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质的过度分泌而对防治肾小管-间质纤维化发挥作用.
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尿毒症患者不同分子质量血清对肾小管上皮细胞TGF-β1的表达及其意义
目的探讨尿毒症患者血清对人肾小管上皮细胞株(HK-2)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达和蛋白分泌的影响.方法收集广东医学院附属医院2002-02～2003-03在无菌条件下的40份尿毒症病人血清和20名正常人血清,应用超滤离心装置将尿毒症患者血清分离成分子质量>10 000 u,5 000～10 000 u,<5 000 u 3个组分.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HK-2细胞培养上清液TGF-β1蛋白分泌量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TGF-β1 mRNA表达.结果不同浓度尿毒血清组TGF-β1基因表达和蛋白分泌量均较正常对照组增高,以10%尿毒血清组高;分子质量>10 000 u的组分TGF-β1基因表达和蛋白分泌量高,分子质量5 000～10 000 u的组分TGF-β1基因表达轻度增高;分子质量<5 000 u的组分TGF-β1基因表达和蛋白分泌与正常对照组相比差异无显著性.结论尿毒症毒素通过影响HK-2细胞TGF-β1基因表达和蛋白分泌从而在人肾小管-间质纤维化中起重要作用,而以分子质量大于10 000 u的尿毒症毒素起主要作用.
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小鼠肾组织中SnoN蛋白表达水平与肾小管上皮细胞转分化的关系
目的:通过观察正常和单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾组织中转录共抑制因子SnoN表达水平的变化,探讨SnoN在肾小管上皮细胞转分化的作用.方法:采用结扎雄性CD-1小鼠左侧输尿管的方法建立UUO动物模型.设假手术小鼠为正常对照组.应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)水平,酸水解-比色法测定肾组织内胶原的含量.借助蛋白印迹技术,检测肾组织中SnoN和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的变化.以人肾小管上皮细胞(HKC)为体外研究对象,观察TGF-β1对其SnoN表达的直接作用.结果:与假手术组小鼠相比,UUO小鼠术后3天肾组织中SnoN蛋白的表达量即明显降低,术后7天时进一步降为对照组的16%.同时,UUO小鼠肾组织TGF-β1水平、α-SMA蛋白表达量,及其胶原的含量亦随着病程的增加而显著增加.相关分析结果表明,SnoN的减少程度与肾组织内TGF-β1水平、α-SMA的表达和胶原的聚积密切相关(P＜0.01).此外,HKC细胞培养实验结果表明,TGF-β1减低该细胞表达SnoN蛋白的作用先于α-SMA蛋白的变化.结论:肾脏SnoN表达水平与肾纤维化密切相关,可能通过干扰TGF-β1所致的小管上皮细胞转分化作用影响肾组织的纤维化过程.
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红花对肾小管间质纤维化大鼠TGF-β1、TGF-β1 mRNA及c-fos表达的影响
我们前期实验研究表明,单味红花能够保护肾功能,减轻肾小管-间质纤维化病变[1],为了进一步探讨其作用机制,本研究观察了红花对转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)、TGF-β1mRNA及原癌基因c-fos表达的影响.
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厄贝沙坦对肾小球硬化大鼠肾组织肝细胞生长因子的调节
目的:探讨厄贝沙坦对肾切除加重复阿霉素注射的方法复制的肾小球硬化模型大鼠肾组织肝细胞生长因子(HGF)分泌的调节.方法:将肾小球硬化大鼠分为厄贝沙坦治疗组和对照组,设假手术组为正常对照.检测厄贝沙坦治疗8周后的肾功能和组织病理改变,用免疫组化方法检测肾小球和肾小管-间质中HGF的表达,并用ELISA法比较各组大鼠肾组织分泌的HGF.结果:厄贝沙坦治疗组较对照组肾组织HGF的表达增加,肾组织分泌的HGF含量增加.结论:厄贝沙坦可以上调肾组织HGF的分泌,加强HGF的肾保护作用,延缓肾小球硬化,减轻肾小管-间质纤维化.
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以抗肾小管-间质纤维化为主治疗慢性肾功能衰竭40例
目的:观察以抗肾小管-间质纤维化为主治疗慢性肾功能衰竭的疗效.方法:选择符合观察条件的慢性肾功能衰竭患者80例,随机分为观察组40例,对照组40例.两组患者在基础治疗的同时,治疗组给以抗肾小管-间质纤维化为主治疗,观察两组治疗后的总有效率及血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)的变化.结果:治疗组总有效率为90.0%,Scr明显下降,Ccr明显上升,与对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论:以抗肾小管-间质纤维化为主治疗本病有明显疗效,且无明显副反应.
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BMP-7对油酸诱导的肾小管上皮细胞转分化的预防作用
目的 探讨BMP-7对油酸诱导的人肾小管上皮细胞转分化的预防作用.方法 应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞).先用不同浓度BMP-7预处理HI-2细胞,再用400ìmol/L油酸刺激HK-2细胞,采用RT-PCK法和ELISA法检测转化生长因子-a1的表达,采用RT-PCR法检测á-平滑肌动蛋白的表达.结果 不同浓度BMP-7预处理对静息培养的肾小管上皮细胞TGF-a1和á-SMA的表达无显著影响.而一定浓度BMP-7可以显著下调油酸诱导的肾小管上皮细胞TGF-a1和á-SMA的表达,并下调TGF-a1的分泌.结论 BMP-7可以预防油酸诱导的肾小管上皮细胞转分化.
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慢性肾功能衰竭的非透析治疗
慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)是各种原发性或继发性慢性肾脏病发展的共同转归,其发展的终末阶段即为尿毒症.CRF一般病情不可逆,但采用综合治疗手段对CRF进行早期防治,可延缓CRF进展,降低尿毒症的发病率,并控制相关并发症,是肾脏病学者十分关注的问题.
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"慢性肾衰基本方"对肾小管-间质纤维化防治作用的实验研究
目的: 研究"慢性肾衰基本方"的拮抗肾小管-间质纤维化(TIF)作用.方法:5/6肾切除大鼠模型给药4周,检测动物血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平;应用HE染色及PASM染色结合半定量计分法评估肾小管-间质损伤程度;应用免疫组化染色结合数码医学图象分析系统定量评判肾小管-间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白18(CK-18)、胶原I(Col-I)和纤连蛋白(FN)的表达量.结果: CRF模型未治疗组BUN、Scr水平显著较假手术组升高,肾小管-间质严重纤维化,α-SMA表达量显著上调而CK-18表达量显著下调,Col-I和FN表达量也显著上调.经"慢性肾衰基本方"治疗后CRF大鼠BUN、Scr水平显著下降,TIF指数降低,肾小管上皮细胞表达CK-18回升, Col-I、FN及α-SMA表达也有不同程度回降.结论: "慢性肾衰基本方"可通过抑制肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞、抑制肾小管-间质ECM合成而防治TIF.
