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神经管过表达BRE基因促进体节形成和分化
目的 探讨BRE基因对鸡胚胎早期体节发育的作用.方法 显微注射法将含有BRE基因的质粒注射人HH10期鸡胚神经管,活体胚胎细胞电穿孔方法转染半侧神经管,以另一侧为正常对照侧,原位杂交及免疫荧光法观察过表达BRE基因后体节的发育.结果 BRE基因在鸡胚表达始于神经板,而后高表达在脑泡、神经管及体节.过表达BRE基因后,神经管形态及PAX7和FGF8表达与对照侧相比无明显异常,而实验侧体节PAX7标记发现生皮肌节较大,FGF8表达与对照侧相比无明显异常.结论 过表达BRE基因对体节的形成和分化有促进作用,其机制可能与PAX7相关.
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钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响
目的:研究钝挫伤及力竭运动对大鼠骨骼肌卫星细胞激活及Pax7/CBF1/DAPT含量的影响,探索损伤修复的机制.方法:取7周龄雄性SD大鼠24只,分为4组,每组6只:安静对照组(C组);力竭运动即刻组(E0组);力竭运动后24 h组(E24组);力竭运动后48 h组(E48组).另取18只SD大鼠,分为3组,每组6只:钝挫伤即刻组(Do组);钝挫伤后24 h组(D24组);钝挫伤后48 h组(D48组).各组分别于安静状态、力竭运动后和钝挫伤后不同时间点,宰杀取血,分离血清.并取下右侧腓肠肌,将腓肠肌分为二份,一份立即进行细胞培养实验,另一份和血清一起在-80℃冰箱保存,用ELISA法检测Pax7、CBF1、DAPT的含量变化.另取新生3日龄鼠3只,宰杀后同样取右侧腓肠肌进行细胞培养实验.结果:(1)体外培养结果显示:新生鼠1天后即可见到梭形卫星细胞,其它各组的肌卫星细胞增长速度较慢,到第3天、第5天时各组开始大量增殖梭形细胞,且一直保持增殖良好并传代,第7天仍有较好的长势,且出现部分融合和微管.各组比较显示,安静对照组未见卫星细胞增殖;新生鼠卫星细胞数量高,增殖速度也快;而钝挫伤组的肌卫星细胞数量及增殖速度显著高于力竭运动组.(2)ELISA结果显示:力竭运动组和钝挫伤组各组骨骼肌、血清中CBF1和Pax7的含量与安静对照组相比均显著上调(P＜0.05),其中D0组的CBF1含量差异极显著(P＜0.01),明显高于其他各组(P＜0.05);D24、D48两组的Pax7含量亦明显高于其他各组(P＜0.05).而DAPT在各组骨骼肌、血清中的含量与安静对照组相比均显著下调(P＜0.05),其中D0组DAPT差异极显著(P＜0.01)且明显低于其他各组(P＜0.05).但力竭运动各组(E0、E24、E48)之间无显著性差异.结论:(1)钝挫伤及力竭运动可使肌卫星细胞激活、增殖分化,并且钝挫伤导致的肌卫星细胞的激活数量明显高于力竭运动组,可能由于钝挫伤的刺激更强所致.(2)钝挫伤和力竭运动可以使大鼠骨骼肌和血清Pax7和CBF1的含量上升,但下调DAPT的含量.Pax7和CBF1可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起着正向调节的作用,而DAPT可能起着负向调节作用.
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基因家庭Pax7与Ubc9基因编码蛋白相互作用研究
目的 了解Pax7的重要生物学功能,筛选并验证与其相互作用的Ubc9基因编码蛋白,并明确Pax7与小泛素相关修饰蛋白(SUMO)的关系,为进一步研究Pax7的作用机制奠定基础.方法 酵母双杂交系统筛选出与Pax7相互作用的基因Ubc9;GST-pull down方法验证Pax7与Ubc9在体外相互作用;Western blot方法检测Pax7的SUMO化状态;免疫共沉淀方法验证Pax7与SUMO的关系.结果 Pax7和Ubc9在酵母中存在相互作用;Pax7和Ubc9在体外可特异性结合;在Ubc9存在的条件下,Pax7呈现SUMO化状态,且可与SUMO相互作用;Pax7在鸡胚胎中也呈现SUMO化状态.结论 Pax7可以与Ubc9相互作用,且这种作用与SUMO有关.
关键词： PAX7 Ube9 小泛素相关修饰蛋白(SUMO) -
单根肌纤维法分离培养多裂肌卫星细胞及鉴定
背景:多裂肌的损伤、萎缩是临床各种腰背痛及功能障碍的主要来源之一,肌卫星细胞是肌肉干细胞,对肌肉的损伤修复起至关重要的作用.但目前尚缺少有关多裂肌卫星细胞分离培养方面的研究.目的:采用单根肌纤维法分离大鼠多裂肌卫星细胞并进行鉴定.方法:在体分离大鼠多裂肌,采用单根肌纤维法获得多裂肌卫星细胞,经反复差速贴壁法纯化,观察其形态变化并绘制细胞增殖曲线;以分化培养基进行诱导,观察其成肌分化情况;并采用免疫荧光法鉴定多裂肌卫星细胞标志蛋白Pax7、Myod、Desmin的表达.结果与结论:①单根多裂肌纤维经培养72 h后,可见肌纤维周围有大量长梭形或纺锤形细胞贴壁;②采用差速贴壁法纯化后,可见原代细胞呈圆形,高折光性,重新接种后24-48 h可贴壁,其生长呈"S"型;③以分化培养基诱导可出现较大肌管;④免疫荧光鉴定可见Pax7、Myod在肌卫星细胞的细胞核中为阳性反应,Desmin在细胞质中为阳性反应;⑤结果表明,单根肌纤维法可成功分离大鼠多裂肌卫星细胞,可用于未来多裂肌再生修复方面的研究.
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中国东北地区人群非综合征唇腭裂与PAX7基因的相关性
目的 探讨rs742071、rs7632427和rs12543318 3个单核苷酸多态(SNP)位点与非综合征唇腭裂(NSCL/P)发生的相关性.方法 收集东北地区NSCL/P患者258例,患者父亲164例,患者母亲195例,共134个完整核心家系和300例正常对照样品,用PCR-RFLP方法进行基因分型,对分型结果用SPSS统计学软件进行统计分析.结果 PAX7基因的rs742071的GT基因型和T等位基因在病例对照组中分布有统计学差异,并且FBAT分析结果显示T等位基因在核心家系中发生了过渡传递.rs7632427和rs12543318的基因分型结果无统计学差异.结论 rs742071与中国东北地区人群NSCL/P的发生相关.
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Pax7和Pax3在胎儿咽、食管肌层中的表达
目的:探讨人胎儿咽、食管肌层中Pax7、Pax3表达及其空间分布.方法:采用免疫组织化学SABC法及蛋白印迹法对20例胎儿咽、食管的Pax7、Pax3表达进行观察.结果: Pax7定位咽、食管上、中段肌层,并主要表达在外部纵行肌,由上至下逐渐减少,至食管下段消失.而Pax3则在咽、食管阴性表达.结论:胎儿食管骨骼肌的分化沿着由上至食管下端的顺序分化,Pax7存于胎儿食管上、中段,支持了Pax7阳性细胞是食管骨骼肌肌祖细胞的假设.
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体外诱导月经血间充质干细胞分化为成肌细胞
目的 探讨月经血间充质干细胞在体外可否分化为成肌细胞.方法 提取并用10％ FBS的DMEM培养液培养人月经血间充质干细胞和SD大鼠的肌卫星细胞;诱导组用肌卫星细胞培养的上清液和5-氮杂胞甙对月经血间充质干细胞进行诱导,对照组用10％ FBS的DMEM培养液培养细胞;诱导后,用免疫荧光和RT-PCR方法检测成肌细胞标记蛋白Pax7蛋白和mRNA的表达.结果 经免疫荧光检测,诱导组细胞Pax7阳性率为80.36％,与对照组比较,具有统计学意义(F=15.237,P=0.000 1);经RT-PCR检测,诱导组与对照组比较,Pax7基因呈现具有统计学意义的阳性表达(F=14.339,P=0.000 1).结论 月经血间充质干细胞在体外可分化为成肌细胞.
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失神经萎缩肌组织中卫星细胞池的耗竭与Pax7的相关性研究
目的 探讨长期失神经骨骼肌在反复增殖分化过程中,肌卫星细胞池耗竭可能的信号通路.方法 选用2月龄SD雄性大鼠9只,体重180～200 g.以大鼠右侧为实验侧,制备腓肠肌失神经支配模型;左侧为对照侧,分离显示坐骨神经后缝合肌肉皮肤.观察大鼠一般情况,于术后3、7、21 d各取3只大鼠,切取两侧腓肠肌进行大体观察后,行Pax7和MyoD免疫荧光染色观察及mRNA表达检测.结果 9只大鼠术后均存活.实验侧后肢僵直,活动受限;对照侧肢体活动自如.术后各时间点实验侧腓肠肌均出现不同程度萎缩;对照侧腓肠肌较饱满有光泽.荧光染色观察显示,随失神经时间延长,实验侧MyoD阳性细胞数逐渐增多,21 d达高峰,与对照侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05).实验侧Pax7阳性细胞逐渐降低,3、7 d与对照侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05).实验侧MyoDmRNA表达逐渐升高,21 d达高峰,各时间点实验侧均显著高于对照侧(P<0.05);实验侧Pax7 mRNA表达逐渐降低,仅出现于3、7 d,与对照侧比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 长期失神经肌萎缩引发的Pax7短暂上调提示卫星细胞池耗竭的原因之一在于细胞难以返回静止状态.
