首页 > 文献资料
-
三七总苷对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞外基质分泌及降解的影响
目的探讨三七总苷(PNS)对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞外基质(ECM)分泌及降解的影响,为临床上应用PNS延缓慢性肾衰竭(CRF)的进展提供理论依据.方法无菌条件下收集40份尿毒症病人血清和20例正常人血清,用相差显微镜、扫描电镜结合细胞角蛋白18(CK-18)免疫组化鉴定人肾小管上皮细胞株HK2.应用消化法检测HK-2细胞培养上清液中羟脯氨酸水平,ELISA方法检测HK-2细胞培养上清液中纤连蛋白(FN)、金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白分泌量,RT-PCR方法检测MMP-1和TIMP-1 mRNA表达.结果10%尿毒血清组与正常对照组相比,HK-2细胞培养上清液中胶原蛋白和FN分泌量显著增高,MMP-1/TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值降低,而PNS 400、600、800 mg/L可使尿毒血清增加的HK-2培养上清液胶原蛋白分泌量回降;200、400、600、800 mg/L可使FN分泌量回降;100、200、400、600、800mg/L可使尿毒血清降低的MMP-1/TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值回升.结论在体外实验中,PNS可降低尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞胶原蛋白及FN的分泌,升高MMP-1/TIMP-1基因表达和蛋白分泌的比值,促进ECM降解,从而有效延缓人肾小管-间质纤维化的进展.
-
三七总甙对尿毒血清诱导的HK-2细胞增殖及总胶原分泌的影响
目的:探讨三七总甙(PNS)对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及总胶原分泌的影响.方法:采用MTT比色法检测PNS对尿毒血清诱导的HK-2细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测PNS对尿毒血清作用下的HK-2细胞周期、细胞增殖指数(PI)的影响;采用消化法检测细胞培养上清中羟脯氨酸的含量,换算成总胶原分泌量.结果:MTT法示:10%尿毒血清组A490值高于正常对照组,PNS 200～800 mg/L可抑制细胞增殖,有明显的剂量依赖性.流式细胞术示:10%尿毒血清组G1期细胞低于正常对照组,PI高于正常对照组,PNS 400～800 mg/L使G1期细胞显著增高,PI显著降低;10%尿毒血清组羟脯氨酸的含量及总胶原分泌量均高于正常对照组,PNS 400～800 mg/L可降低细胞培养上清中羟脯氨酸的含量及总胶原分泌量,且随着PNS浓度的升高而降低.结论:PNS可通过抑制尿毒血清诱导的肾小管上皮细胞增殖及总胶原的分泌,从而延缓肾小管-间质纤维化进程,改善肾功能.
-
不同尿素氮水平尿毒血清对人脐静脉内皮细胞的影响
目的:观察不同BUN水平尿毒血清对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响,并探讨尿毒症患者动脉粥样硬化发病的可能机制.方法:比色法测定HUVEC上清液NO、MDA的水平;免疫细胞化学法测定胞浆iNOS表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清液iNOS蛋白水平.结果:尿毒血清各组均可上调HUVEC的MDA生成,且以BUN≥50 mmol/L的尿毒血清组对MDA上调明显(P<0.01);尿毒血清各组可下调HUVEC的NO生成,呈BUN浓度依赖性关系(P<0.01);尿毒血清各组可激活HUVEC的iNOS,诱导细胞生成大量NO,但随着BUN水平的升高,NO、iNOS呈下降趋势,BUN≥50 mmol/L尿毒血清组下降显著(P<0.01).结论:尿毒血清对HUVEC有毒性作用,呈BUN浓度依赖性关系,尤其是BUN≥50 mmol/L时,细胞损伤更为加重.
-
三七总苷对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌的影响
目的探讨三七总苷(PNS)对尿毒血清诱导的人肾小管上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达和蛋白分泌的影响,为临床上应用PNS延缓肾衰竭的进展提供理论依据.方法无菌条件下收集40份尿毒症病人血清和20例正常人血清.应用相差显微镜、扫描电镜结合细胞角蛋白18(CK-18)免疫组化鉴定人肾小管上皮细胞株(HK-2).应用ELISA方法检测HK-2细胞培养上清液TGF-β1蛋白分泌量;Western Blot方法检测CTGF的蛋白表达;RT-PCR方法检测TGF-β1、CTGFmRNA表达.结果 10%尿毒血清组与正常对照组相比,TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌量均增高(P<0.01),而PNS 400～800 mg·L-1可恢复尿毒血清所诱导的TGF-β1基因表达(P<0.01),200～800 mg·L-1可恢复尿毒血清诱导的TGF-β1蛋白分泌(P<0.01);200～800 mg·L-1可恢复尿毒血清所诱导的CTGF基因表达和蛋白分泌(P<0.01).结论在体外实验中,PNS可在一定程度上降低尿毒血清诱导的HK-2细胞TGF-β1、CTGF基因表达和蛋白分泌量,减少细胞外基质聚集,从而延缓人肾小管-间质纤维化的进展,有望成为一种能有效延缓肾纤维化进展的中药.
-
尿毒血清对HK-2细胞增殖和胶原蛋白分泌的影响
目的探讨尿毒血清对人肾上管上皮细胞侏(HK-2)增殖和胶原蛋白分泌的影响.方法在HK-2细胞培养液中加入正常人血清及不同浓度的尿毒血清,采用四氮甲基唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术测定HK-2细胞增殖活性的变化;采用消化法检测细胞培养上清中羟脯氨酸的含量,换算成总胶原分泌量.结果5%～20%浓度尿毒血清组A490值均高于正常对照组,1()%～20%浓度尿毒血清组G1期细胞均低于正常对照组,P1指数均高于正常对照组,但不同浓度尿毒血清组组间差异无统计意义;各浓度尿毒血清组羟脯氨酸和胶原蛋白含量较正常对照组增高,且随着尿毒血清浓度的升高而增高.结论慢性肾衰竭患者体内蓄积的尿毒症素可能通过促进肾小管上皮细胞增殖,促进细胞外基质的分泌,从而加速肾小管-间质纤维化进程,导致肾功能进行性恶化.
