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黄芪后处理对大鼠肝纤维化中的影响及TGF-β1/Smad2、p38MAPK作用
目的：研究黄芪对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织中TGF-β1、Smad2和p38MAPK表达的影响，探讨TGF-β信号通路在黄芪后处理中可能的抗纤维化机制。方法：60只Wistar大鼠被随机分成对照组、模型组、黄芪后处理组及鳖甲软肝片组，其中黄芪后处理组又分为小剂量组、常规剂量组和大剂量组，大鼠背部皮下注射CCl4构建肝纤维化模型，分别用HE和VG染色法染色，肝纤维化程度直接在光学显微镜下观测。同时采用SABC免疫组化方法检测各实验组TGF-β1、Smad2和p38MAPK的表达情况。结果：与对照组比较，模型组 TGF-β1、Smad2表达明显增强（P <0.05），而 p38MAPK 表达显著下降（P <0.05）。与模型组比较，黄芪后处理各组中大鼠肝组织中TGF-β1表达均有减弱（P <0.05），且随着黄芪剂量的增加而减少；随着黄芪剂量增加逐步下调Smad2的表达（P <0.05）、上调 p38MAPK的表达（P <0.05）。此外，黄芪组大鼠肝脏病理变化显著改善。结论：黄芪后处理明显影响大鼠肝组织TG F-β1信号表达，且对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用呈剂量依赖性增强，其可能的机制为负性调节TGF-β1，减少Smad2及增强p38MAPK的表达。
关键词： 黄芪 TGF-β1信号通路 Smad2 p38MAPK 肝纤维化 -
Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞在体外对肝星状细胞 TGF-β1信号传导的影响
目的：：探讨Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞( Smad7-EGFP-BMSCs)在体外抑制肝纤维化的机制。方法：分离、纯化大鼠BMSCs并经Smad7基因腺病毒质粒( Ad-Smad7-EGFP)转染建立Smad7-EGFP-BMSCs。实验将大鼠肝星状细胞HSC-T6分为A组、B组、C组和D组,分别与Smad7-EGFP-BMSCs、BMSCs、Smad7质粒及PBS进行共同培养72 h,采用ELISA测定培养液中Smad7和TGF-β1的表达,采用Western印迹法和RT-PCR法测定细胞Smad7、TGF-β1、Col Ⅰ、α-SMA蛋白和mRNA的表达,采用流式细胞术测定细胞凋亡情况。结果：(1)ELISA结果显示,B组、C组和D组培养液TGF-β1蛋白水平较A组显著降低(P<0.01),而Smad7蛋白水平较A组显著升高(P<0.01)；D组TGF-β1蛋白水平较B组和C组显著降低(P<0.01),而Smad7蛋白水平较B组和C组显著升高(P<0.01)；(2)Western印迹法和PCR结果显示,B组、C组和D组TGF-β1、ColⅠ和α-SMA蛋白和mRNA表达水平较A组显著降低(P<0.01),而Smad7蛋白和mRNA表达水平较A组显著升高(P<0.01)；D组TGF-β1、ColⅠ、α-SMA蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著降低(P<0.01),而Smad7蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著升高(P<0.01)；(3)流式细胞仪检测结果显示,B组、C组和D组HSC-T6细胞凋亡率较A组显著升高(P<0.01),而D组细胞凋亡率较B组和C组显著升高(P<0.01)。结论：Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞可通过作用肝星状细胞TGF-β1信号转导通路以及促进星状细胞凋亡而具有抗肝纤维化的作用。
关键词： Smad7 骨髓间充质干细胞 肝星状细胞 TGF-β1信号通路 细胞凋亡 -
鬼针草总黄酮对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢的影响及机制
目的 探讨鬼针草总黄酮(TFB)对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢的影响及机制.方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、TFB大、中、小剂量组和秋水仙碱阳性药对照组,采用腹腔注射猪血清诱导肝纤维化模型,造模后灌服相应的受试药物.ELISA法测定大鼠血清Ⅲ型前胶原酶(PCⅢ)、Ⅳ型胶原酶(CⅣ)含量；免疫组化法测定肝组织中Ⅰ型胶原蛋白的表达；RT-PCR技术检测肝组织中Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β1 mRNA的表达情况；Western blot检测肝组织中Smad2蛋白的表达.结果 与模型组相比,TFB能明显降低肝纤维化大鼠血清中PCⅢ、CⅣ含量,抑制肝组织中Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β1 mRNA及Ⅰ型胶原、Smad2蛋白的表达.结论TFB能明显降低免疫性大鼠肝纤维化胶原含量,其机制可能与降低TGF-β1表达进而抑制肝星状细胞活化减少胶原生成有关.
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鬼针草总黄酮对肝纤维化大鼠肝星状细胞TGF-β1信号传导通路的影响
目的 研究外源性转移生长因子-β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)对肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)的激活作用,观察鬼针草总黄酮(total flavonoids of Bidens Bipinnata L,TFB)对HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达的影响,以探讨TFB抗肝纤维化的作用及分子机制.方法 采用Collagenase Ⅳ胶原酶原位肝灌注法分离HSC,MTT法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC增殖的作用,ELISA法检测HSC自分泌TGF-β1和产生Ⅰ型胶原的影响;RT-PCR法观察分析TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2/7和Ⅰ型胶原基因表达的影响;Western blot法观察TFB对TGF-β1刺激下HSC中smad2蛋白表达的影响.结果 TGF-β1明显促进HSC增殖、自分泌TGF-β1和产生胶原,促进HSC smad2、Ⅰ型胶原mRNA及smad2蛋白的表达,明显抑制smad7 mRNA表达 (P<0.05),TFB作用后,TGF-β1刺激的HSC中smads2 mRNA、蛋白和Ⅰ型胶原mRNA表达受到抑制,smad7 mRNA表达明显上调.结论 TFB抗肝纤维化作用可能与其阻断HSC TGF-β1通路进而阻断HSC的活化、增殖有关.
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SLC7A5对肿瘤细胞增殖的影响及其与转化生长因子-β1信号调控的关系
目的:研究氨基酸转运载体基因SLC7A5(solute carrier family 7,member 5)在肿瘤细胞中发挥的生物学效应及其转录调控机制.方法:利用基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库分析SLC7A5在人正常组织和相应的肿瘤组织中的表达情况;构建SLC7A5基因的重组质粒,采用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法、流式细胞仪技术检测该基因对肿瘤细胞增殖的影响;通过生物信息学方法分析SLC7A5基因启动子及其转录因子结合位点,构建该基因的启动子质粒,并利用荧光素酶报告基因系统、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)探讨转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)对SLC7A5基因的表达调控.结果:GEO数据库分析显示SLC7A5的分布具有组织特异性,且在大多数的肿瘤组织中的表达水平明显高于相应的正常组织;MTT比色法、流式细胞仪检测结果表明SLC7A5具有促进细胞增殖的作用;通过启动子分析、载体构建、报告基因检测和RT-PCR实验证实TGF-β1可上调SLC7A5启动子的活性,从而促进该基因的表达.结论:SLC7A5基因在肿瘤细胞中发挥促癌作用,且受TGF-β1信号通路的调控.
关键词： SLC7A5基因 细胞增殖 TGF-β1信号通路 -
α-硫辛酸对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能的机制
目的 观察α-硫辛酸(ALA)对糖尿病大鼠肾脏的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 复制糖尿病大鼠模型,分为糖尿病组(DM组)、糖尿病硫辛酸组(ALA组),并设置正常对照组(NC组).实验6周后处死全部大鼠,测定相应生化指标和相关氧化应激指标;HE、Masson染色观察肾组织的形态变化;免疫组织化学和Western blot检测大鼠肾组织中核转录共抑制因子(SnoN)、转化生长因子(TGF-β1)、Collagen I、Collagen IV表达水平.结果 ①DM组大鼠肾重/体重、血糖、血总胆固醇、三酰甘油、24 h尿蛋白均高于NC组,ALA组除了血糖外以上其余指标均低于DM组.②DM组总抗氧化物酶活性(T-AOC)、总超氧化物歧化酶活性(T-SOD)、过氧化氢酶活性(CAT)低于NC组,丙二醛含量(MDA)增多;ALA组T-AOC、T-SOD、CAT活性高于DM组,MDA含量降低.③病理检查显示,DM组大鼠出现肾纤维化改变,ALA组肾纤维化病变明显改善.④免疫组织化学和Western blot结果显示:与NC组相比,DM组大鼠SnoN蛋白水平降低,TGF-β1、Collagen I和Collagen IV增高;与DM组相比,ALA组SnoN蛋白水平升高,TGF-β1、Collagen I和Collagen IV降低.结论 α-硫辛酸可以增强DM大鼠肾脏的抗氧化能力,上调SnoN蛋白的表达,从而抑制TGF-β1信号通路而减少细胞外基质沉积,对糖尿病大鼠肾脏起到保护作用.
关键词： 糖尿病肾病 TGF-β1信号通路 SnoN 氧化应激 α-硫辛酸
