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MDA-7/IL-24对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长抑制和凋亡的影响
目的 探讨IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制和促凋亡作用.方法 利用脂质体将穿梭质粒pDC316-hIL-24-EGFP瞬时转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR检测转染后hIL-24基因mRNA的转录,Western blot检测转染后IL-24和caspase-3蛋白的表达,MTT比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达.IL-2可上调MDA-MB-231细胞中caspase-3蛋白表达.IL-24基因的表达使得乳腺癌MDA-MB-231细胞出现增殖抑制.流式细胞仪检测显示MDA-MB-231细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G2/M期.Hoechst 33258染色显示IL-24基因转染后MDA-MB-231细胞出现凋亡.结论 IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后可能通过上调caspase-3的表达而抑制细胞增殖,促进其凋亡.
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白细胞介素24在直肠癌组织中的表达及意义
目的 探讨直肠癌组织中白细胞介素24(IL-24)的表达水平与其临床分化程度与分期的关系.方法 收集花都区人民医院2009年12月到2011年12月具有完整资料的直肠癌患者68例,取手术切除的癌灶蜡块组织、癌旁组织(距离肿瘤边缘2 cm外无瘤组织)、系膜内和系膜外转移淋巴结组织.采用免疫组化检测组织中IL-24基因的表达水平.结果 IL-24在直肠癌组织中的阳性表达率为58.8%(40/68),而在癌旁组织中表达为100%(68/68),IL-24在直肠癌组织中的表达随肿瘤病理分化程度的降低而下降(P < 0.05),同时随肿瘤的临床分期升高表达呈降低(P < 0.05).结论 IL-24基因的表达水平与直肠癌的分化程度和临床分期相关.
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rhLIF与IL-24基因协同诱导HL-60细胞的凋亡
目的:构建能稳定表达白血病抑制因子(LIF)的转基因细胞,并研究所表达的LIF与IL-24基因在诱导HL-60细胞凋亡方面的协同作用.方法:用真核表达质粒pcDNA3-LIF转染ECV304细胞, G418筛选阳性细胞,收集阳性细胞和培养上清,RT-PCR检测LIF mRNA的表达.同时在已转化重组腺病毒质粒的大肠杆菌中抽提质粒pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL-24,用PacI酶切使重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-IL-24腺病毒子.将重组病毒子(Ad-IL-24)感染HL-60细胞, 同时加入含LIF的培养上清,并设对照组,RT-PCR检测IL-24 mRNA表达, 光镜下观察HL-60细胞形态的变化, 激光扫描共聚焦显微镜观察细胞凋亡改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学分析凋亡因子的改变.结果:成功构建能稳定表达LIF蛋白的转基因细胞;获得高滴度的重组腺病毒Ad-IL-24,用它感染HL-60细胞后,能检测到IL-24mRNA的表达.各种检测方法表明LIF、IL-24基因都能抑制HL-60细胞生长、诱导凋亡,且两者具有协同作用.结论:LIF、IL-24基因都能抑制HL-60细胞生长,诱导凋亡,两者具有协同作用.
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抑癌基因IL-24在乳腺癌细胞中的表达及意义
目的 研究hIL-24(人白细胞介素24)对MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长抑制作用.方法 将pDC316-hIL-24-EGFP转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用RT-PCR法、Western blot法检测IL-24基因在肿瘤细胞中的表达.结晶紫染色法检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制.RT-PCR检测侵袭、转移相关基因的转录.ELISA法检测VEGF、Ang-1的分泌水平.结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞增殖有明显抑制作用.能明显下调MMP-2、MMP-9的转录.VEGF、Ang-1表达下降.结论 IL-24对乳腺癌细胞有明显的抑制生长、侵袭转移、血管生成的作用.
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IL-24抑癌基因联合大蒜素对肺癌细胞的杀伤作用
目的 探讨IL-24基因联合大蒜素对肺癌A549细胞的增殖抑制和促凋亡作用. 方法 提取前期构建的pDC316-hIL-24-EGFP质粒,转染肺癌A549细胞,分为A组:空白对照组;B组:单独大蒜素组;C组:脂质体+IL-24组;D组:大蒜素+脂质体+IL-24. 荧光显微镜下观察质粒的转染情况,结晶紫染色法和MTT法检测pDC316-hIL-24-EGFP联合大蒜素对肺癌A549细胞生长的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果 40、80 mg/L大蒜素和pDC316-hIL-24-EGFP单用24、48 h对A549细胞均有明显抑制作用,呈剂量依赖性. 低剂量大蒜素(40 mg/L)联合pDC316-hIL-24-EGFP比单用pDC316-hIL-24-EGFP作用更强(P<0. 05). 40 mg/L大蒜素、pDC316-hIL-24-EGFP和两药联用48 h,A549细胞凋亡率分别为32. 7%,39. 4%和68. 8%. 结论 pDC316-hIL-24-EGFP联合大蒜素对人肺癌A549细胞有协同抑制作用.
关键词： IL-24基因 大蒜素 联合用药 人肺腺癌A549细胞 -
荷载白介素24的溶瘤腺病毒联合达卡巴嗪对裸鼠黑素瘤的抑制作用
目的 研究荷载白介素24(IL-24)的溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合达卡巴嗪抑制裸鼠黑素瘤的作用.方法 建立裸鼠恶性黑素瘤A375细胞移植瘤模型后,分别给予ZD55-IL-24联合达卡巴嗪、ZD55-IL-24、达卡巴嗪、磷酸盐缓冲液(PBS)干预.Western印迹法检测A375细胞移植瘤组织IL-24、E1A蛋白表达.测量裸鼠肿瘤生长体积.结果 Western印迹结果表明,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪作用的裸鼠黑素瘤高效表达IL -24、E1A蛋白.接种30 d后,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪组肿瘤平均体积为(2346.5±576.0) mm3,ZD55-IL-24组为(4141.6±1348.2) mm3,达卡巴嗪组为(5230.1±922.8) mm3,PBS组为(7135.1±1002.3)mm3,ZD55-IL-24联合达卡巴嗪组与各组之间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 荷载IL-24基因的溶瘤腺病毒ZD55-IL-24联合达卡巴嗪有抑制黑素瘤增殖的作用.
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携带白细胞介素-24的增殖型腺病毒联合放疗诱导黑素瘤细胞凋亡的研究
恶性黑素瘤的预后不良性除其较高的远处转移率及侵袭能力较强外,主要因其对常规治疗手段如放化疗等敏感性较低所致[1].白细胞介素-24(IL-24)是新发现的肿瘤抑制基因,能选择性抑制黑素瘤等多种肿瘤的生长并诱导其凋亡,还可以抑制肿瘤血管形成,增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性[2].近年来,用增殖型腺病毒为载体携带基因治疗肿瘤成了科学研究的热点[3].本研究旨在观察携带IL-24基因的增殖型腺病毒ZD55-IL-24在黑素瘤细胞中的表达及联合低剂量放疗后的变化,探讨ZD55-IL-24联合放疗增强诱导黑素瘤细胞凋亡的作用.
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腺病毒介导的IL-24对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的体外抑制效应
目的 研究腺病毒介导的IL-24基因表达时NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及分子机制.方法 将Ad-IL-24重组腺病毒感染NCI-H460细胞.以Western blot法鉴定IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达；MTT法检测重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用；经Annexin-V-PE/7-AAD染色后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化；RT-PCR检测NCI-H460细胞中bax、caspase-3、bcl-2、survivin等因子的表达.结果 腺病毒介导的IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达；Ad-IL-24组对NCI-H460细胞的生长具有明显的抑制作用,Ad-IL-24能够上调bax、caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、survivin等因子的表达,诱导细胞凋亡.结论 腺病毒介导的IL-24基因在体外可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、survivin等凋亡抑制因子的表达有关.
关键词： IL-24基因 腺病毒载体 NCI- H460细胞 肺癌 -
Ad-ING4-IL-24对骨肉瘤生长抑制效应的实验研究
目的：研究肿瘤生长抑制因子4（ING4）和人白细胞介素24（hIL-24）双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞及其裸鼠移植瘤的抑癌增效作用。方法：将 Ad-ING4-IL-24腺病毒感染 MG-63细胞，用 RT-PCR 法检测 ING4和（或）IL-24基因在肿瘤细胞中的表达。 MTT 法和流式细胞仪（FCM）检测ING4和（或）IL-24基因的表达对 MG-63的生长抑制和促凋亡的影响。用骨肉瘤细胞的裸鼠移植瘤动物模型，检测 Ad-ING-IL-24对移植瘤生长的抑制作用，并通过免疫组化法检测 Bcl-2、Bax、Caspase-3等基因的表达。结果：ING4和 IL-24基因在 MG-63细胞中成功表达，并对 MG-63增殖有明显抑制作用，并能引起细胞凋亡，其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值升高有关。动物实验表明 Ad-ING4-IL-24能显著抑制移植瘤生长，瘤重抑瘤率达75．7％。免疫组化结果显示 Ad-ING4-IL-24能明显上调 Bax、P21和 Caspase-3等基因的表达，同时下调 Bcl-2和 CD34的表达。结论：Ad-ING4-IL-24在肿瘤基因治疗中是非常理想的抑癌增效载体。
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IL-24基因联合去甲斑蝥素对A549人肺癌细胞凋亡的影响
目的:研究IL-24基因与NCTD联合作用对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法:IL-24和(或)NCTD干预A549细胞24 h后,MTT法检测A549细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;Western blot法检测Bax、Bcl-2、VEGF和HSP-70蛋白表达水平.结果:IL-24联合NCTD作用24 h对A549细胞增殖抑制率为60.3％,与NCTD/IL-24组比较差异有显著性;IL-24联合NCTD作用对A549细胞凋亡率为32.5％;IL-24和(或)NCTD作用A549细胞后Sub-G1期细胞增多;NCTD/IL-24作用24 h后Bax表达上调,Bcl-2、VEGF表达下调,联合组Bax蛋白表达上调,Bcl-2、VEGF、HSP-70表达下调,尤其VEGF、HSP-70表达下调明显.结论:IL-24联合NCTD对A549细胞有协同抑制作用.
关键词： 肺肿瘤 IL-24基因 去甲斑蝥素 联合用药 人肺腺癌A549细胞 -
真核双基因表达载体pBud-TRAIL-IL-24的构建及其在宫颈癌细胞中的表达
目的:构建肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)基因和白细胞介素24( Interleutin-24,IL-24)基因的真核双基因表达载体,并观察其对宫颈癌细胞生长的影响情况.方法:采用分子克隆技术,将IL-24基因插入真核表达载体pBud-TRAIL中,构建双表达质粒pBud-TRAIL-IL-24,经酶切和测序鉴定后,转染宫颈癌HeLa细胞.荧光显微镜和免疫荧光双标技术检测TRAIL和IL-24在HeLa细胞中的表达.MTr法检测重组质粒对HeLa细胞生长状况的影响.结果:成功构建了真核双基因表达载体pBud-TRAIL-IL-24,并在宫颈癌细胞中表达；转染48 h后可见重组质粒对宫颈癌细胞生长有明显抑制作用(P＜0.05).结论:构建的双表达载体pBud-TRAIL-IL-24能在宫颈癌细胞中表达,并可有效抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,为进一步研究TRAIL和IL-24联合应用于宫颈癌的基因治疗奠定了基础.
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腺病毒介导hIL-24基因对瘢痕疙瘩表达Bcl-2等细胞因子的影响
目的:研究重组腺病毒介导hIL-24基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞表达Bcl-2、IL-6和TGF-β1的影响,探讨IL-24基因对瘢痕疙瘩的生物学作用.方法:体外培养人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞,用含有hTL-24基因的腺病毒载体感染瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA)检测人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞中的Bcl-2、IL-6和TGF-β1的表达水平.结果:瘢痕疙瘩组的Bcl-2、IL-6和TGF-β1表达水平明显高于正常皮肤组;瘢痕疙瘩感染Ad.IL-24组的Bcl-2、IL-6和TGF-β1表达水平都低于腺病毒空载体组和瘢痕疙瘩组.结论:IL-24基因可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞表达Bcl-2、IL-6和TGF-β1.
