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LIF对急性脊髓损伤后促进神经形态及功能恢复的研究进展
急性脊髓损伤是外伤性损伤中非常严重的一类疾患,伴随高致死致残率,并且有着一定的不可预知的性质,近年来由于交通事故多发,此类疾病的发病率也逐年攀升.患者通常伴有神经元的变性坏死,逐渐导致截瘫、呼吸困难、中枢高热等严重后遗症,甚至死亡.传统的治疗方案仅限于挽救部分患者的生命,但是无法满足对于患者后期的生活质量的需求,并且患者及家庭要承受巨大的经济负担和心里负担.随着科技的不断发展医疗水平也在逐渐提升,许多研究人员常年致力于开创新的治疗方法,来提高急性脊髓损伤患者的生活质量.LIF是一种多功能的细胞生长因子,近年来,大量科学实验研究都表明LIF具有一定的神经保护作用,这将会是脊髓损伤患者治疗的一个新的方向.
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LIF和bFGF对脐带间充质干细胞体外自我维持和更新的影响
目的:研究LIF联合bFGF对人脐带间充质干细胞hUC-MSC增殖、干性维持及衰老的影响.方法:实验分为4组:对照组,加入完全培养基(含10％ FBS的α-MEM)常规培养;LIF组,加入含10 ng/ml LIF的完全培养液;bFGF组,加入含10 ng/ml bFGF的完全培养液;联合组,加入含10 ng/ml LIF和10 ng/ml bFGF的完全培养液.采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)测定各组第4代hUC-MSC生长曲线;在倒置相差显微镜下观察各组hUC-MSC形态变化;β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老情况;RT-PCR检测表达情况.结果:4组细胞生长曲线均近似S形,细胞增殖速率表现为联合组＞ bFGF组＞LIF组＞对照组.对照组细胞较早出现衰老,增殖减慢;LIF组细胞早期形态维持较好,但增殖相对缓慢,后期大部分细胞衰老;bFGF组部分细胞呈衰老改变,但增殖较快;联合组细胞增殖迅速,能长期维持hUC-MSC形态特征,仅有少量衰老细胞.RT-PCR显示,LIF和bFGF均能上调PCNA、OCT4、NANOG,下调P16、P21、P53的表达,其联合作用效果更明显.结论:LIF联合bFGF不仅可以促进hUC-MSC增殖,维持其干性,而且能够延缓hUC-MSC的衰老.
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复发性自然流产患者绒毛和蜕膜组织中SOCS-3和LIF表达情况观察
目的:观察复发性自然流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)患者绒毛膜和蜕膜组织中细胞因子信号传导抑制因子-3(Suppressor of Cytokine Signaling3,SOCS-3)和白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的表达情况.方法:选取复发性自然流产患者29例为研究组,避孕失败需人工流产妇女30例为对照组,用Western-blot法分别检测各组患者蜕膜和绒毛组织中SOCS-3和LIF的表达情况.结果:研究组患者的绒膜和蜕膜组织中,SOCS-3的相对表达量较对照组显著下降(P<0.05);LIF的相对表达量明显低于对照组(P<0.05).结论:复发性自然流产发病的原因可能由患者的绒毛和蜕膜组织中SOCS-3表达水平均显著下降,引起细胞因子Th1与Th2比例失衡,从而引起胚胎免疫损伤作用和LIF表达下降使免疫保护作用减弱所致.
关键词： 绒毛膜 RSA SOCS3 LIF Western-Blot -
LIF、HOXA10及IL-6的表达与沧州地区PCOS患者不孕关系综述
多囊卵巢综合征(P-COS)是目前排卵障碍性不孕症较为常见的原因之一，近年来关于子宫内膜容受性标记物的研究已经成为不孕症研究的焦点。我们把近年来50例已婚PCOS患者和23例已婚不孕症(非PCOS)患者在月经周期第9天及排卵后第8天采集其子宫内膜标本及血清标本，采用免疫组织化学法检测内膜LIF、HOAX10的表达，采用ELISA法检测血清中IL-6的含量。探讨沧州地区PCOS患者不同组织学分期的内膜LIF、HOXA10的表达情况及血清中IL-6浓度与子宫内膜容受性的关系。为沧州地区PCOS不孕患者临床细胞因子的综合诊断及治疗提供新思路。
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LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达
目的 构建LIF慢病毒载体,转染人脂肪间充质干细胞,以此获得高表达LIF的人脂肪间充质于细胞,为LIF在人脂肪间充质干细胞介导的免疫调节效应机制研究中奠定基础.方法 以PCR扩增得到LIF基因序列,采用质粒重组技术获得载有LIF基因的重组质粒,然后用重组质粒包装慢病毒.用胶原酶消化法分离培养人脂肪间充质干细胞,然后将慢病毒转染人脂肪间充质干细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,采用流式细胞技术检测慢病毒转染率,RT-PCR及Western blot技术检测LIF的表达水平,后经SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析,计量资料均以((x)±s)表示,组间均数比较采用成对样本t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 通过PCR技术扩增得到LIF基因序列,并且成功构建带有LIF基因的重组质粒,重组质粒经限制性内切酶双酶切鉴定,得到大小为608 bp左右的条带,大小与LIF基因序列匹配,通过重组质粒转染293T细胞后获得慢病毒颗粒,滴度检测达1×108 TU/ml.成功分离得到纯度高的hASCs,慢病毒转染hASCs后,流式细胞仪检测慢病毒转染率可达90％.RT-PCR及Western blot结果经统计学分析提示,转染后LIF的表达水平明显升高.结论 携带人LIF基因的慢病毒载体可以有效转染hASCs,并且表达LIF.
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白血病抑制因子在小鼠胚胎着床机制的体外探究
目的 运用已有的小鼠体外三维着床模型观察LIF抑制状态下对胚胎着床这一过程中的影响以及其转导通路中下游STAT3和pSTAT3蛋白表达水平的变化,从而探究LIF及其转导通路在胚胎着床中的功能.方法 将小鼠内膜组织置于有不同浓度LIF抗体(0.1和1.0μg/ml)及正常IgG对照和阴性对照的培养基中预培养0.5h.然后进行内膜组织和囊胚的共培养,观察比较胚胎与内膜的黏着率的不同,并对抗体处理后的内膜进行STAT3及pSTAT3的免疫组化染色.结果 运用1.0％抗体预处理组的黏着率与正常IgG对照组及阴性对照组之间均有统计学差异.pSTAT3的表达在经LIF抗体预处理的内膜中明显高于对照组.结论 LIF在小鼠胚胎着床中起着非常重要的作用,通过LIF表达的降调节可以显著降低胚胎黏着率.LIF对胚胎黏着的作用可能是通过JAK/STAT通路中STAT3的磷酸化活化而实现的.
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子宫内膜微刺激对IVF-ET中LIF、OPN表达及子宫内膜容受性的影响
目的 通过观察体外受精-胚胎移植患者接受子宫内膜微刺激术后对胞饮突、白血病抑制因子和骨桥蛋白的影响,研究子宫内膜微刺激对子宫内膜容受性的影响.方法 在我院接受IVF-ET新鲜周期移植的不孕患者120例,分为微刺激组68例和非微刺激组52例.微刺激组在胚胎移植前一个月经周期的第3～5天对子宫内膜进行浅表机械性搔刮,非微刺激组则未进行浅表机械性刺激,同一个月经周期的黄体期两组患者均进行内膜活检.对两组患者进行临床分析,电镜下观察两组胞饮突变化,免疫组织化学技术检测子宫内膜LIF和OPN蛋白表达.结果 两组患者临床特征、控制性超促排卵(COH)情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);微刺激组与非微刺激组胚胎着床率和临床妊娠率比较,差异具有统计学意义(P<0.05);微刺激组胞饮突表达较非微刺激组更为丰富,差异具有统计学意义(P<0.05),微刺激后LIF、OPN在胞质中棕褐色染色颗粒遍布更多,染色加深,呈高表达.结论 子宫内膜微刺激可以改变胞饮突的丰富度,提高子宫内膜容受性的标志性细胞因子LIF、OPN蛋白水平的表达,提高患者胚胎着床率和临床妊娠率.
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超排卵着床期小鼠子宫内膜LIF表达与雌孕激素的关系
目的 研究超排卵对围着床期小鼠子宫内膜UF表达的影响及其与雌孕激素的关系,探讨超排卵是否影响子宫内膜容受性的形成.方法 将实验动物随机分为超排卵妊娠组和正常妊娠对照组,分别选取动情周期当天、合笼后发现阴道栓第2天、第4天、第6天、第8夫共五个时间点取小鼠子宫内膜,用免疫组化和原位杂交法测定小鼠子宫内膜LIF的蛋白表达和LIF mRNA的表达.同时分别测定小鼠血清雌、孕激素水平.结果 正常妊娠组小鼠LIF蛋白在围着床期子宫内膜上的表达动情周期较低,在妊娠之后开始上升,在妊娠第4天(即小鼠孕卵着床当天)达到高峰(P<0.05),继之在子宫内膜的表达下降.在妊娠第8天降到非孕期水平:超排卵组小鼠围着床期子宫内膜LIF蛋白随着妊娠天数而表达增加,在妊娠第2天达到高峰(P<0.05),继之在子宫内膜的表达下降,在妊娠第8天降至非孕期水平.超排卵组与对照组相比较,其在妊娠第2天的表达明显高于对照组(P<0.05),在妊娠第4天的表达明显低于对照组(P<0.05);超排卵组和对照组小鼠血清雌、孕激素浓度均随妊娠天数的增加逐渐升高.在各时间点超排卵组的雌、孕激素水平明显高于对照组(P<0.05).小鼠子宫内膜LIF蛋白的表达与雌激素水平在一定范嗣内成正相关,超过一定临界水平后呈负相关(P<0.05),而与孕激素未发现有相关性(P>0.05).结论 超排卵可能对小鼠围着床期子宫内膜LIF蛋白的表达有影响,使其表达峰值提前,由此推测影响子宫内膜容受性的建立;体内雌激素水平与同着床期子宫内膜LIF蛋白的表达有相关性,但尚不能排除孕激素水平与其有相关性,说明LIF蛋白的表达与雌激素的调控有关,并且可能存在一定的数量关系.
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白血病抑制因子调节胚胎发育与着床的研究进展
白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor, LIF)是参与调节胚胎着床过程的重要的细胞因子之一,尽管如此,LIF及其受体在不同种属动物中的表达又不完全相同,孕酮和雌激素对其分泌的调节作用在不同种属动物之间、体内外之间,甚至于同种动物也都不完全一样.LIF调节着床机理的研究正日益受到广泛的重视.
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输卵管积水对子宫内膜容受性影响的研究进展
子宫内膜是胚胎着床和生长发育的直接场所,体外受精-胚胎移植技术能否成功妊娠取决于两方面的因素:胚胎质量和子宫内膜容受性.研究发现,输卵管积水能影响与子宫内膜容受性相关的分子及基因的表达、分泌.综述输卵管积水对整合素αvβ3、白血病抑制因子(LIF)、解耦联蛋白2(UCP2)、基因HOXA10等分子和基因影响的新研究进展.
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SMYD2在反复自然流产患者子宫内膜蜕膜化中的作用及机制
目的 探讨SMYD2在反复自然流产(RSA)患者子宫内膜基质细胞和蜕膜化细胞中的表达及其对P53、LIF的调节作用. 方法 将正常人和RSA患者子宫内膜基质细胞进行体外诱导蜕膜化处理,并分为空白组、蜕膜化组、蜕膜化+抑制剂组,采用real-time PCR检测LIF、SMYD2、TRP53 mRNA,细胞免疫化学法检测SMYD2、P53、P-P53蛋白在子宫内膜蜕膜化细胞的表达及SMYD2特异性抑制剂AZ505对其表达的影响. 结果 在正常人和RSA患者蜕膜化组中,SMYD2、TRP53 mRNA表达均较空白组降低,差异有统计学意义(P<0.05).在正常人和RSA患者蜕膜化+抑制剂组中,LIF mRNA的表达比蜕膜化组增加,TRP53 mRNA的表达比蜕膜化组降低,且差异均有统计学意义(P<0.05),而SMYD2 mRNA与蜕膜化组差异无统计学意义.细胞免疫化学结果可见,正常人和RSA患者蜕膜化组细胞中SMYD2、 P53和P-P53蛋白信号均较空白组减弱,SMYD2抑制剂AZ505组正常人和RSA患者细胞中SMYD2、P53和P-P53蛋白信号均较蜕膜化组减弱. 结论 SMYD2通过对P53和LIF的调节作用而参与反复自然流产患者子宫内膜蜕膜化过程.
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鹿茸对去卵巢小鼠子宫内膜LIF蛋白表达的影响
[目的]观察鹿茸对去卵巢(ovariectomized,OVX)小鼠子宫内膜白血病抑制因子(leukemia inhibit tory factor,LIF)蛋白的表达情况.[方法]雌性小鼠去卵巢10d后,随机分为对照组和实验组.实验组用鹿茸冻干粉每天以2mg、6 mg和18 mg剂量连续给去卵巢小鼠灌胃14d,对照组为仅用等量生理盐水,通过免疫组化染色和灰度值检测来确定子宫内膜LIF蛋白的表达情况.[结果]鹿茸处理去卵巢小鼠子宫内膜LIF蛋白的表达主要定位在子宫的腔上皮细胞和腺上皮细胞,通过灰度值检测得到:2mg组、6mg组、18 mg组及对照组分别是(144.78±3.46)、(131.37±3.83)、(113.80±7.04)和(193.10±4.49).2 mg组、6 mg组和18 mg组与对照组比较均有统计学意义(P＜0.05).[结论]鹿茸促进去卵巢小鼠子宫内膜LIF蛋白的表达,并且随着鹿茸的剂量的增大而逐渐增加.
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rhLIF与IL-24基因协同诱导HL-60细胞的凋亡
目的:构建能稳定表达白血病抑制因子(LIF)的转基因细胞,并研究所表达的LIF与IL-24基因在诱导HL-60细胞凋亡方面的协同作用.方法:用真核表达质粒pcDNA3-LIF转染ECV304细胞, G418筛选阳性细胞,收集阳性细胞和培养上清,RT-PCR检测LIF mRNA的表达.同时在已转化重组腺病毒质粒的大肠杆菌中抽提质粒pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL-24,用PacI酶切使重组腺病毒质粒线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,收获Ad-IL-24腺病毒子.将重组病毒子(Ad-IL-24)感染HL-60细胞, 同时加入含LIF的培养上清,并设对照组,RT-PCR检测IL-24 mRNA表达, 光镜下观察HL-60细胞形态的变化, 激光扫描共聚焦显微镜观察细胞凋亡改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学分析凋亡因子的改变.结果:成功构建能稳定表达LIF蛋白的转基因细胞;获得高滴度的重组腺病毒Ad-IL-24,用它感染HL-60细胞后,能检测到IL-24mRNA的表达.各种检测方法表明LIF、IL-24基因都能抑制HL-60细胞生长、诱导凋亡,且两者具有协同作用.结论:LIF、IL-24基因都能抑制HL-60细胞生长,诱导凋亡,两者具有协同作用.
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鹿茸上调去卵巢小鼠子宫内膜LIF基因的表达
目的 观察鹿茸对去卵巢小鼠子宫内膜白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)基因的表达情况.方法 40只雌性小鼠去卵巢10 d后,随机分为对照组和实验组.实验组用鹿茸冻干粉每天以2、6和18 mg剂量连续给去卵巢小鼠灌胃14 d,对照组为去卵巢组,通过RT-PCR和灰度值检测子宫内膜LIF基因的表达情况.结果 鹿茸处理去卵巢小鼠子宫内膜LIF基因的表达随着鹿茸剂量的增加而逐渐增强,通过LIF和GAPDH相对灰度值比值检测得到:2、6和18 mg组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).结论 鹿茸促进去卵巢小鼠子宫内膜LIF基因的表达,并与鹿茸的剂量呈正相关.
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联检β-HCG、P、E2、LIF在异位妊娠早期诊断中的临床应用
异位妊娠的发生率近年来呈明显上升趋势,鉴于目前的诊疗技术水平,在异位妊娠发生严重内出血之前即能诊断,并得到及时治疗.但是,也有不少异位妊娠,特别是临床症状和体征不典型者,常易导致误诊.HCG测定虽是目前早期诊断异位妊娠的重要方法.但在日常工作中仅凭HCG单项检测有时尚不足以明确、及时诊断.本文用联检β-HCG、P、E2、白血病抑制因子(LIF)的结果,来分析其在早期异位妊娠诊断中的应用价值.
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抑制LIF/Stat3信号通路促进小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化
目的 研究LIF/Stat3信号通路对小鼠胚胎干细胞(mESCs)分化成心肌细胞的影响.方法 利用mESCs形成拟胚体(EBs)进行心肌分化.在野生型mESCs形成EBs的过程中加入Janus激酶(JAK)抑制剂以抑制LIF/Stat3信号通路(JAKi组).而在融合表达雌激素受体(ER)和Stat3的Stat3ER细胞株进行分化过程中添加4-羟基他莫西酚(4HT)以激活LIF/Stat3信号通路 (4HT组).用qRT-PCR检测心脏特异转录因子NKX25、α-肌球蛋白重链(α-MHC)和连接蛋白43(Cx43)以及mESCs自我更新基因oct4、nanog和Stat3下游基因socs3的表达水平.用Western blot检测和免疫荧光染色法验证α-MHC和Cx43的相对表达.结果 免疫荧光结果显示在自发搏动的EBs中出现α-MHC和Cx43的荧光,表明心肌细胞分化成功.随着分化时间的延长,NKX2.5、α-MHC和Cx43的mRNA表达量逐渐增加,至第15天时为明显,且JAKi组高于对照组(P<0.01)；对照组高于4HT组(P<0.01).而nanog、oct4随着分化时间的延长逐渐降低,且JAKi组低于对照组(P<0.05),而4HT组高于其对照组(P<0.05).Socs3的表达量在JAKi组一直较低且低于对照组,在4HT组表达较高且高于对照组(P<0.01).Western blot检测结果显示第15天的Cx43和α-MHC蛋白表达量JAKi组明显高于对照组(P<0.05),4HT组低于其对照组(P<0.05).结论 抑制LIF/Stat3信号通路促进小鼠胚胎干细胞分化成心肌细胞；激活LIF/Stat3信号通路抑制小鼠胚胎干细胞的心肌细胞分化.
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白血病抑制因子在骨性关节炎中的发病学意义
目的:探讨白血病抑制因子(Leukemia Inhibitory Factor, LIF)在实验性骨性关节炎(osteoarthritis,OA)不同时期的表达变化.阐明LIF在OA发病学中的意义.方法:设右侧膝为实验侧,采用Colombo兔实验性骨性关节炎模型;左侧膝行假手术为对照侧.于不同时间处死动物,取膝关节滑膜和软骨组织.采用光镜观察骨性关节炎不同阶段的组织学改变,以免疫组织化学技术检测LIF关节软骨和滑膜中的表达变化.结果:实验组术后42d光镜显示关节滑膜及软骨明显的OA组织学改变;实验组关节软骨细胞LIF的表达量明显高于对照组(P＜0.05;术后28d软骨细胞中LIF的表达明显高于其他时间点(P＜0.05),不同时间点实验组与对照组之间对应比较均有显著性差异(P＜0.05);实验组不同时间段滑膜细胞能不同程度的表达LIF,对照组关节滑膜细胞未见LIF表达.结论:LIF在OA软骨和滑膜细胞中的异常表达及变化具有特异性,其原因与OA不同时期软骨和滑膜细胞变性有直接关系.LIF在OA发病中起重要作用,是OA发生发展的重要介导因素之一.
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LIF对人胚神经干细胞增殖和分化的影响
目的:探讨LIF对人胚神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法:从孕24周流产胎儿脑组织中分离NSCs,并分4组培养.对照组用基础培养液,第1,2,3实验组分别于基础培养液中加入20 μg/L EGF和B27,20 μg/L LIF和B27,20 μg/L LIF、20 μg/L EGF及B27.观察细胞生长情况并在不同时间进行细胞计数.诱导细胞分化后,显微镜下观察.结果:培养3 d细胞开始分裂并聚集成球,后逐渐增大,培养10 d,第1,2,3实验组和对照组神经球形成数分别为(21.5±7.8),(23.8±5.4),(25.2±6.3)和(24.8±6.9),各组间差异无统计学意义.分化实验显示含LIF培养的神经干细胞分化少.结论:在体外,LIF能够促进神经干细胞的增殖并抑制神经干细胞的分化.
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白血病抑制因子及其受体在生殖中作用的研究现状
白血病抑制因子(LIF)是一种分泌型糖蛋白,初因其能诱导小鼠MI型白血病细胞分化为巨噬细胞和抑制白血病细胞增殖而命名.自1988年国外学者相继证实LIF抑制具有多项生长潜能的胚胎干细胞的分化并保持其增殖能力的作用以来,越来越多的研究证明LIF在胚胎的着床、生长、发育、分化等方面具有重要的作用.
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SMYD2在子宫内膜异位症中的作用
目的:探讨组蛋白甲基转移酶(SMYD2)在子宫内膜异位症(EMT)患者子宫内膜组织及基质细胞中的表达及其对p53、白血病抑制因子(LIF)的调节作用.方法:体外诱导对照组和EMT组子宫内膜基质细胞蜕膜化,蜕膜化同时应用SMYD2特异性抑制剂AZ505,即分为空白组、蜕膜化组、蜕膜化+抑制剂组,采用Real-time PCR法和细胞免疫化学法检测SMYD2,转化相关蛋白53(TRp53) mRNA和蛋白在子宫内膜蜕膜化细胞的表达及SMYD2特异性抑制剂AZ505对其表达的影响,并通过检测对照组和EMT组各时期子宫内膜组织中SMYD2、TRp53 mRNA和蛋白的表达规律,从而探究SMYD2在EMT中的作用.结果:SMYD2、TRp53 mRNA在对照组子宫内膜各时期均有表达,其中在分泌中期表达下降,而且SMYD2 mRNA在EMT组子宫内膜分泌中期表达较对照组下降,免疫荧光法可见SMYD2、p53和p-p53蛋白在分泌中期信号减弱,在EMT组MSP期SMYD2、p53和p-p53蛋白较对照组MSP期增强.SMYD2、TRp53 mRNA和蛋白的表达在对照组和EMT组基质细胞蜕膜化过程中均较各自空白组降低,应用SMYD2特异性抑制剂AZ505后,对照组细胞中SMYD2 mRNA与其蜕膜化组比较差异无统计学意义,TRp53 mRNA较其蜕膜化组降低,EMT组SMYD2、TRp53 mRNA与其蜕膜化组差异无统计学意义;对照组和EMT组SMYD2和p53、p-p53蛋白信号均较蜕膜化细胞减弱.结论:SMYD2对子宫内膜中p53和LIF有调节作用.
