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Luminex液相蛋白芯片用于研究着床窗期子宫内膜和早孕蜕膜基质细胞的细胞因子的表达谱
目的 探索着床窗期子宫内膜和早孕期蜕膜基质细胞的细胞因子谱表达及其对胚胎着床和早期妊娠的可能影响. 方法 获取着床窗期子宫内膜基质细胞(ESC)和早孕期蜕膜基质细胞(DSC)进行体外培养,采用Luminex液相蛋白芯片技术检测细胞培养上清液中15种细胞因子:肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、颗粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、颗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白因子-1(MCP-1)、受调节激活的正常T细胞排泌的因子(RANTES)和γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)的含量变化,比较两者表达的差异. 结果 DSC分泌多种细胞因子,与ESC相比,其中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IP-10、GM-CSF、G-CSF、MIP-1α、RANTES表达下调,有极显著差异(P＜0.001);IL-4表达上调,有显著差异(P＜0.01);MCP-1、IL-2和IL-12表达无明显变化.不同时期表达的细胞因子之间存在复杂的相关关系. 结论 从着床窗期子宫内膜到早孕期蜕膜基质细胞表达的细胞因子谱的水平发生变化,可能对调控胚胎着床和维持早期妊娠起着重要作用.
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细胞外基质降解酶类与胚泡着床的关系
胚泡着床是妊娠建立的第一步，须经过胚泡的定位、粘着和穿透三个阶段。近年的研究表明，滋养细胞侵入子宫内膜的方式与恶性细胞相似，一些与细胞外基质(extracellular matrix, ECM)降解有关的酶类参与了此过程。 子宫内膜基质由胶原蛋白分子构成网架，主要成分是中性粘多糖和酸性粘多糖，内有大量星形或梭形的基质细胞。在胚胎着床的过程中，子宫内膜首先发生蜕膜化反应，内膜胶原纤维部分降解，排列分散而疏松；内膜间质的组织液增多，呈暂时性水肿。胚泡的合体滋养层细胞分泌一系列蛋白酶类，降解内膜的ECM，使胚胎能够进入子宫内膜，完成着床。
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胰岛素家族与人子宫内膜的关系
人子宫内膜是卵巢激素调控的主要靶器官,近年来发现子宫内膜细胞存在多种激素的受体,并能够合成生长因子和细胞因子.它们协同甾体激素对子宫内膜的功能进行调节.胰岛素及胰岛素样生长因子系统所组成的促有丝分裂肽家族,不仅对人类的生长、发育发挥着重要的调节作用,对子宫内膜的增殖、分化、诱导蜕膜化也发挥着重要的调节作用,而且与子宫内膜疾病的发生、发展密切相关[1,2].
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白细胞介素11在哺乳动物生殖过程中的作用
白细胞介素11(IL-11)是以gp130为信号转导因子的细胞因子.IL-11受体(IL-11R)有IL-11Rα和IL-11Rβ两种同工型.IL-11与靶细胞表面的特异性受体IL-11R结合后,通过活化细胞内的JAK-STAT信号传导途径,影响基因表达,实现其生理作用.IL-11及其受体参与哺乳动物特别是雌性动物生殖过程中许多环节的调节,如在蜕膜化、胚胎着床、绒毛膜胎盘形成等过程中起着关键性调节作用.
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孕酮维持下的小鼠子宫蜕膜化内膜的变化
目的 在小鼠子宫诱导蜕膜化发生行经样变化模型中,血管反应是这一变化的重要表现之一.通过对蜕膜组织中血管结构的研究,期望对于血管结构在该模型的作用有进一步的认识.方法 制备小鼠诱导蜕膜化模型并维持孕酮水平,诱导后96 h处死并取子宫.对组织材料进行全程从系膜对侧向系膜侧连续系列石蜡切片并进行HE染色.对该系列染色切片等距取102张进行显微照相,所得图像结果进行计算机三维重组.通过CD31免疫组化判断空腔结构组成.结果 子宫中的空腔结构由CD31阳性细胞组成.三维重组后获得了三种不同的空间结构及其相互之间空间关系.结论 小鼠子宫内膜中空腔结构由内皮细胞构成,为扩张的静脉.通过三维重组清晰地定位了该结构在蜕膜整体组织的位置及其与其他成分的关系,为血管结构在月经出血和妊娠中的作用提供了有价值的信息.
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利用假孕小鼠建立小鼠行经模型的研究
目的 利用假孕小鼠建立小鼠行经模型,并与以往的小鼠行经模型做对比. 方法 NIH雌鼠与输精管结扎的NIH雄鼠晚间合笼交配,翌日晨见阴栓为假孕第0天.第3.5天于左侧子宫角注射25 μl花生油诱导蜕膜化,右侧子宫角为对照;第5.5天切除双侧卵巢(作为0 h),分别在0、8、12、16、24、32和48 h各时点行颈椎脱臼处死小鼠,收集子宫,观察组织形态学,阴道细胞学涂片观察出血情况. 结果 子宫在0 h可见广泛蜕膜化;8 h上皮有部分脱落,部分蜕膜化细胞出现核固缩;12 h子宫腔上皮基本脱落,核固缩凋亡坏死的区域继续扩大;16 h可见蜕膜化组织崩解;24 h崩解组织剥离;32 h组织开始修复;48 h组织修复完好.血清孕酮(P)浓度在切除卵巢后8 h开始快速下降,48 h降至0 h浓度的1/7. 结论 利用假孕小鼠人工诱导蜕膜化后,切除双侧卵巢可以模拟子宫内膜崩解脱落和再生.
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利用米非司酮药物建立小鼠子宫内膜行经样模型的研究
目的 利用米非司酮建立小鼠子宫内膜行经样模型. 方法 成年雌性去势NIH小鼠在花生油诱导蜕膜化后,给予米非司酮灌胃,每间隔8 h检测形态学和血清激素水平至给药后48 h,阴道细胞学检查监测出血状况. 结果 蜕膜化子宫内膜在给药后16 h崩解严重,24 h脱落,伴阴道出血;子宫内膜在24 h出现再生,至48 h基本恢复.此过程中血清孕酮水平保持不变,而雌激素水平升高. 结论 小鼠人工诱导蜕膜化后,利用米非司酮模拟孕酮的药理撤退,能够成功诱导发生行经样的改变.
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锌指蛋白KLF12抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中胰岛素样生长因子结合蛋白-1表达
目的 人子宫内膜间质细胞蜕膜化标志蛋白胰岛素样生长因子结合蛋白-1 (insulin-like growth factor binding protein-1,IGFBP-1)参与调控月经周期、排卵、蜕膜化、胚胎种植以及胎儿生长等生理过程,本研究旨在探索锌指蛋白KLF12对人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP 1表达的影响.方法 制备Ad Flag KLF12重组腺病毒,通过荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)结合重组腺病毒介导的KLF12过表达实验,阐述人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中KLF12对IGFBP 1表达调控作用.结果 成功获得滴度为2×1011 ifu/ml的重组KLF12腺病毒,该腺病毒可在人子宫内膜间质细胞中高表达Flag KLF12融合蛋白;体外分离培养的人子宫内膜间质细胞经8 Br cAMP和醋酸甲羟孕酮(medroxy progesterone acetate,MPA)联合诱导蜕膜化后,KLF12的mRNA表达随着诱导时间延长逐渐降低,72 h降低明显,较未刺激降低约70％;过表达KLF12显著抑制8 Br cAMP和MPA诱导的人子宫内膜间质细胞中IGFBP 1 mRNA的表达,并以时间依赖的方式明显抑制IGFBP 1的分泌(P＜0.01);过表达KLF12明显抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP 1启动子转录活性.结论 锌指蛋白KLF12抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP 1的表达与分泌.
关键词： KLF12 胰岛素样生长因子结合蛋白-1 子宫内膜间质细胞 蜕膜化 -
孕酮调节子宫内膜的容受性
胚胎的种植是极其复杂的过程,涉及滋养细胞在子宫腔上皮定位、粘附,胚胎侵入子宫内膜基质伴随基质细胞蜕膜化,雌、孕激素受体的沉默等一系列变化和一系列基因的上调或下调,而孕酮在这一系列变化中发挥关键作用.一、子宫内膜形态结构和功能子宫内膜是由腔上皮、腺体上皮和基质细胞组成.子宫腔上皮是由纤毛细胞和具有微绒毛的无纤毛细胞构成,纤毛与无纤毛细胞之比为1∶20至1:30,纤毛细胞散在分布在无纤毛细胞之间,其密度和超微结构在整个黄体期相当恒定,反映了这些细胞不受各种激素的影响,而无纤毛细胞在黄体期则经历一系列变化,在孕酮的作用下失去微绒毛形成胞饮突,可能成为胚胎着床的部位[1].
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胚胎植入的临床疑惑
体外受精与胚胎移植(IVF-ET)技术经历了三十年,而妊娠率还是徘徊在30％～40％之间,这很大程度上是由于胚胎植入率低,还有部分在种植后生化妊娠夭折,约20％为临床流产.目前的研究主要关注于配子、胚胎的早期发育异常,特别是植入前的非整倍体的研究和流产胚胎的染色体分析,而在内膜的接受性研究发展相对缓慢,很大程度上限于没有一个很好的人类胚胎植入模型.然而,临床上提出了诸多对胚胎植入问题的疑惑.
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妊娠期子宫蜕膜螺旋动脉重铸的机制及其影响因素研究进展
妊娠期子宫的蜕膜螺旋动脉重铸是胚胎种植和正常发育所必需的生理变化,这一过程异常将导致病理性妊娠,甚至对母胎未来疾病的发生产生影响.本综述重点详细描述妊娠期子宫蜕膜螺旋动脉重铸的机制及其影响因素,尤其是孕早期,并列举目前国内外文献有关影响子宫蜕膜螺旋动脉重铸的相关因素及其临床相关性的报道,为临床基础研究提供理论依据.
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调经孕育方药服用者血清对人子宫内膜体外培养细胞早孕相关因子表达和诱导间质细胞蜕膜化的免疫组织化学观察
目的:研究服用调经孕育方药者血清对人子宫内膜体外培养细胞5种早孕相关因子和诱导间质细胞蜕膜化的观察.方法:人子宫内膜体外培养细胞,加入服用方药前后的LH-2、LH+(7+10)实验血清作用6d后,进行免疫组织化学染色,比较分析不同血清的表达强度.结果:5种观察因子中,服药后血清作用的细胞LN、TGF、LIF、VEGF表达强度明显增强,而FGF的表达无明显变化;间质细胞蜕膜化的特异性PRL染色证实,发生蜕膜化的细胞占10%～15%.结论:服用方药后的实验血清,可明显促进体外培养的内膜细胞在生长和分化过程中4种早孕相关因子的表达,诱导间质细胞发生蜕膜化.
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调经孕育方药对人子宫内膜体外培养细胞生长发育及诱导间质细胞蜕膜化的血清药理学研究
子宫是哺乳类动物孕育胎儿的器官,性周期中,在内分泌激素的调节下,子宫内膜呈规律的周期性变化,这种变化是胚泡着床的基础.子宫内膜组织主要由上皮和间质2种细胞组成,女性月经周期中内膜的周期性变化主要就是这2种细胞和细胞间质的变化,这种变化表现了女性月经周期的各种反应,使增殖、分化、分泌和蜕膜化等得以实现.中药口服后进入体内,首先进入血液并通过血循环达到靶器官而发挥作用,子宫是该方药归经的主要靶器官之一.
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ATF4基因在小鼠胚胎围着床期子宫内膜的表达
目的 探讨转录激活因子4(ATF4)在小鼠胚胎围着床期子宫内膜中的表达规律及在胚胎植入过程中的作用.方法 妊娠0～7d小鼠子宫内膜,用RT-PCR、免疫组织化学法和Western blot分别检测小鼠内膜ATF4 mRNA及蛋白的表达；用子宫角内注射ATF4抗体进行干预.结果 1)妊娠各组小鼠子宫内膜ATF4 mRNA的表达量均显著高于未孕组d0(P ＜0.0S),且随妊娠天数的增加其表达量逐渐增高,到d4达到峰值,之后逐渐下降；2)ATF4蛋白主要在基质细胞胞质表达,其表达规律与mRNA表达规律基本一致.3)子宫角ATF4抗体注射后与对照组相比着床数明显减少.结论 ATF4在小鼠妊娠早期可能参与子宫内膜蜕膜化过程,有利于着床.
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空气诱导小鼠子宫内膜蜕膜化
目的 探讨空气对小鼠子宫内膜蜕膜化的诱导作用,建立非手术法小鼠子宫内膜蜕膜化诱导技术.方法 利用小鼠非手术法胚胎移植器,通过子宫颈向30只假孕3. 5 d小鼠单侧子宫角移植2 μl空气,诱导子宫内膜蜕膜化,观察蜕膜化子宫形态并测量其直径和重量,HE染色观察细胞形态,RT-PCR检测蜕膜化相关标记基因表达.结果 移植空气诱导25只假孕小鼠出现不同程度的蜕膜化现象.与对照侧子宫角相比,空气移植侧子宫角明显肿大、增粗、增重,子宫内膜毛细血管通透性增加,蜕膜化标记基因环氧化物水解酶-2(COX-2) 、泌乳素(Prl)3c1、Prl8a2等高表达,且细胞出现多核现象.结论 利用非手术法子宫内移植空气可以高效诱导小鼠子宫内膜蜕膜化.
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胚胎着床过程中血管生成相关因子的表达及其调控
血管生成(angiogenesis)主要在雌性生殖器官中发生,在其它器官和组织中则很少见.许多血管生成相关因子参与血管生成.在哺乳动物的胚胎着床过程中,胚胎着床位点处子宫内膜的血管通透性发生变化,随后进行蜕膜化及胎盘形成,以利于胎儿进一步发育,这些过程均与血管生成相关.本文综述了近年来关于血管内皮生长因子等血管生成因子在着床过程中的表达、调节以及作用机制.
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Wnt4,Bmp2,PRL在胚胎停育和正常早孕蜕膜中的差异性表达
目的 比较Wnt4,Bmp2,PRL在一胎早孕,二胎早孕,一胎胚胎停育,二胎胚胎停育蜕膜中的表达差异,探讨它们与早孕的关系及一胎分娩史与胚胎停育的关系.方法 选取一胎,二胎胚胎停育患者及正常一胎,二胎早孕自愿流产女性各30例,用免疫组化法检测蜕膜中Wnt4,Bmp2,PRL的表达.结果 Wht4,Bmp2,PRL在正常早孕蜕膜中的表达显著强于胚胎停育蜕膜(P＜0.01),Wnt4,Bmp2,PRL在一胎和二胎胚胎停育蜕膜中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 早孕期蜕膜中Wnt4,Bmp2的正常表达对子宫内膜蜕膜化及维持妊娠有重要意义,单纯一胎分娩史与胚胎停育无相关性.
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胚胎着床窗口的分子调控
胚胎着床是一具有双重矛盾的过程,包括免疫学和生物学两方面.前者指子宫的免疫系统和胚胎的抗原性相互作用,使着床过程和妊娠维持均能进行;后者指必须通过几种不同的机制,使一种上皮允许另一种上皮的侵入.在此过程中,子宫内膜由于孕酮的刺激而发生蜕膜化,并在雌激素和孕酮的影响下处于接受态,准备胚胎着床,其中包括生长因子、细胞因子和细胞外基质等的参与.若这些调控分子表达异常,可能会导致妊娠并发症,如早期着床失败、胚胎不完全侵入引起的产前惊厥和血管发生的延迟等[1].
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子宫内膜蜕膜化的分子细胞学机制
蜕膜对胎盘功能、胎儿生长和孕体变化起调节作用,为妊娠提供了物质基础.子宫内膜蜕膜化包括子宫腺的内分泌改变、基质细胞的分化、子宫自然杀伤细胞的积聚和血管再生.
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凋亡及凋亡相关基因Bcl-2在不同植入部位妊娠的研究进展
细胞凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD),不同于细胞坏死.凋亡参与机体细胞生长与更新的调节,与正常妊娠和病理妊娠有密切关系.目前已知与凋亡有关的基因包括促凋亡基因:Bax、Bcl-Xs、p53、C-myb与抑凋亡基因:Bcl-2,Bcl-XL、Mcl-1等等[1].其中Bcl-2是原癌基因的一种,原癌基因和肿瘤抑制基因相互作用调控着细胞的增殖、生长和死亡,同时又是一个重要的凋亡调节基因[2].其主要作用是抑制细胞凋亡,其作用机制目前认为是通过抑制线粒体对促凋亡因子的释放而抑制细胞凋亡[3].凋亡及凋亡相关基因Bcl-2在不同植入部位的表达与滋养层细胞的侵袭和蜕膜化等都有一定的关系.
