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MG132对肿瘤恶病质小鼠骨骼肌消耗及TRAF6表达的影响
目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG132对肿瘤恶病质骨骼肌消耗和TRAF6及其所调节的自噬溶酶体途径和泛素蛋白酶体途径相关因子Beclin-1、MuRF1和MAFbx基因表达的影响.方法 小鼠结肠腺癌C26细胞接种BALB/c小鼠诱导肿瘤恶病质模型.分为对照组(HC)、恶病质组(CC)和MG132治疗组(MG).监测体质量和自发性活动,于接种后第12天,每天腹腔注射给予MG组小鼠0.1 mg/kg的MG132,HC和CC组小鼠给予等量0.9％氯化钠注射液,第19天处死小鼠.称量肿瘤、左侧腓肠肌重量,检测腓肠肌横切面积,RT-PCR和Western blot检测TRAF6、Beclin1、MuRF1和MAFbx的mRNA和蛋白水平.结果 CC组小鼠去瘤体质量、自发性活动、腓肠肌重量和横切面积均显著低于HC组(P＜0.05),MG组小鼠这次指标均显著回升(P＜0.05),但仍低于HC组(P＜0.05).CC组小鼠腓肠肌组织TRAF6、Beclin1、MAFbx和MuRF1的mRNA和蛋白水平均显著高于HC组(P＜0.05),MG组小鼠这次指标均显著低于CC组(P＜0.05).结论 MG132改善肿瘤恶病质骨骼肌消耗可能与抑制腓肠肌TRAF6的表达,阻断自噬溶酶体途径和泛素蛋白酶体途径有关.
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TRAF6在B淋巴瘤细胞系NF-κΒ和AP-1信号传导通路中的作用
目的 利用人B淋巴瘤细胞系模型探讨TRAF6在调控NF-κΒ和AP-1信号系统中的作用.方法 将融合有黄色荧光素(YFP)的功能缺失型TRAF6(DN-TRAF6)质粒和小干扰RNA-TRAF6质粒转染至人类B淋巴细胞系,过夜培养后经流式细胞仪或C-418筛选阳性转染细胞,通过Western blot、ELISA等方法 研究TRAF6对NF-κΒ通路中IκBα磷酸化和转录因子(P65,P50和c-Rel)向细胞核内转移以及AP-1通路中ERK、JNK、P38磷酸化和转录因子(C-FOS,C-JUN,ATF和CREB)向细胞核内转移等的影响.结果 B细胞过度表达DN-TRAF6或转染小干扰RNA-TRAF6均可抑制IκBa和JNK的磷酸化水平以及P65、P50、c-Rel和c-Fos、C-JUN的核内转录.结论 TRAF6可选择性地作用于人B淋巴细胞的NF-κΒ和AP-1信号传导系统中部分激酶,在上述两条信号系统活化中起重要作用.
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miR-146a在大鼠神经病理性疼痛模型中的表达及其作用机制
目的 研究miR-146a对神经病理性疼痛的调控机制.方法 将大鼠随机分为:1)na(i)vve组(n=12);2)假手术组(n=12):进行大鼠双侧假手术;3)双侧慢性压迫损伤(bCCI)组(n=12):建立大鼠双侧坐骨神经结扎模型.在建模前1d及后第1、3、7和14天监测机械刺激诱发痛、热刺激诱发痛行为学指标;实时定量PCR法检测背根神经节(L4-L6) miR-146a及TNF-α受体相关因子6(TRAF6)、白介素1受体相关激酶(IRAK1)的mRNA表达水平;Western blot法检测TRAF6及IRAK1蛋白表达.结果 bCCI大鼠双足热刺激诱发痛痛阈、机械刺激诱发痛痛阈较na(i)ve组、假手术组显著降低(P＜0.05).术后第14天bCCI组miR-146a表达水平较na(i)ve组显著下降(P＜0.05).bCCI组TRAF6、IRAK1的mRNA表达水平较na(i)ve组升高(P ＜0.05);TRAF6、IRAKI蛋白表达水平较假手术组和na(i)ve组均显著增加(P＜0.05).结论 神经病理性疼痛大鼠背根神经节miR-146a表达水平下调,miR-146a可能通过过度激活其靶基因TRAF6和IRAK1发挥作用.
关键词： 神经病理性疼痛 miRNA-146a IRAK1 TRAF6 -
TRAF6,TAK1和TGF-β基因在弥漫大B细胞淋巴瘤患者化疗前后外周血单个核细胞中的表达
本研究检测弥漫大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)患者外周血单个核细胞中TRAF6、TAK1及TGF-β基因在化疗前后的表达变化,探讨化疗对TRAF6/TAK1信号通路活性的影响.采用Ct值比较法,通过SYBR Green Ⅱ实时定量PCR检测38例DLBCL患者化疗前及化疗2周期后外周血单个核细胞(PBMNC)中TRAF6、TAK1及TGF-β在mRNA的表达水平,并以12例健康人PBMNC作为对照.结果表明:DLBCL患者治疗前后PBMNC中TRAF6、TAK1和TGF-β mRNA表达水平均高于正常人.治疗前患者TRAF6及TAK1基因表达水平与正常人相比未发现统计学差异(P＞0.05),治疗后这两基因的表达明显增高,差异具有统计学意义(P＜0.05);在此同时治疗后与治疗前相比,这两基因的表达水平也具明显统计学差异(P＜0.05),且这两基因的表达水平呈明显正相关,而TGF-β基因治疗后较治疗前明显下降,差异具统计学差异(P＜0.05).结论:DLBCL患者化疗后TRAF6/TAK1信号通路的活性明显增高,而TGF-β基因治疗后则较治疗前明显下降.
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TRAF6抑制肽对肾癌细胞的抑制性能研究
目的 研究肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factors 6,TRAF6)抑制肽的载体材料对肾癌细胞特异性识别,及其对肿瘤细胞生长的影响.方法 针对TRAF6,采用固相合成法与缩合反应制设计并制备TRAF6抑制肽-硬脂酸双亲分子(DRQIKIWFQNRRMKWKK-octadecanoic acid),利用电喷雾质谱法(ESI-MS)与高效液相色谱法(HPLC)对双亲分子进行了表征.通过研究TRAF6抑制肽-硬脂酸双亲分子对肾癌细胞(786-O)与正常肾细胞(AD293)的存活率的影响,来评价其对肾癌细胞特异性的识别作用以及对正常细胞/组织的影响.结果 针对TRAF6合成了TRAF6抑制肽-硬脂酸双亲分子(DRQIKIWFQNRRMKWKK-octadecanoic acid),ESI-MS测得其相对分子质量为2 628.35,在658.2、877.1和1 315.2处的吸收峰分别为[M+4H]/4、[M+3H]/3和[M+2H]/2的离子峰,HPLC结果显示纯度可达95.84％,均可证明TRAF6抑制肽-硬脂酸双亲分子已成功制备.经过48 h的共培养,TRAF6抑制肽-硬脂酸使肾癌细胞存活率下降到74.00％;对正常肾细胞却无明显影响,其细胞存活率仍＞90％.结论 TRAF6抑制肽-硬脂酸能被肾癌细胞吞噬,并抑制肿瘤细胞生长,从而体现出一定的靶向性.
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IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响
目的 构建含有信号肽的全长IFN-λR1质粒,研究在配体IFN-λ1存在的情况下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及对NF-κB与ISRE活性的影响.方法 利用多次PCR将信号肽编码序列引入IFN-λR1序列中,构建表达载体,用免疫荧光及膜蛋白分离实验鉴定IFN-λR1的表达定位.用免疫共沉淀的方法研究IFN-λ1刺激下IFN-λR1与TRAF6间的相互作用.用双荧光素酶报告基因实验研究IFN-λR1与TRAF6相互作用后对下游NF-κB与ISRE活性的影响,采用实时定量PCR的方法检测此种作用对OAS1与Mx1基因表达的影响.结果 成功构建了含信号肽的全长IFN-λR1表达载体,细胞内表达的IFN-λR1可正确定位于细胞膜上.细胞共转染IFN-λR1和TRAF6,在免疫沉淀物中可以检测到两个蛋白同时存在.细胞内共表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-λB的激活,而共表达的TRAF6可以抑制IFN-λR1下游ISRE的活性,并下调OAS1与Mx1基因的表达.结论 证实了在IFN-λ1存在下IFN-λR1与TRAF6的相互作用及二者相互作用对各自细胞信号转导通路的影响,为TRAF6作为IFN-λ受体信号通路中的相互作用蛋白提供了新的实验依据.
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类风湿关节炎患者滑膜TRAF6表达与血清骨代谢标志物的相关性
目的：了解类风湿关节炎（ RA）患者滑膜肿瘤坏死因子受体相关因子6（ TRAF6）表达及其与血清骨代谢标志物的相关性。方法2010年4月至2012年12月在中山大学孙逸仙纪念医院采用电化学发光法检测51例确诊RA患者和102例健康对照者的血清骨代谢标志物I型前胶原氨基端前肽（ PINP）、骨钙素降解产物（ N-MID.OC）和I型胶原C末端肽（ CTX-I）的水平并分析其与临床疾病活动指标的相关性。免疫组化染色检测30例活动期RA患者滑膜TRAF6表达，评估TRAF6＋细胞数并分析其与骨代谢标志物之间的相关性。结果 RA患者血清CTX-I水平明显高于健康对照组[（0.53±0.33）×10-3比（0.33±0.16）×10-3 g/L，P＜0.01]。 RA患者血清PINP和N-MID.OC与晨僵时间、健康评估问卷HAQ评分、疼痛VAS评分呈负相关（ P＜0.05）。 RA患者血清PINP与双手平均握力呈正相关（ r＝0.296， P＜0.05）。 RA滑膜衬里层和衬里下层均见TRAF6表达，且TRAF6表达在重度滑膜炎组高于轻度滑膜炎组。 RA患者滑膜组织TRAF6表达与PINP和N-MID.OC呈正相关（r＝0.381，0.345， P＜0.05）。结论 RA患者存在骨吸收增加、骨代谢失衡，其滑膜TRAF6表达增加可能与RA代偿性骨形成增加有关，TRAF6可能通过介导滑膜炎症参与了RA的骨代谢失衡。
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1,25-(OH)2D3对DSS诱导的慢性结肠炎小鼠炎症反应的影响
目的 探究不同剂量1,25-(OH)2D3对慢性溃疡性结肠炎小鼠炎症反应TLR4信号通路中相关因子的影响.方法 9w龄雌性C57BL/6小鼠50只,适应性喂养1w后,随机分为正常组、模型组、低、中、高剂量干预组.正常组小鼠在整个实验期间自由饮用蒸馏水,其余四组在第1~7 d、15~21 d自由饮3%的DSS溶液,其余时间自由饮用蒸馏水.在实验的第15~28日,低、中、高剂量干预组小鼠每天分别灌胃含10、50、100 ng 1,25-(OH)2D30.1ml的橄榄油,正常组和模型组小鼠则只灌胃0.1ml的橄榄油.于第29日处死全部小鼠.根据小鼠的一般情况,结合结肠大体形态评分以及结肠组织病理学评分对小鼠结肠严重程度进行评估.酶联免疫吸附法检测小鼠血清TNF-α 、IL-10含量,免疫组化法检测小鼠结肠组织中VDR、TLR4、TRAF6及NF-κB1蛋白含量.结果 与模型组小鼠相比,低、中、高剂量1,25-(OH)2D3干预组小鼠结肠大体形态和组织病理学评分均低于模型组,结肠长度均长于模型组.干预后,血清TNF-α含量降低,IL-10含量有所升高,结肠组织TLR4、NF-κB1、TRAF6表达减少,VDR蛋白表达增加.结论 补充1,25-(OH)2D3可降低结肠组织TLR4、TRAF6、NF-κB1的表达,改善慢性溃疡性结肠炎,这可能与TLR4信号通路有关.
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TRAF6在TLR4信号通路介导的2型糖尿病性肾病中的作用
中国2型糖尿病（T2DM）的患病率正在逐年增高，且发病年龄逐渐趋于年轻化，其中糖尿病性肾病（diabetic nephropathy）是糖尿病主要死亡原因之一，并成为末期肾衰竭的主要病因之一。随着炎症因子和通路发病机制的逐渐完善，免疫因素在DN患者的发病过程中被越来越关注。抑制免疫炎症的应答有望成为治疗糖尿病肾病的新手段。研究证实肿瘤坏死因子相关因子6（TNF receptor－associated factor6，TRAF6）参与的TLR4（Toll－like－receptor s 4，TLR4）炎症信号通道在糖尿病肾病的免疫炎症机制及胰岛素抵抗中发挥重要作用，可为糖尿病肾病研究发病机理提供新思路，为寻找治疗或延缓糖尿病肾病药物新靶点奠定基础。
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基于TLR4信号通路探讨豨莶草对痛风性关节炎影响
目的:基于TLR4信号通路探讨豨莶草对痛风性关节炎影响.方法:将48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱组和豨莶草高(4g/kg)、中(2 g/kg)、低(1g/kg)组,对照组和模型组灌胃给予生理盐水,其他各组给予相应的药物,连续7天,第七天给药1h后向大鼠膝关节腔注射尿酸钠,建立痛风性关节炎模型,对照组不做处理,采用HE染色观察滑膜组织病理情况,ELISA检测大鼠血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量,RT-PCR测定MyD88,TRAF6,TBK1和NFκBmRNA表达.结果:与对照组比较,模型组炎性细胞浸润,滑膜细胞增生,成纤维细胞,不同浓度豨莶草组对滑膜组织炎性细胞浸润明显减少,滑膜细胞增生和成纤维细胞增生明显减轻;模型组大鼠血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量明显增高,不同浓度豨莶草组血清中TNF-α,IL-1和IL-8含量明显降低;RT-PCR结果显示模型组滑膜组织MyD88、TRAF6、TBK1和NF-κB mRNA表达明显增加,不同浓度豨莶草组能够明显降低痛风性关节炎大鼠MyD88、TRAF6、TBK1和NF-κB mRNA表达.结论:豨莶草能够明显改善痛风性关节炎症状,抑制TLR4信号通路异常激活.
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TRAF6敲低对低氧状态下IL-17调控人牙周膜成纤维细胞表达OPG及RANKL的影响
目的:探讨敲低肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)在低氧状态经白介素17(interleukin 17,IL-17)刺激表达骨保护素(osteoprotegerin,OPG)及核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)的影响.方法:将hPDLCs细胞设为常氧加IL-17组、低氧加IL-17组以及单纯低氧组,每组内分为阴性对照组(TRAF6-NC组)和干扰组(TRAF6-shRNA组).将靶向TRAF6基因的shRNA慢病毒载体(TRAF6-shRNA)感染hPDLCs,通过倒置显微镜观察病毒感染效率并用RT-PCR方法验证,用Western blot及RT-PCR方法检测分析hPDLCs低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)、OPG及RANKL的表达变化.结果:低氧加IL-17组RANKL与OPG蛋白相对表达量的比值RANKL/OPG高于常氧加IL-17组及低氧组.在低氧加IL-17条件下,与TRAF6-NC组相比,TRAF6-shRNA组RANKL表达减少,RANKL与OPG相对表达量的比值RANKL/OPG减少.结论:TRAF6参与低氧状态下IL-17刺激hPDLCs表达骨吸收分子的调控,敲低TRAF6可使低氧状态下IL-17诱导的hPDLCs表达骨吸收分子减少.
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Pellino1SUMO修饰位点突变对TRAF6介导的NF-κB信号转导的影响
目的:研究Pellino1蛋白翻译后修饰——小泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,SUMO)修饰对肿瘤坏死因子受体相关分子-6 (TNF receptor associated factor 6,TRAF6)介导的核因子κB (nuclear factor κB,NF-κB)信号转导的影响.方法:构建Pellino1 SUMO修饰位点突变的质粒,与TRAF6、泛素(ubiquitin,Ub)质粒共转染至HEK-293细胞中,荧光显微镜观察转染效率,免疫共沉淀的方法检测突变型Pellino1与TRAF6的相互结合作用;同时,检测Pellino1和TRAF6的泛素化修饰水平.采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导炎症反应,分提胞浆胞核蛋白,Western blot检测核因子κB的抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)的磷酸化和NF-κB P65的核转位,分析Pellino1蛋白SUMO修饰突变对TRAF6介导的NF-κB信号通路的影响.结果:与野生型Pellino1相比,SUMO修饰突变型Pellino1不仅增加Pellino1的自身泛素化修饰水平,而且可增加其与TRAF6的相互结合作用,并增强TRAF6的泛素化修饰;LPS刺激可增加IκBα的磷酸化和NF-κB P65的核转位,转染使Pellino1 SUMO修饰突变高表达可明显增强LPS诱导的NF-κB信号激活.结论:Pellino1 SUMO修饰突变,可通过增加Pellino1的自身泛素化修饰及其与TRAF6的结合,增强TRAF6的泛素化,终促进TRAF6介导的NF-κB信号通路的激活.
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TRAF6截短体的构建及其对NF-κB信号通路的影响
目的 构建肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)截短体,鉴定TRAF6截短体及对核因子-κB (NF-κB)信号通路的影响区域.方法 采用PCR技术扩增TRAF6 4个截短体(N1、N2、N3、C1)编码基因,分别将其构建在pFlag-CMV2重组载体,用荧光素酶报告基因方法对TRAF6 4个截短体功能活性进行验证.结果 成功将TRAF6截短体编码基因构建至pFlag-CMV2载体,截短体命名为N1、N2、N3、C1,通过荧光素酶报告基因实验证明TRAF6N3对NF-κB信号通路有增强效应.结论 TRAF6通过截短体N3区域对NF-κB信号通路产生增强效应.
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TRAF6对乳腺癌细胞中NHERF1蛋白稳定性影响的研究
目的 研究钠氢交换调控因子1(Na+/H+exchanger regulatory factor-1,NHERF1)的蛋白降解机制.方法 采用蛋白酶体抑制剂MG132处理乳腺癌细胞并检测NHERF1的蛋白和mRNA表达水平;过表达多种泛素连接酶并筛选特异性下调NHERF1蛋白表达水平的泛素连接酶;在乳腺癌细胞中梯度过表达TRAF6(TNF receptor-associated factor 6),检测TRAF6对NHERF1的蛋白和mRNA表达水平的影响;采用免疫荧光、 免疫共沉淀和GST-pull down实验验证NHERF1和TRAF6的相互作用.结果 NHERF1蛋白的稳定性受泛素-蛋白酶体途径调控;TRAF6不影响NHERF1 mRNA的表达水平,但可以通过其泛素连接酶活性下调NHERF1的蛋白表达水平;NHERF1与TRAF6两者之间存在相互作用.结论 泛素连接酶TRAF6参与了NHERF1的泛素蛋白酶体途径降解.
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复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织MyD88、TRAF6表达的影响
[目的]观察复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织MyD88、TRAF6表达的影响,探讨其治疗UC的作用机制.[方法]用三硝基苯磺酸(TNBS)法制备大鼠UC模型,并将其随机分为空白组,模型组,美沙拉秦(5-ASA)治疗组,复方青黛颗粒低、中、高剂量治疗组.确定造模成功后第3天开始各组连续灌胃给药10 d,第14天处死UC大鼠取结肠组织,用Western Blot免疫印迹法检测MyD88、TRAF6的表达.[结果]模型组MyD88、TRAF6的表达明显高于空白组(P＜0.05);复方青黛颗粒中、高剂量组及美沙拉嗪组两者的表达低于模型组(P＜0.05).[结论]复方青黛颗粒对模型UC大鼠的治疗作用,可能与抑制MyD88、TRAF6的表达有关.
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TRAF6在小鼠急性胰腺炎相关的肺损伤中的作用
目的 观察肿瘤坏死因子受体相关6(TRAF6)在小鼠急性胰腺炎相关的肺损伤中的作用.方法 雨蛙素7次腹腔注射诱导急性胰腺炎模型,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法检测TRAF6肺组织表达.也检测了肺髓过氧化物酶(MPO)的水平.结果 与对照组比较,雨蛙素注射后1h,TRAF6表达明显下调,然后在2、4、12 h开始逐渐恢复,在24 h,表达明显上调(P<0.05).在胰腺炎症早期,MPO水平明显升高(1h 477.83±30.24;2 h 797.50±34.25;4 h1255.50±126.66),12 h明显下降(608.17±30.27),24 h接近基线水平(230.50±17.69).结论 在急性胰腺炎相关的肺损伤过程中,TRAF6可能参与调节肺炎症进程.
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肿瘤坏死因子受体相关因子6在小鼠急性胰腺炎中的定量表达
急性胰腺炎(AP)的发病机制尤其是分子机制不清楚.研究显示Toll样受体4(TLR4)在AP的发病过程中起重要的作用[1].我们采用雨蛙素诱导AP模型,探讨AP过程中,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和TLR4的作用.
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shRNA沉默TRAF6基因对急性肝损伤小鼠炎症反应的影响
目的：通过 shRNA 沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6, TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验筛选针对TRAF6基因的有效小干扰 RNA(siRNA)序列,采用流体力学注射法将 pTRAF6-shRNA表达质粒转染BALB/c小鼠,24 h后重复注射1次。第2次注射后24 h,予 LPS/D-GalN 腹腔注射制备急性肝衰竭内毒素炎症模型。设正常对照组、模型对照组、空白质粒/LPS组及 RNAi/LPS组。观察各组小鼠肝脏病理变化, Real-time PCR检测TRAF6、IL-6及COX-2 mRNA的表达,ELISA检测血清 TNF-α、IL-1β及 TGF-β1水平变化,West-ern blot检测肝细胞TRAF6、NF-κB p65的表达。结果 Real-time PCR及Western blot检测显示,pTRAF6-shRNA1能有效沉默TRAF6 mRNA 及蛋白表达,其中 TRAF6 mRNA 表达较正常小鼠下降约60.13%,TRAF6蛋白表达降低约52.08%,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA检测显示各组小鼠TNF-α、IL-1β均于造模后8 h达到峰值,TGF-β1于16 h达到峰值；RNAi/LPS组小鼠血清 TNF-α、IL-1β及 TGF-β1水平明显低于同时间点模型对照组。Real-time PCR结果显示 RNAi/LPS组小鼠IL-6、COX-2及TRAF6 mRNA表达下降,与模型对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。Western blot 结果显示 RNAi/LPS 组小鼠肝组织总蛋白 NF-κB p65表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),与模型对照组无差异,而胞核 NF-κB p65明显低于模型对照组(P<0.05)。结论 pTRAF6-shRNA可能通过下调 NF-κB p65水平,抑制炎症相关细胞因子和炎性介质表达水平,从而减轻内毒素/半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤。
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TRAF6基因对宫颈癌细胞体外生物学行为的影响及其相关机制
目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)基因对于宫颈癌细胞生长、增殖、凋亡及浸润转移等生物学行为的影响,为将来人宫颈癌的生物治疗提供实验依据.方法:采用Western印迹方法检测TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki和C33A)中的表达,构建TRAF6-shRNA干扰表达载体并转染人宫颈癌Hela细胞,而后使用MTT法、流式细胞仪分析法、Transwell侵袭小室实验法等方法分析TRAF6对Hela细胞活力、周期、凋亡以及迁移等生物学行为的影响,同时检测TRAF6对其靶基因NF-κB表达的影响,以及Cyclin D1,easpase 3和MMP-9等蛋白影响.结果:TRAF6在宫颈癌细胞系(Hela,SiHa,CaSki及C33A)中高表达,TRAF6 shRNA转染组Hela细胞的活力、增殖能力以及迁移能力明显低于阴性对照组和空白对照组Hela细胞(P＜0.05),TRAF6 shRNA转染组发生凋亡的Hela细胞所占比例明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),阴性对照组和空白对照组Hela细胞的活力、增殖能力、凋亡情况以及迁移能力无明显差异；TRAF6 shRNA转染组Hela细胞中NF-κB,Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),caspase 3蛋白表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),NF-κB,Cyclin D1,caspase 3和MMP-9在阴性对照组和空白对照组表达没有明显变化.结论:TRAF6基因可能具有促进Hela细胞生长增殖及其侵袭迁移能力,抑制Hela细胞凋亡的作用,TRAF6基因的表达下调可能与人宫颈癌Hela细胞迁移能力下降、凋亡能力增加有关.
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TRAF 6在肿瘤恶病质骨骼肌炎症反应中的作用研究
目的 研究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在肿瘤恶病质骨骼肌炎症反应中的作用.方法 小鼠结肠腺癌细胞接种BALB/c小鼠诱导肿瘤恶病质模型,每天监测各组小鼠体质量,于第7、13和19天检测左侧腓肠肌组织的质量、纤维横切面积,PCR和Western blotting检测TNF-α、IL-6、TRAF6 mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组比较,随着接种细胞时间的延长,荷瘤小鼠体质量和去瘤体质量减轻(P＜0.05)；腓肠肌组织的质量减轻(P＜0.05),纤维横切面积减小(P＜0.05),TNF-α、IL-6和TRAF6的mRNA和蛋白水平均显著升高(P＜0.05),且TRAF6的水平与腓肠肌的消耗呈正相关(P＜0.05),与TNF-α和IL-6的水平正相关(P＜0.05).结论 TRAF6可能在肿瘤恶病质骨骼肌组织的炎症反应过程中起到重要的作用.
