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胃十二指肠疾病时胃液表皮生长因子及CagA幽门螺杆菌感染的关系
为探讨胃液表皮生长因子(EGF)含量变化及幽门螺杆菌(Hp)感染与胃十二指肠疾病的相关性.以幽门螺杆菌感染阳性的78比例消化性溃疡和61例慢性胃炎患者为研究对象.健康人20例作对照,观察办液EGF含量变化与胃十二指肠疾病的相关性.结果发现,消化性溃疡和浊性胃炎患者胃液EGF含量分别为175.1±103.5ng/L和240.9±182.1ng/L.明显低于政党人119.±54.1ng/L(均P<0.01)消化性溃疡患者EGF含量明显低于慢性胃炎患者P<0.01.具有CagA基因的Hp感染的消化性溃疡患者EGF含量明显低于慢性胃炎组,P<0.05.表明胃液EGF含量与Hp感染有关,尤其是具有CagA基因的幽门螺杆菌感染.
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幽门螺杆菌cagA基因探针的制备与临床应用
目的 研究cagA+Hp(幽门螺杆菌)与胃肠道疾病的关系,并探讨长臂光敏生物素标记的cagA基因探针的临床意义. 方法 构建含cagA基因片段的重组质粒克隆株,以重组质粒DNA为模板PCR扩增cagA基因片段用长臂光敏生物素标记产物DNA,对病人进行基因探针检测及PCR、尿酶试纸检测. 结果 浅表性胃炎、深度胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、慢性萎缩性胃炎及胃癌病人的检测结果是:尿酶检测阳性百分率为:70.3、72.2、77.7、69.2、25;PCR阳性百分率分别为:59.2、77.8、71.4、70.7、75、78;基因探针杂交检测阳性率分别为:48.1、61.1、70.3、70.7、66.7、66.6、72.2. 结论 cagA是胃、十二指肠疾病严重程度的标志,长臂光敏生物素标记的cagA基因探针具有特异性强、灵敏度高的特点,为临床检验中Hp强毒株分型检测的有效方法.
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cagA基因阳性幽门螺杆菌培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系GES-1生长的影响
目的研究cagA+幽门螺杆菌(Hp)培养滤液对人胃粘膜上皮细胞(GES-1)的作用及机制. 方法制备Hp培养滤液,PCR鉴定cagA基因.采用倒置显微镜、电镜、细胞生长曲线、克隆形成实验、单细胞微凝胶电泳及流式细胞仪等,观察Hp(cagA+)培养滤液对GES-1细胞的作用. 结果经Hp(cagA+)培养滤液处理的GES-1细胞,细胞核增大、畸形、核染色质变粗、核仁肥大、核分裂.生长曲线可见细胞增生活跃,增殖率195%.克隆形成试验显示细胞克隆形成能力增强,增殖率达到337.5%.流式细胞仪S期细胞比率显著高于对照组.Hp(cagA+)培养滤液可使GES-1细胞形成彗星现象. 结论 Hp(cagA+)培养滤液可以导致GES-1细胞的生长特性改变,呈现肿瘤细胞的形态学及生长特征.DNA损伤可能是cagA诱导GES-1细胞生长特性改变的机制之一.
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镇江地区H pylori的cagA基因及其3'可变区结构的变化
目的:评估镇江地区H pylori临床株的cagA基因阳性率、了解菌株CagA蛋白的可能分型、其羧端可变区EPIYA的数目以及与临床结果之间有无关联.方法:培养分离来自临床胃十二指肠疾病患者的H pylori,提取基因组DNA,通过PCR方法检测H pylori cagA基因的状况.随机选择不同病种的cagA基因阳性(cagA+)的PCR产物,通过转化质粒,进行cagA+PCR产物测序,通过ExPASY-Tranlation软件获得cagA基因相应的CagA蛋白的氨基酸序列.国际标准株NCTC11637的cagA基因以及CagA蛋白序列通过搜索NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)数据库获得.结果:60株H pylori临床株中,56例为cagA+,阳性率达93.3%.20例测序的结果表明,CagA蛋白结构可分为2种类型,19株东亚型和1株西方型.所有19株东亚型均为Yamaoka分型的A型,所有20例菌株的EPIYA的数目均为3个,与临床结果无关联.结论:cagA基因阳性率在不同病种之间无差异.镇江地区H pylori临床株的CagA蛋白的一级结构,与日本、韩国菌株一样,主要为东亚型,其CagA蛋白羧端可变区EPIYA数目均为3个,与临床结果无关联.
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cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变菌株的构建及鉴定
目的:构建cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变株.方法:运用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(kmR)连接到PCR扩增cagA基因两端区域产生的2个基因片段之间,并共同插人到pBluescript SKⅡ(-)载体的多克隆位点中,构建出带卡那霉素抗性标志的缺失突变载体pBs-cagA-mutant.将突变载体转化到含完整cagA基因的突变受体MEL-Hpylori 27菌株中.卡那霉素筛选出cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变株,并经PCR和DNA测序鉴定.结果:构建的突变载体经限制性内切酶酶切分析显示,产生的条带与设计结果完全一致.PCR方法扩增突变株cagA,kmR基因显示,cagA基因已被完整敲除掉,DNA测序证实筛选得到了cagA基因缺失的幽门螺杆菌突变株.连续培养25代后证实,幽门螺杆菌突变株具有良好稳定性.结论:首次成功构建出1株中国人来源的、cagA基因缺失的幽门螺杆菌突变株.
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幽门螺杆菌CagA及VacA基因的研究进展
幽门螺杆菌(Hp)为革兰染色阴性菌,定植于胃粘膜表面,如果不给予治疗,Hp感染可持续数十年甚至终生[1,2]Hp感染是引起慢性胃炎、十二指肠溃疡和胃溃疡的主要病因,并且是胃癌和胃淋巴瘤发生的一个主要危险因素.然而,感染了Hp的人群中大约只有15%的人发生这些疾病,造成上述不同结果的机制尚不十分清楚[3].感染了Hp人群的发病,除了与宿主基因易感性和环境因素有关外,还与所感染Hp菌株的毒力有关4近年随着分子生物学研究技术的发展,发现Hp菌株在基因水平存在差异.Hp的某些菌株具有细胞毒素相关基因(CagA)及空泡细胞毒素基因(VacA),并且,CagA及VacA基因的存在与否与上述胃肠疾病的发生有关[5].现就目前对HpCagA,VacA基因的研究现状作简要概述.
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荧光探针法检测胃镜活检标本幽门螺旋杆菌的可靠性分析
目的:分析荧光PCR (TaqMan探针)法检测胃镜活检石蜡标本幽门螺杆菌(HP)的重复性和可靠性.方法:对2014年1月～12月送检的11990例胃镜标本进行HP分型、鉴定检测,并将实验结果与病理进行相关性分析.从这些样本中随机抽取792例标本重复实验,分析2次结果的一致性.结果:11990例HP检测中,阳性结果和阴性结果各占31.68％和68.32％.其中Ⅰ型HP占95.21％,Ⅱ型HP占4.79％.阳性强度:1+、2+、3+各占24.99％、42.92％和32.09％.HP的分型和阳性强度与病变的性质相关(P＜0.05,P＜0.01).随机抽样重复的结果与第1次实验在鉴定、分型上具有很好的的一致性(87.37％、97.79％),在阳性强度上具有较好的一致性(68.35％).石蜡组织放置一段时间后,检测的阳性强度可能会有所下降.结论:胃活检标本检测HP时,荧光PCR法是一种重复性好、可靠的检测方法.
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仁术健胃颗粒对慢性萎缩性胃炎患者幽门螺杆菌及其cagA基因的影响
[目的]观察仁术健胃颗粒对慢性萎缩性胃炎(CAG)患者幽门螺杆菌(Hp)及Hp-cagA基因的影响,进一步探讨其治疗机制.[方法]选择符合CAG伴Hp感染气虚热郁证的患者共128例,随机分为治疗组85例,cagA阳性者53例;对照组43例,cagA阳性者29例.治疗组予仁术健胃颗粒1包,冲服,3次/d,对照组予胃复春4片,口服,3次/d.观察治疗前后临床症状、胃镜征象、病理、Hp及Hp-cagA基因的变化.[结果]治疗组临床、胃镜、病理有效率分别为91.8%、71.8%、65.9%,对照组分别为86.0%、55.8%、41.7%,治疗组胃镜、病理有效率高于对照组,有统计学意义(P＜0.05);治疗组Hp的根除率、有效率分别为36.5%(31/85)、77.6%(66/85),对照组为30.2%(13/43)、69.8%(30/43),无统计学意义(P＞0.05);但治疗组Hp-cagA基因阴转率(64.2%,34/53)高于对照组(41.4%,12/29),有统计学意义(P＜0.05).[结论]仁术健胃颗粒对CAG有一定的治疗作用,其作用机制可能与根除Hp,减轻、削弱Hp毒力有关.
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255例饮食从业人员感染幽门螺杆菌的风险分析
目的:为了分析饮食从业人员感染和传播胃幽门螺杆菌的风险.方法:利用PCR技术对从事饮食行业的人员255例(包括炊事员、饭店服务员)唾液中胃幽门螺杆菌特异性 CagA 基因进行检测.结果:胃幽门螺杆菌CagA 基因检测阳性率为63.1%(161/255);男性中胃幽门螺杆菌CagA 基因检测阳性率为46.2%(61/132),女性中胃幽门螺杆菌CagA 基因检测阳性率为81.3%(100/123),二者比较差异显著(P＜0.01);35岁以上者胃幽门螺杆菌CagA 基因检测阳性率为50.0%(50/100),35岁以下者胃幽门螺杆菌CagA 基因检测阳性率为71.6%(111/155),二者比较差异显著(P＜0.01).结论:饮食行业的人员中存在较高的胃幽门螺杆菌感染风险性及其传染性,尤其是女性和年纪较轻的饮食行业的人员.
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淮南地区矿工幽门螺杆菌vacA、cagA基因分布特征
[目的]研究淮南地区煤矿工人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)vacA、cagA基因分布特征.[方法]选择经胃镜及病理组织检查诊断证实有相关胃、十二指肠疾病的349名矿工为研究对象,取其胃窦部活检黏膜作H.pylori的分离培养,利用聚合酶链反应技术(PCR)测定分离培养出H.pylori菌株的vacA、cagA基因,并进行分型.[结果]349份样本中共分离培养出244株H.pylori菌株,其中慢性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡及十二指肠溃疡幽门螺杆菌培养阳性率分别为61.61%(69/112)、61.54%(48/78)、75%(72/96)及87.30%(55/63);基因测定结果显示,244株H.pylori菌株临床分离株中,84.84%(207/244)含vacA基因,73.36%(179/244)含cagA基因;其中慢性胃炎、萎缩性胃炎、胃溃疡及十二指肠溃疡cagA、vacA基因检出率分别为66.67%(46/69)、50.72%(35/69)、85.42%(41/48)和70.83%(34/48)与93.06%(67/72)、84.72%(61/72)、96.36%(53/55)和89.09%(49/55),4种疾病间差异均具显著性(P＜0.01).进一步分型发现,慢性胃炎、萎缩性胃炎,胃溃疡及十二指肠溃疡患者中vacA+、cagA+分别为44.93%(31/69)、66.67%(32/48)、79.17%(57/72)、87.27%(48/55),差异具显著性(χ2=30.80,P＜0.01).vacA+、cagA+菌株主要多见于损害较严重的胃黏膜表面,如萎缩性炎症、炎性坏死等,23例腺体不典型增生的胃黏膜表面均为vacA+、cagA+菌株.[结论]淮南地区矿工H.pylori感染多为vacA+、cagA+菌株,vacA+、cagA+H.pylori菌株为高毒力菌株,且与较严重的胃黏膜病理改变有关,可能是导致矿工慢性胃炎、消化性溃疡的重要因素,临床应充分重视H.pylori菌株毒力因子的监测.
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上海崇明地区幽门螺杆菌cagA基因多态性与感染临床结局的关系
目的 探讨上海崇明地区幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的cagA基因的多态性与感染临床结局的关系.方法 采用PCR法检测100株临床分离株cagA基因亚型,获得东亚型和西方型2种基因型.分析cagA基因亚型与消化道疾病间的关系.结果 100株Hp中72株检出cagA基因,其中81.9％为cagA基因东亚型,15.3％为西方型,2.8％为同时存在着2种基因型.胃癌与慢性萎缩性胃炎患者中cagA基因东亚型菌株均显著高于胃溃疡、十二指肠溃疡患者,而十二指肠溃疡cagA基因西方型菌株的比率显著高于其余4种疾病类型.结论 本地区感染Hp以cagA基因东亚型为主,cagA基因东亚型菌株与胃癌、慢性萎缩性胃炎密切相关,而cagA基因西方型菌株与十二指肠溃疡密切相关.推测cagA基因多态性对由Hp引起的感染性疾病的发病机制可能起一定的作用.
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上海市崇明地区幽门螺杆菌耐药性分析及cagA基因检测
目的 探讨上海市崇明地区含细胞毒素相关基因A(cagA)的幽门螺杆菌(Hp)的感染情况及cagA基因与Hp的耐药性关系.方法 对150株临床分离菌株,采用PCR法检测Hp的cagA基因,同时采用纸片扩散法作药敏试验.结果 崇明地区Hp对甲硝唑、替硝唑、阿莫西林、克拉霉素、阿奇霉素和呋喃唑酮的耐药率分别为32%、10、2、0、0和0.78.7%的Hp菌株含有cagA基因.结论 本地区阿莫西林、阿奇霉素、呋喃唑酮可作为根除Hp的首选药物.本地区Hp感染以Ⅰ型菌株为主,含cagA基因Hp菌株对甲硝唑耐药率明显低于不含cagA基因Hp菌株.
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CagA+幽门螺杆菌与胃黏膜上皮细胞凋亡的分子研究
目的:观察CagA+Hp对胃黏膜上皮细胞凋亡的影响,进而探讨CagA+Hp增加胃癌发生危险性的机制.方法:以TUNEL染色法研究30例CagA+Hp阳性患者Hp根除前后胃黏膜上皮细胞凋亡的情况;通过免疫组织化学法和RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达.结果:CagA+Hp阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数为13.42%,Hp根除后,胃黏膜上皮细胞凋亡指数降为4.8%,较治疗前明显减少(P＜0.01),而CagA+Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数无明显减少(P＞0.05);bcl-2蛋白表达阳性的CagA+Hp阳性患者Hp根除后,胃黏膜上皮细胞bcl-2蛋白表达阳性明显增多(P＜0.01),且胃黏膜上皮细胞bcl-2的mRNA表达明显增强(P＜0.01),而CagA+Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞bcl-2蛋白表达和mRNA表达无明显增强(P＞0.05);bax蛋白表达阳性的CagA+Hp阳性患者Hp根除后,胃黏膜上皮细胞bax蛋白表达阳性明显减少(P＜0.01),且胃黏膜上皮细胞bax的mRNA表达明显减少(P＜0.01);而CagA+Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞bax蛋白表达和mRNA表达无明显减少(P＞0.05).结论:诱导胃黏膜上皮细胞凋亡是CagA+Hp参与胃癌发生的机制之一,CagA+Hp通过下调bcl-2的表达、促进bax的表达诱导胃黏膜上皮细胞凋亡.
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幽门螺杆菌对胃上皮细胞分泌IL-8的影响
目的:了解幽门螺杆菌(Hp)对胃上皮细胞分泌IL-8的影响.方法:将Hp与胃上皮细胞共同孵育24 h,ELISA 法检测上清液中IL-8的浓度.结果:Hp可直接诱导胃上皮细胞分泌IL-8;热灭活、甲醛溶液固定后的菌株该作用明显减弱(P<0.01); 含有细胞毒素相关基因A(cagA)株的诱导作用大于不含cagA株,差异明显(P<0.05).结论:Hp能够刺激胃上皮细胞分泌IL-8;这可能与细菌是否含有cagA有关.
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反流性食管炎患者的幽门螺杆菌感染
目的探讨幽门螺杆菌在反流性食管炎发病中的作用.方法选择有典型反流症状的患者并经胃镜检查诊断为反流性食管炎53例作为病例组,无典型反流症状的患者并经胃镜检查诊断为慢性胃炎25例作为对照组,分别取食管下端黏膜及胃窦黏膜各3块,并分别行快速尿素酶试验、病理Hp检查和Hp培养,食管及胃窦黏膜Hp菌株应用PCR方法行cagA基因、vacA基因检测.结果病例组、对照组中食管黏膜的Hp阳性率分别为14/53(26.4%)、8/25(32%),两者差异无显著性(P＞0.05);胃窦黏膜的Hp阳性率分别为20/53(37.8%)、16/25(64%),两者差异有显著性(P＜0.05);病例组中胃窦黏膜Hp的cagA+检出率(6/20,30%)明显低于对照组(10/16,62.5%)(P＜0.05),而vacA+检出率分别为6/20(30%)、7/16(43.8%),两者差异无显著性(P＞0.05).不同程度食管炎中食管黏膜Hp阳性率差异无显著性(P＞0.05),胃窦黏膜Hp阳性率差异有显著性(P＜0.01),而cagA+及vacA+的Hp菌株的差异无显著性(P＞0.05),但cagA+菌株多见于程度轻的食管炎.结论食管黏膜中检测到的Hp可能来源于胃窦黏膜的Hp,胃窦Hp感染、尤其是cagA+的Hp感染可能在RE的发生中有一定的保护作用.
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甲硝唑耐药幽门螺杆菌的rdxA基因突变特征与影响因素
目的 探讨甲硝唑耐药幽门螺杆菌(Hp)的rdxA基因突变的分子特征,分析疾病及细菌毒力基因变异对耐药的影响.方法 从胃窦粘膜标本分离培养Hp,用琼脂稀释法药敏实验检测Hp对甲硝唑的敏感性;用PCR扩增Hp甲硝唑耐药基因rdxA、毒力基因cagA和vacA,PCR产物直接测序后进行序列比对分析.结果 共分离出101株Hp,耐药株占43.6％,胃癌相关Hp菌株甲硝唑耐药率(33.3％)显著低于胃炎相关菌株(55.3％),差异有统计学意义(x2=4.94,P=0.029);Hp毒力基因分型(cagA+/-、vacA各亚型)在敏感株和耐药株中的分布差异无统计学意义;序列分析表明,95.5％的Hp甲硝唑耐药株由插入/缺失核苷酸序列导致移码突变造成rdxA基因失活,59.1％的插入/缺失突变发生在单核苷酸重复序列位置.结论 rdxA的单核苷酸串联重复序列区域发生插入/缺失是引起基因突变失活,导致Hp甲硝唑耐药的主要机制.
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消化性溃疡患者幽门螺杆菌cagA基因检测与分析
目的 建立扩增幽门螺杆菌(Hp)cagA基因的高特异性方法,结合生物信息学方法分析并阐明cagA基因结构特点及地域起源特征.方法 在GenBank检索并下载cagA目标基因序列,设计引物.从消化性溃疡患者胃黏膜组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,分段、多轮PCR扩增目的基因,ABI3500xl测序仪测定PCR产物核酸序列,ATCG基因分析软件拼接基因序列,ClustalX1.8序列分析软件比对参考序列和患者PCR扩增产物序列,Bioedit及Megalign基因软件分析核苷酸序列同源性,Mega4.1基因软件对分析序列构建进化树.结果 24例胃溃疡患者中有4例胃黏膜扩增出cagA基因片段.20例十二指肠溃疡患者中有2例胃黏膜扩增出cagA基因,均成功测序,命名为XA-cagA2-2.与本研究中目的基因同源性较高(同源性91.8％ ～ 97.0％)的菌株来源于泰国-菲律宾岛、日本冲绳岛人群菌株,进化关系较近的为泰国-菲律宾岛菌株、秘鲁亚马逊河的美国印第安人菌株以及日本冲绳岛菌株.结论 本研究建立的方法成功扩增出cagA目的基因全长序列,成功进行测序、同源性分析和进化树分析,为陕西省Hp cagA基因多态性及地域性特征研究提供理论基础.
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耐甲硝唑幽门螺杆菌cagA基因检测与rdxA基因突变研究
目的 研究cagA基因、rdxA基因变异与幽门螺杆菌(Hp)甲硝唑耐药的关系.方法 收集临床分离Hp 180株,用E-test法检测对甲硝唑的低抑菌浓度(MIC),PCR扩增cagA、rdxA基因,并对rdxA基因进行测序.结果 幽门螺杆菌对甲硝唑的耐药率为43.3%,其中甲硝唑高水平耐药菌54株,占69.2%;rdxA基因突变率为56.7%;cagA阳性菌中高耐药菌所占的比例和rdxA基因的突变率均明显高于cagA阴性菌.结论 本地区幽门螺杆菌感染以高毒力茼株为主,rdxA基因突变在cagA基因阳性菌对甲硝唑产生高水平耐药可能起一定作用.
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镇江地区胃肠病患者幽门螺杆菌vacA基因i、d区分型特点及临床关联
目的:研究镇江地区胃肠病患者感染的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)的主要毒力因子vacA基因i、d型的分布特点、cagA基因状态,以及与临床结果的相关性.方法:选取快速尿素酶试验和(或)组织学染色H.pylori阳性患者的胃窦活检黏膜,PCR法检测H.pylori cagA基因状态、vacA基因的s、m、i、d区分型.结果:179例H.pylori患者,2例为混合感染(1.1％,2/179),剔除后,i1、i2亚型分别为96.6％ (171/177)、1.1％ (2/177)；d1、d2亚型分别为98.9％(175/177)、1.1％ (2/177)；cagA阳性率为97.7％ (173/177)；s1/m2/i1/d1型为优势基因型(56.5％,100/177),s1/m1/i1/d1型次之(38.4％,68/177).s2/m2型与i2、d2型相关(P＜0.05),s1、i1、s1/i1型及cagA阳性均与d1型相关(P均＜0.05).比较vacA基因的s、m、i、d分型及cagA基因状态在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌中的分布,差异无统计学意义(P均＞0.05).结论:镇江胃肠病患者感染的H.pylori菌株,96.6％表现为i1亚型、98.9％为d1亚型,vacA s1/m2/i1/d1/cagA(+)为优势基因型；幽门螺杆菌基因型之间存在关联；vacA基因型、cagA基因状态与胃肠疾病的分布无相关性.
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幽门螺杆菌毒力因子的研究进展
幽门螺杆菌与多种胃部疾病有密切的关系,人群感染率在50%以上.幽门螺杆菌可表现为多重感染,感染后治愈较为困难,可能与其复杂的多因素致病机制相关.虽然疾病的发生和严重程度与宿主、环境因素有关,但其各种毒力因子的遗传多样性亦起到重要作用.现已发现幽门螺杆菌有多种毒力因子,分别由不同的基因编码.对该菌全基因测序工作的完成,为探讨毒力基因及其相关功能提供了研究基础.cagA、vacA、ure是非常重要的毒力基因,分别编码细胞毒素相关蛋白、细胞空泡毒素和尿素酶.在不同菌株中,几种基因的表达各不相同,从而表现出不同的毒力,引起不同的临床表现.
