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急性递增负荷运动对大鼠心肌JAKs及SOCS1表达的影响
目的 测定JAK家族成员以及SOCS1在运动后心肌的表达,以探讨它们在运动心肌JAK/STAT信号通路中可能的相互作用.方法 雄性SD大鼠进行递增负荷跑台运动,采用免疫组化法观察运动后0、1、3、5、12和24 h心肌JAK1、JAK3和SOCS1的表达.结果 运动后即刻大鼠心肌细胞JAK1的表达显著加强,并持续到运动后24 h;而大鼠心肌细胞JAK3及SOCS1的表达在运动后1～5h显著降低,两者在运动后12 h恢复到安静水平.结论 急性运动中,JAK1和JAK3对运动心脏功能的调节可能作用不同,SOCS1可能参与了运动心肌JAKs/STAT3信号通路的调节过程.
关键词： 运动 心肌 JAK酪氨酸蛋白激酶 细胞因子信号抑制因子1 -
细胞因子信号转导抑制因子1在脓毒症小鼠肝脏中的表达
目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子-1 (SOCS-1)的含量在脓毒症小鼠肝脏中的变化情况以及可能的作用机制.方法 采用盲肠结扎并穿刺术(CLP)制作脓毒症模型,将成年雄性BALB/c小鼠随机分为8组,包括健康对照组(N),假手术组,术后2,6,12,24,48 h处死组.提取各组肝脏组织的RNA及蛋白质,采用RT-PCR测定组织中SOCS-1 mRNA的相对含量,用免疫印迹方法测定相对蛋白含量,用SPSS统计软件测定它们之间的变化关系.观察脓毒症时肝组织病理改变,免疫组织化学检测SOCS1在肝脏的表达.结果 CLP术后SOCS-1在肝脏内的基因表达和蛋白表达都在第6h迅速升高,基因表达至24h到顶峰(P＜0.05),蛋白表达一直保持高位,脓毒症时肝组织可见脂肪变性、坏死等病理改变,免疫组织化学可见SOCS-1的表达.结论 由CLP导致的脓毒症可诱导SOCS-1在肝脏中表达增多.
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SOCS1对CD4+T细胞分化的影响及其在桥本甲状腺炎中的作用
目的 探讨细胞因子信号抑制因子(SOCS)1对桥本甲状腺炎CD4+T细胞分化的影响.方法 从桥本甲状腺炎(HT)患者中分离CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞,分为pEF-FLAG-1空载体对照组、SOCS1转染组、信号转导与转录激活因子3(STAT3)沉默组、SOCS1转染+STAT3沉默组.在CD4+T细胞中采用基因转染技术上调SOCS1的表达,沉默STAT3基因,流式细胞术检测辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)和滤泡辅助性T细胞(Tfh).荧光定量PCR检测CD4+T细胞视黄酸相关的孤儿受体(ROR) γt mRNA、转录因子叉头蛋白3(FoxP3) mRNA、B细胞淋巴瘤分子6(Bcl6)mRNA.ELISA检测白细胞介素(IL)-6、IL-17、IL-23、IL-21、转化生长因子(TGF)β1的水平.Western印迹法检测SOCS1和STAT3的蛋白水平.结果 SOCS1转染CD4+T细胞后,抑制Th17和Tfh(=8.63、7.66,P均＜0.01).SOCS1抑制RORγt mRNA和Bcl6 mRNA,同时促进FoxP3 mRNA的表达(=14.38、8.86、9.46,P均＜0.01).与SOCS1转染组和pEF-FLAG-1空载体对照组相比,SOCS1转染+ STAT3沉默组对IL-6、IL-17、IL-23、IL-21的抑制和对TGFβ1的促进更明显(=8.64、11.02、9.76、12.18、14.08,P均＜0.01).SOCS1转染组STAT3蛋白水平下降(t=5.12,P＜0.05),SOCS1转染+STAT3沉默组STAT3蛋白水平显著低于pEF-FLAG-1空载体对照组(t=4.78,P＜0.05).结论 SOCS1通过抑制STAT3调控T细胞的分化,可能与HT的发病机制有关.
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细胞因子信号抑制因子1基因真核高表达质粒的构建及其在NOK细胞中的表达
目的 构建细胞因子信号抑制因子1(suppressors of eytokine signaling 1,SOCS1)基因真核高表达质粒,并在口腔上皮细胞系NOK细胞中进行表达.方法 提取健康人外周静脉血基因组DNA,PCR扩增SOCS1基因,与pEGFP-N1载体连接,构建重组真核表达质粒pEGFP-N1-SOCS1,用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切鉴定及测序后,转染NOK细胞,采用荧光显微镜及Western blot法检测转染细胞中SOCS1蛋白的表达.结果 重组真核表达质粒pEGFP-N1-SOCS1经双酶切及测序鉴定证实构建正确.pEGFP-N1-SOCS1转染NOK细胞72 h后获得表达,SOCS1蛋白的表达量为(134.67±9.07)％,较转染空质粒组约升高4倍,二者差异有统计学意义(P=0.001).结论 成功构建了SOCS1基因真核高表达质粒,为进一步研究SOCS1的生物学功能奠定了基础.
关键词： 细胞因子信号抑制因子1 真核细胞 基因表达 NOK细胞 -
细胞因子信号抑制因子1在宫颈癌致瘤机制中的作用
目的 本研究旨在研究JAK/STAT途径的负调控因子,细胞因子信号抑制因子1(SOCS-1)在宫颈癌中的作用.方法 收集60份宫颈癌新鲜手术标本和20份非肿瘤标本,用real-time RT-PCR、Western blot和免疫组化实验分析宫颈癌不同病理阶段SOCS-1 mRNA和蛋白的表达、高危HPV感染的标本和无HPV感染的SOCS-1的表达,并与正常宫颈组织进行比较.结果 与正常组织中SOCS-1比较,58％的肿瘤组织不表达或减少表达,免疫组化检测、real-time RT-PCR和Western blot的结果一致.与未感染HPV的标本比较,高危HPV感染的标本低表达或不表达SOCS-1.结论 高危型HPV16、HPV18的感染可导致SOCS-1的转录失活,表明高危型HPV癌蛋白抑制SOCS-1的表达,意味着SOCS-1在宫颈癌发展中起重要作用.
关键词： 宫颈癌 人乳头瘤病毒 细胞因子信号抑制因子1 -
过表达SOCS1分子的树突状细胞诱导T细胞无能及其对小鼠移植物的免疫保护作用
目的 探讨过表达细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)的树突状细胞(DC)对T细胞功能的影响和对小鼠移植物的免疫保护作用及其机制.方法 通过腺病毒将SOCS1基因转入小鼠DC,观察SOCS1基因修饰DC表型及功能变化;建立小鼠同种异体胰岛移植模型,各组受体于术前24h分别输入DC、DC-SOCS1细胞或磷酸盐缓冲液(PBS),术后观察各组移植胰岛存活时间,并于术后第7天检测受体糖耐量、移植胰岛的病理学改变、脾脏及引流淋巴结内T细胞亚群及细胞因子的含量变化.结果 DC-SOCS1表诱导T细胞的增殖能力明显弱于DC(19.9％比51.1％,P＜0.05).DC-SOCS1组移植胰岛平均生存时间为(37.00±2.19)d,较空白组[(20.00±0.55)d,P=0.008]及DC组[(10.00±0.45)d,P=0.001]均显著延长.移植术后第7日,DC-SOCS1组受体较其他组对葡萄糖的耐受良好,组织学结果表明DC-SOCS1组受体胰岛移植物活性更优.DC-SOCS1组小鼠脾脏内辅助性T细胞(Th1)及细胞毒性T细胞(Tc1)的含量[(9.92±1.57)％,P=0.027]、脾脏内CD4+细胞[(17.77±2.80)％,P=0.007]、CD8+细胞[(14.92±2.18)％,P=0.004]及引流淋巴结内的CD4+淋巴细胞[(26.00±2.02)％,P=0.034]明显减少.结论 SOCS1基因抑制DC成熟,诱导T细胞无能并保护胰岛移植物.
关键词： 树突状细胞 基因转染 细胞因子信号抑制因子1 胰岛移植 免疫耐受 -
微小RNA-221通过靶基因细胞因子信号抑制因子1表达水平调控前列腺癌细胞的侵袭力
目的 观察前列腺癌细胞中微小RNA(miRNA,miR)-221的表达及其对前列腺癌细胞侵袭力的影响.方法 应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-221在前列腺正常细胞株与前列腺癌细胞株中表达的差异,利用细胞转染构建miR-221过表达和抑制细胞株,再通过细胞迁移实验检测细胞侵袭力的变化;使用荧光素酶报告实验验证miR-221与细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)基因的直接调控关系,再采用Western blot检测细胞中SOCS1基因表达水平的变化.结果 RT-qPCR检测细胞株可见miR-221在PC3、LNCaP和DU145 3种前列腺癌细胞株中表达量(6.51、7.52和8.03)均比前列腺正常细胞株表达量(12.12)低(F=235.852,P=0.000),其中两两比较差异也有统计学意义.细胞迁移实验结果显示,过表达miR-221的前列腺肿瘤细胞迁移速度显著慢于对照组(25.3 h比17.8h).荧光素酶报告实验显示,miR-221能明显抑制SOCS1-3'UTR的荧光素酶活性(P =0.006).过表达miR-221后,PC3细胞中SOCS1的蛋白表达下调(P=0.035).结论 miR-221负调控SOCS1能抑制前列腺癌细胞的迁移.
关键词： 前列腺癌 微小RNA-221 侵袭力 细胞因子信号抑制因子1 -
细胞因子信号转导抑制因子1在人肝细胞癌中的表达及临床意义
目的 观察细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达,探讨SOCS-1和HCC的临床、病理特点及术后复发的关系.方法 应用免疫组织化学技术检测SOCS-1蛋白在41例HCC癌组织、癌旁组织和11例正常肝组织中的表达;分析临床、病理资料,并对上述患者进行随访,根据HCC患者术后复发时间进行生存分析.结果 SOCS-1蛋白在HCC癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的表达阳性率分别为36.58%、65.85%和81.82%(P<0.01).SOCS-1蛋白表达强度与肿瘤病理分级呈负相关(低分化为17.39%,高分化为61.11%;转移组为12.50%,未转移组为52.00%),差异有统计学意义(P<0.01).SOCS-1蛋白表达阳、阴性组患者12月内复发率为分别为14.3%和48.1%(P<0.01).结论 SOCS-1在HCC中表达下调,SOCS-1的低表达在肝癌发生过程中发挥重要作用.SOCS-1可作为一种新的判断HCC患者术后复发和预后的指标.
关键词： 癌 肝细胞 细胞因子信号抑制因子1 预后 -
腺病毒介导的SOCS1对模拟银屑病小鼠模型的影响
目的：探讨以腺病毒为载体介导的细胞因子信号抑制因子1（SOCS1）对模拟银屑病小鼠模型（小鼠尾部鳞片表皮模型）的影响。方法制备重组腺病毒Ad-SOCS1、Ad-sh-SOCS1和Ad-EGFP ，用Western blot或荧光显微镜分析或观察这些病毒感染的小鼠肺上皮细胞（TC-1细胞）的蛋白表达。用ELISA试剂盒检测上述病毒感染 TC-1细胞后的细胞培养液和小鼠血清中的IL-6和T N F-α的浓度。观察腺病毒介导的SOCS1表达对小鼠尾部鳞片表皮模型的病理变化的影响。结果成功构建的Ad-SOCS1、Ad-sh-SOCS1和Ad-EGFP能感染TC-1细胞并能有效表达各自的基因。与Ad-sh-SOCS1和Ad-EGFP组比较，Ad-SOCS1能显著抑制小鼠血清和IFN-γ诱导培养 TC-1细胞后培养液中IL-6和TNF-α的水平（均 P＜0.01），且Ad-SOCS1能显著增加小鼠尾部鳞状上皮颗粒层的形成。结论腺病毒介导的SOCS1对小鼠尾部表皮细胞增生和角化不全有抑制作用，其机制可能与抑制前炎症因子表达、促进颗粒细胞层的形成和抑制表皮细胞的增殖有关。
关键词： 银屑病 细胞因子信号抑制因子1 腺病毒 -
SOCS1基因调控未成熟DC及其预防小鼠移植物抗宿主病的功能研究
目的 构建慢病毒干扰的树突状细胞(DC)用于预防移植物抗宿主病(GVHD).方法 通过慢病毒转染小鼠骨髓来源DC,构建过表达细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)基因的DC(DC-SOCS1).用荧光实时定量PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测慢病毒转染后的细胞SOCS1在基因和蛋白水平的表达量变化.通过脂多糖(LPS)刺激后,以流式细胞仪检测DC-SOCS1是否依然保持未成熟DC(iDC)的特性.将C57BL/6小鼠分为4组(n≥5),DC-GFP组:输注DC-GFP+异基因小鼠骨髓细胞和脾细胞;DC-SOCS1组:输注DC-SOCS1+异基因小鼠骨髓细胞和脾细胞;iDC组:输注iDC+异基因小鼠骨髓细胞和脾细胞;磷酸盐缓冲液(PBS)组:输注PBS+异基因小鼠骨髓细胞和脾细胞.输注的异基因骨髓细胞量为1×107/只,脾细胞量为2×107/只,DC-SOCS1和DC-GFP的输注量为2×106/只.通过眼静脉将指定细胞输入各组实验小鼠体内,观察小鼠体重、外周血和靶器官组织的病理学变化.以微量标本多指标流式蛋白定量技术(CBA)检测各组Th1细胞因子的分泌水平.结果 1)RT-PCR和Western blot均证实转染后DC-SOCS1细胞内SOCS1表达量明显提高,2)流式检测LPS刺激前后DC-GFP组、DC-SOCS1组和iDC组胞表面共刺激分子表达量,CD80:LPS刺激前为25.34％、23.74％、29.16％,LPS刺激后为67.92％、52.17％、82.42％;CD86:LPS刺激前为46.61％、44.77％、46.18％,LPS刺激后为:80.47％、57.11％、74.10％;MHC-Ⅱ:LPS刺激前27.61％、23.67％、22.86％,LPS刺激后为:90.33％、48.57％、94.58％.3)移植后21 d各组小鼠血细胞恢复情况,WBC(×109/L):2.18±0.32、3.37±0.37、1.12±0.05、1.48±0.20;Plt:330.83±53.04、563.25±71.76、153.27±16.97、101.00±6.01;Hb (g/L):103.83±8.24、128.00±6.19、88.14±7.45、99.75±8.16(P＜0.05).4)与DCSOCS1组小鼠相比,其他各组均有不同程度靶组织损伤表现:小肠绒毛断裂坏死,粘膜下层及肌层水肿;肺组织水肿,肺泡腔破坏以及炎性渗出;肝汇管区结构破坏,炎性细胞浸润,肝组织结构紊乱;皮肤出现表皮层水肿,胶原蛋白断裂等.结论 经慢病毒转染后的DC-SOCS1具有iDC特性并能够预防小鼠GVHD的产生.
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肿瘤微环境中IL-10限制SOCS1基因沉默的树突状细胞疫苗的抗肿瘤作用
目的 观察SOCS1基因沉默的DC疫苗对荷黑素瘤小鼠的抗肿瘤作用及肿瘤微环境中IL-10对该DC疫苗抗瘤作用的影响.方法 从小鼠股骨分离骨髓细胞,GM-CSF和IL-4联合诱导DCs分化,然后感染携带沉默SOCS1基因的Len-SOCS1-shRNA慢病毒；用TRP2抗原肽负载沉默SOCS1的DC细胞制备DC疫苗,LPS诱导成熟,流式细胞仪分析DC细胞表面MHCⅡ和CD86的表达,real-time PCR分析该DC细胞的SOCS1、IL-10和IL-12p40表达.用B16细胞或降低IL-10基因表达的B16(B16-IL-10-/-)制备荷瘤小鼠模型,瘤内注射DC疫苗(3×106/只),观察肿瘤生长和荷瘤小鼠生存期.采用不连续梯度离心法分离肿瘤浸润淋巴细胞,流式细胞仪观察CD8+T细胞的分布；并采用微量细胞毒的方法分析CTL活性.结果 Len-SOCS1-shRNA慢病毒感染DC后,可使SOCS1表达下调80％；下调SOCS1表达的DC细胞MHCⅡ和CD86表达有增加趋势,但与对照组DC相比无明显差异；下调SOCS1表达可降低DC细胞的IL-10表达,提高IL-12p40的表达.沉默SOCS1的DC疫苗对B16荷瘤小鼠的生存率没有明显影响,但可显著提高B16-IL-10-/-荷瘤小鼠的生存率(P＜0.05).下调SOCS1表达的DC疫苗不仅可提高B16-IL-10-/-荷瘤小鼠肿瘤浸润CD8+T淋巴细胞数,还可促进CD8+T细胞IFN-γ的分泌及CTL活性.结论 沉默SOCS1可提高DC疫苗的活性,但肿瘤微环境的IL-10依然是限制该DC疫苗有效发挥抗瘤作用的因素.
关键词： 细胞因子信号抑制因子1 基因沉默 树突状细胞 IL-10 -
IL-6对卵巢癌细胞SOCS1和SOCS3表达影响
目的 探讨不同浓度的白细胞介素6(IL-6)对卵巢癌SKOV3细胞株细胞因子信号抑制因子1(SOCS1)和SOCS3表达的影响.方法 不同浓度IL-6作用于卵巢癌SKOV3细胞,采用Cell Counting Kit-8、逆转录聚合酶链反应、Western blotting方法检测细胞增殖情况及细胞SOCS1和SOCS3 mRNA和蛋白的表达.结果 不同的浓度IL 6处理SKOV3细胞后,SKOV3细胞的增殖水平呈现浓度依赖性(F=3 531.369,P＜0.01).不同浓度的IL-6作用于SKOV3细胞后,SKOV3细胞SOCS1和SOCS3 mRNA和蛋白的相对表达量呈现浓度依赖性(F=6.096～261.112,P＜0.01).结论 IL-6可能通过调节卵巢癌SKOV3细胞SOCS1及SOCS3的表达,从而调控卵巢癌SKOV3细胞的增殖.
关键词： 白细胞介素6 卵巢肿瘤 细胞因子信号抑制因子1 细胞因子信号抑制因子3
