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急性肺血栓栓塞大鼠肺组织中COMT和MAO表达降低
目的 探讨急性肺血栓栓塞大鼠的肺组织中儿茶酚胺代谢相关酶类氧甲基转移酶(COMT)和单胺氧化酶(MAO)的表达变化. 方法 建立大鼠急性肺血栓栓塞模型,分别在血栓栓塞后1、8、24和48 h采取心脏穿刺法取血,用半定量RT-PCR法和Western blot法检测COMT、MAO-A及MAO-B的mRNA和蛋白表达;用HPLC法检测血清中儿茶酚胺水平. 结果 在急性肺栓塞的不同时间点,COMT、MAO-A及MAO-B的mRNA和蛋白水平均逐渐降低,而血清中肾上腺素(EPH)和去甲肾上腺素(NE)呈逐渐升高趋势. 结论 急性肺栓塞大鼠的血清儿茶酚胺水平升高源自肺组织内的降解减少.本研究部分阐明了急性肺栓塞导致肺动脉高压的分子机制.
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一个蛇苔氧甲基转移酶基因的克隆与功能鉴定
目的：克隆蛇苔氧甲基转移酶（CcOMT1）基因并对其进行功能鉴定。方法通过 RT-PCR 技术获得CcOMT1基因的cDNA全长。构建原核表达质粒 pET32a-CcOMT1，在大肠杆菌 BL21（DE3）中表达后，利用Ni-NTA吸附柱对表达的重组蛋白进行纯化，并通过体外酶活分析其活性。采用DNAMAN 7．0和MEGA 5．1软件分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析。结果克隆得到的CcOMT1开放读码框为837 bp，编码278个氨基酸，预测分子量为30．95 kDa，等电点为5．59。与来自钝鳞紫背苔、紫花苜蓿和冰叶日中花的氧甲基转移酶的同源性分别为73．18％、53．60％和44．60％。对纯化的重组蛋白进行酶活检测，结果表明融合蛋白可以催化具有邻二酚羟基的黄酮和苯丙类化合物，产生相应的氧甲基化产物，其适底物为槲皮素。结论克隆并鉴定了一个CcOMT1基因，为通过酶法实现化合物的氧甲基化修饰提供了一个候选基因。
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遗传改造刺糖多孢菌菌株生产多杀菌素J和L
目的 发展刺糖多孢菌遗传操作体系,构建生产多杀菌素J和L遗传重组菌株.方法 由于刺糖多孢菌是公认的难操作放线菌之一,本文通过λ-Red和FLP重组酶介导的体内重组体系结合黏粒文库,发展了刺糖多孢菌的高效基因操作体系.结果利用该方法实现目标基因高效敲除,测试基因敲除效率可达66％.利用该技术构建了SpnK失活的刺糖多孢菌突变菌株,HPLC-MS和NMR分析显示突变株产生的新化合物为多杀菌素J和L,且产量与出发菌株产生的多杀菌素A和D相当.结论 该策略可用于刺糖多孢菌的遗传改造,可将多杀菌素高产菌株改造后直接生产多杀菌素J和L.
