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多杀菌素的发酵工艺研究
用均匀设计法优化了多杀菌素发酵培养基的配方,同时探讨了前体物质对发酵效价的影响.结果得到优化培养基组成(g/L):葡萄糖37.8,糊精42.0,棉籽粉22.3,脱脂奶粉9.0,CaCO3 3.0.发酵30h后添加10 mmol/L的正丁醇效果佳,优化后多杀菌素的效价为394.1 μg/ml,比优化前提高了56%.
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遗传改造刺糖多孢菌菌株生产多杀菌素J和L
目的 发展刺糖多孢菌遗传操作体系,构建生产多杀菌素J和L遗传重组菌株.方法 由于刺糖多孢菌是公认的难操作放线菌之一,本文通过λ-Red和FLP重组酶介导的体内重组体系结合黏粒文库,发展了刺糖多孢菌的高效基因操作体系.结果利用该方法实现目标基因高效敲除,测试基因敲除效率可达66％.利用该技术构建了SpnK失活的刺糖多孢菌突变菌株,HPLC-MS和NMR分析显示突变株产生的新化合物为多杀菌素J和L,且产量与出发菌株产生的多杀菌素A和D相当.结论 该策略可用于刺糖多孢菌的遗传改造,可将多杀菌素高产菌株改造后直接生产多杀菌素J和L.
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多杀菌素产生菌复合诱变选育及发酵培养基优化
目的 利用诱变结合抗性筛选方法选育多杀菌素高产菌株,并通过发酵培养基优化进一步提高多杀菌素产量.方法 分别确定链霉素、安普霉素和鼠李糖3种抗性的小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),然后以S.s1-4为出发菌株,通过紫外(UV)结合链霉素、安普霉素、鼠李糖抗性因子诱变选育,在此基础上利用亚硝基胍(NTG)结合上述抗性因子诱变选育,并利用响应面实验设计对发酵培养基中葡萄糖、糊精、棉籽蛋白3种成分进行优化.结果 出发菌株经过紫外照射30s,涂布于抗性平板上,筛选得到S.s2-21,S.s2-21再用NTG处理30min,涂布于抗性平板上,终获得1株遗传性状稳定的菌株S.s3-37,产量为78.26mg/L,提高了45.71％;发酵培养基优化后,其产量达83.00mg/L.结论 利用紫外和NTG结合抗性复合诱变选育获得多杀菌素高产菌株是有效的,通过发酵培养基优化,其产量较出发菌株提高了54.55％,获得良好的效果.
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多杀菌素高产菌株的诱变选育及代谢曲线初步研究
目的 研究60Co-γ射线对刺糖多孢菌的诱变效应,期望获得性状稳定的多杀菌素高产菌株.方法 以N-19为出发菌株,通过60Co-γ射线诱变,利用摇瓶发酵结合HPLC法测定进行筛选,通过摇瓶定期取样方法研究了突变株的代谢曲线.结果 辐照剂量90Gy、120Gy刺糖多孢菌的正突变率较高;通过5轮复筛及传代验证终获得4株产量提高、性状稳定的突变株;高产突变株在摇瓶中延滞期较短且产素与生物量的增长成正相关.结论 利用60Co-γ射线辐照诱变选育是获得多杀菌素高产菌株的有效手段.
关键词： 刺糖多孢菌 多杀菌素 60Co-γ射线诱变 代谢曲线 -
多杀菌素产生菌的高通量诱变选育
目的 利用高通量筛选方法进行刺糖多孢菌诱变选育获得多杀菌素高产菌株.方法 以ASAGF73为出发菌株,通过亚硝基胍(NTG)诱变,并利用96孔板发酵培养结合快速生物测定进行高通量筛选.结果 诱变剂量为2mg/mL,诱变时间50min时突变株多杀菌素产量有较大幅度提高.通过3轮复筛验证终获得8株产量分别比出发菌株提高了43.94％、33.76％、29.41％、28.61％、27.40％、26.42％、25.59％和20.40％的突变株.结论 利用高通量筛选方法可以快速获得多杀菌素高产菌株.
