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cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变菌株的构建及鉴定
目的:构建cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变株.方法:运用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(kmR)连接到PCR扩增cagA基因两端区域产生的2个基因片段之间,并共同插人到pBluescript SKⅡ(-)载体的多克隆位点中,构建出带卡那霉素抗性标志的缺失突变载体pBs-cagA-mutant.将突变载体转化到含完整cagA基因的突变受体MEL-Hpylori 27菌株中.卡那霉素筛选出cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变株,并经PCR和DNA测序鉴定.结果:构建的突变载体经限制性内切酶酶切分析显示,产生的条带与设计结果完全一致.PCR方法扩增突变株cagA,kmR基因显示,cagA基因已被完整敲除掉,DNA测序证实筛选得到了cagA基因缺失的幽门螺杆菌突变株.连续培养25代后证实,幽门螺杆菌突变株具有良好稳定性.结论:首次成功构建出1株中国人来源的、cagA基因缺失的幽门螺杆菌突变株.
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Snail、SRF 和 E-cadherin 在人恶性脑胶质瘤中表达的临床意义
由于手术难以完全清除,对放、化疗等综合治疗不敏感,脑胶质瘤具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低的“三高一低”的特点[1]。锌指蛋白转录因子 Snail 家族,能够序列特异性地与 DNA 启动子上的 E-盒序列结合,发挥调控靶基因的作用。血清反应因子(SRF)能够促进肿瘤上皮细胞增殖、迁移和侵袭。E-cadherin 的异位表达或缺失表达能够促进SRF 的转录[2,3]。Snail、SRF 和 E-cadherin 在脑胶质瘤中表达是否具有关联性,目前尚无文献报道。本研究通过免疫组织化学染色的方法,研究其表达的临床意义,为探讨脑胶质瘤恶性侵袭机制提供一定的实验依据。