慢性重型乙型肝炎患者血清IL-23水平检测及其意义

目的 检测慢性重型乙型肝炎患者血清中IL-23表达,探讨IL-23水平与丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)及HBV DNA载量的相关性.方法 用酶联免疫吸附法(ELISA)检测50例慢性重型乙型肝炎患者(重肝组)及18名健康人(对照组)血清中IL-23表达,并与患者ALT、AST、TBil、HBV DNA载量进行相关性分析.结果 重肝组患者血清中IL-23表达高于对照组,两组之间的差异有统计学意义(P＜0.05)；IL-23水平与ALT、AST呈正相关(P＜0.05),与TBil、HBV DNA载量无相关性(P＞0.05).结论 慢性重型乙型肝炎患者血清中IL-23表达增高,与炎症程度相关,可能参与慢性重型乙型肝炎的发病.

Egr-1特异脱氧核酶调控大鼠血管平滑肌细胞Egr-1及PCNA的表达

目的 采用早期生长反应因子-1(Egr-1)特异脱氧核酶(ED5)转染大鼠主动脉平滑肌细胞,观察其对Egr-1及PCNA表达的影响,从而探讨ED5抑制血管平滑肌细胞增殖的作用机制.方法 组织块贴壁法进行血管平滑肌细胞(VSMCs)原代培养,采用形态学观察和α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,然后对VSMCs转染ED5及ED5乱序杂码寡核苷酸(EIYSSCR).实验分三组:对照组、ED5组、ED5SCR组.观察转染后Egr-1及PCNA蛋白表达情况,并分析计算各组积分光密度值大小.结果 成功完成VSMCs原代培养并转染ED5及ED5SCR.经10%胎牛血清刺激后,三组内Egr-1蛋白1 h表达强,随着时间的延长呈下降趋势;PCNA蛋白4 h开始表达,24 h到高峰,之后略呈下降趋势.与对照组及EDSSCR组相比,ED5均在一定程度上抑制了Egr-1及PCNA的表达(P<0.05).结论 ED5可以在一定程度上抑制VSMCs中Egr-1及PCNA的蛋白表达,进而抑制体外培养的VSMCs增殖,这种新的基因治疗方法将为动脉粥样硬化、再狭窄等血管增殖性疾病的治疗提供一种新的途径.

血清中五种炎症标志物在社区获得性肺炎感染与危重度评估中的价值

目的 探究C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)2种传统炎症指标和肾上腺髓质素前体(proadrenomedullin,ProADM)、高迁移率族蛋白B-1 (human high-mobility group box-1,HMGB-1)、可溶性糖基化终末产物受体(soluble receptor for advanced glycation end products,sRAGE)3种新型炎症指标在社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)感染预测和病情危险程度评估中的价值,以及各指标之间的优劣.方法 选取2015年1-12月中山大学附属第三医院呼吸内科确诊为CAP的住院患者作为病例组,共53例;按年龄、性别以2:1比例配对,选取同期中山大学附属第三医院的健康体格检查者作为对照组,共26名.同时将病例组按CURB-65评分系统分为低危组(39例)、中危组(14例).收集治疗前后血清,测定上述5种炎症标志物的水平并进行比较.结果 CRP、PCT、ProADM、sRAGE、HMGB-1炎症标志物水平,病例组治疗前分别为253.69(195.54～299.64) mg/L、0.54(0.25～1.09) μg/L、0.65(0.46～0.96) mmol/L、1006.27(782.49～1153.82) pg/ml、5.84(4.94～7.46) ng/ml;治疗后分别为6.82(3.7～8.58) mg/L、0.03(0.02～0.05) μg/L、0.41(0.25～0.68) mmol/L、658.40(507.77～793.80) pg/ml、3.04(2.48～4.18) ng/ml;对照组分别为6.24(4.97～7.27) mg/L、0.03(0.02～0.04) μg/L、0.18(0.10～0.26) mmol/L、585.23(512.93～639.66) pg/ml、2.43(1.98～2.81) ng/ml.病例组治疗前CRP、PCT、ProADM、sRAGE、HMGB-1含量均明显高于对照组,差异有统计学意义(Z值分别为5.10、4.71、1.86、2.55、3.63,P值均＜0.05).病例组治疗后ProADM、sRAGE、HMGB-1水平高于对照组,差异有统计学意义(Z值分别为2.16、1.76、1.76,P值均＜0.05).HMGB-1的受试者工作特征(receiveroperating characteristic curve,ROC)曲线下面积(area under curve,AUC)为1.00,大于PCT(0.99)、CRP(0.95)、sRAGE(0.93)、ProADM(0.85),对感染预测的价值高.对危险分级的预测价值,HMGB-1的AUC(0.84)大于PCT(0.82)、ProADM(0.82)、sRAGE(0.81)和CRP(0.54).ProADM、sRAGE、HMGB-1拟合值,具有佳的病情危险分级预测价值(AUC为0.95),此时敏感度(86％)和特异度(100％)均优于单一指标.结论 PCT、CRP、ProADM、sRAGE及HMGB-1均可以作为预测感染的指标,其中HMGB-1特异度和敏感度高.ProADM、sRAGE、HMGB-1拟合值,对CAP病情危重程度预测能力明显优于任一单一指标.

血清反应因子SRF参与RhoA诱导的人脐静脉内皮细胞肌动蛋白骨架重构

血清反应因子参与RhoA诱导的人血管内皮细胞肌动蛋白骨架重构

SRF、Slug和E-cadherin在非小细胞肺癌中表达的临床意义

1.河北省唐山市工人医院，河北唐山063000；2.河北联合大学基础医学院，河北唐山063000)
　　：目的：探讨研究血清反应因子( SRF)、锌指转录因子Slug和E-钙粘蛋白( E-cadherin)在非小细胞肺癌( NSCLC)中表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学染色法检测47例NSCLC组织中SRF、Slug和E-cadherin蛋白的表达情况。结果： SRF、Slug的阳性表达和E-cadherin的异位或缺失表达在NSCLC组织中阳性表达率分别为57.45%(27/47)、68.09%(37/47)和78.72%(37/47)，显著高于癌旁组织的10.64%、23.40%和25.53%，差异均具有显著性(P<0.05)。其中SRF蛋白表达与NSCLC分化程度、临床分期密切相关(P<0.05)；Slug蛋白表达与NSCLC分化程度、临床分期和有无淋巴结转移密切相关；有74.07%(20/27)SRF阳性表达同时伴有E-cadherin的异位表达(P<0.05)；而有96.88%(31/32)Slug阳性表达同时伴有E-cadherin的异位表达，但差异无显著性(P>0.05)。结论： SRF、Slug的阳性表达和E-cadherin的异位或缺失表达对促进NSCLC发生、发展具有重要意义，可能是NSCLC发生上皮-间质转化的重要机制之一。

法舒地尔抑制肺肌成纤维细胞分化的作用机制

目的 观察法舒地尔对大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的抑制作用.方法 培养原代新生鼠肺成纤维细胞,予以转化生长因子(TGF)-al诱导向肌成纤维细胞分化,并予以法舒地尔预处理.免疫组织化学染色法检测a-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达.免疫印迹法检测I型胶原(Col I)、血清反应因子(SRF)和a-SMA的表达.结果 免疫组织化学染色结果显示,给予TGF-a1刺激,能够显著诱导其向肌成纤维细胞分化,胞浆内出现明显的肌丝样结构.免疫印迹结果显示,与对照组比较,TGF-a1诱导组ColI、SRF和a-SMA表达显著上调,分别是对照组的6.25倍、4.50倍和3.58倍;而法舒地尔预处理组与TGF-a1诱导组比较,Col Ⅰ、SRF和a-SMA的表达量是TGF-a1诱导组的36.00％、35.56％和38.87％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 法舒地尔能够抑制TGF-a1介导的肺肌成纤维细胞分化.

Slug 和 SRF 在食管癌中的表达及临床意义

目的：研究锌指转录因子Slug和血清反应因子（ SRF）在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法收集2010年9月至2013年9月食管鳞癌手术根治标本120例，术前均未行放疗、化疗，术后常规取食管鳞癌组织包埋制备蜡块；另取距离肿瘤5 cm的食管组织60例做正常对照。按食管鳞癌诊治规范分析相关资料。所有组织蜡块常规切片三张，一份行常规HE染色，常规病理观察；另两份采用免疫组化法（ SABC ）检测Slug和SRF蛋白的表达水平，分析其与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移等临床生物学行为的关系。结果 Slug 蛋白在食管鳞癌组中的阳性表达率显著高于正常食管黏膜组，差异有统计学意义（ P ＞0?．05）；SRF蛋白在食管鳞癌组中的阳性表达率显著高于正常食管黏膜组，差异有统计学意义（ P ＜0．05）；Slug在食管鳞癌组织中的蛋白表达与肿瘤大小、分化程度、浸润深度以及淋巴结转移差异无统计学意义（ P ＞0．05）；SRF在食管鳞癌中的蛋白表达与肿瘤大小、分化程度和是否淋巴结转移无关，差异无统计学意义（ P ＞0．05）。浸润深度中，浆膜+浆膜外组表达阳性率显著高于黏膜+肌层组（ P ＜0．05）。结论 Slug、SRF在食管鳞癌中高表达，并与浸润深度相关，可能参与了食管鳞癌的发生、发展，并在食管鳞癌的侵袭中起到重要的调节作用。

Snail 和 SRF 在人恶性脑胶质瘤中的表达及其与微血管密度的关系

胶质瘤是神经系统常见肿瘤，手术和传统放化疗手段效果不佳［1］。胶质瘤的发生机制尚未完全阐明，但是目前认为肿瘤细胞获得侵袭和转移的能力，以及产生放化疗耐药能力是肿瘤复发和生存率低的分子基础［2］。本研究通过检测锌指蛋白转录因子Snail 和血清反应因子（SRF），观察二者与微血管密度（MVD）之间的关系，为探讨胶质瘤发生机制提供一定的实验依据。

Snail、SRF 和 E-cadherin 在人恶性脑胶质瘤中表达的临床意义

由于手术难以完全清除，对放、化疗等综合治疗不敏感，脑胶质瘤具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低的“三高一低”的特点［1］。锌指蛋白转录因子 Snail 家族，能够序列特异性地与 DNA 启动子上的 E-盒序列结合，发挥调控靶基因的作用。血清反应因子（SRF）能够促进肿瘤上皮细胞增殖、迁移和侵袭。E-cadherin 的异位表达或缺失表达能够促进SRF 的转录［2，3］。Snail、SRF 和 E-cadherin 在脑胶质瘤中表达是否具有关联性，目前尚无文献报道。本研究通过免疫组织化学染色的方法，研究其表达的临床意义，为探讨脑胶质瘤恶性侵袭机制提供一定的实验依据。

血清反应因子参与皮质神经元缺糖缺氧诱导坏死样凋亡的实验研究

目的 探讨血清反应因子(SRF)在皮质神经元中的定位及缺糖缺氧(OGD)再灌注损伤后神经元坏死样凋亡中的作用.方法 皮质神经元:①培养第6天,免疫荧光观察4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)核染及β3-tubulin神经元特异性标志物表达,验证培养神经元的纯度；②培养第14天,二氨基联苯胺(DAB)显色法观察SRF定位；③培养第6天,给予慢病毒(HIV病毒载体)干扰SRF表达；④培养第14天,制作OGD模型(OGD 2 h,复灌8 h),预给予广谱抗凋亡抑制剂(zVAD-fmk)20 μmol·L-1 30 min.将细胞分为:正常对照组(对照组)；OGD/zVAD-fmk/SRF慢病毒阴性对照组(OZ组)；ODG/zVAD-fmk/SRF慢病毒阳性组(OZ+组).经比色法、Western blot等方法观察SRF蛋白和乳酸脱氢酶(LDH)水平的变化.结果 SRF在神经元中定位于细胞核；经SRF干扰后OZ+组SRF蛋白水平下调(P＜0.05)；不同处理组神经元分泌LDH水平与SRF蛋白水平变化一致(P＜0.05).结论 SRF参与皮质神经元缺血/再灌注损伤后神经元坏死样凋亡,定位于胞核.

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对矽肺大鼠肌成纤维细胞分化的调节

目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对矽肺模型大鼠肺内肌成纤维细胞分化的调节作用.方法 采用非暴露武气管SiO2 (50 g· L-1)灌注法复制大鼠矽肺模型,60只Wistar大鼠随机分为对照4 wk组、对照8 wk组、模型4wk组、模型8wk组、AcSDKP治疗组(塑模4 wk后给予AcSDKP 800 μg·kg-1至8 wk)和AcSDKP预防治疗组(先给予AcSDKP 800 μg·kg-1·d-1,48 h后制模,维持治疗至8wk),每组10只.羟脯氨酸测量法定量分析肺组织中总胶原蛋白的含量,免疫组织化学法、Western blot检测肺组织内血清反应因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达.结果 与同时点对照组相比,模型组大鼠肺组织内胶原含量和SRF、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增加(P＜0.05).分别与模型4wk和8 wk组相比,AcSDKP治疗组和预防治疗组大鼠肺组织内胶原含量和SRF、α-SMA以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达均明显降低(P＜0.05).结论 AcSDKP可能通过抑制矽肺大鼠肺内肌成纤维细胞的分化,减少其胶原的合成与分泌,进而发挥抗矽肺纤维化的作用.

三元复合因子Net对c-fos基因转录的调节作用

Net是三元复合因子家族中的一员,是一种重要的转录调节因子,尤其对原癌基因c-fos的转录具有重要的调节作用,而c-fos基因与细胞的增殖、分化以及某些肿瘤的发生密切相关.c-fos启动子是Net的调节靶点,Net在c-fos启动子的血清反应元件上与血清反应因子结成三元复合体,从而实现其调节功能;且随着细胞内生物环境不同,其表现的调节功能亦不同.

血清反应因子参与RhoA诱导的人血管内皮细胞肌动蛋白骨架重构

为进一步阐明RhoA调控人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)肌动蛋白骨架重构的分子机制,用逆转录病毒感染并筛选出稳定表达持续活化型RhoA(Q63LRhoA)和主导抑制型RhoA(T19NRhoA)的HUVECs.应用免疫组化和Western blot方法分析去血清前后HUVECs血清反应因子(serum response factor,SRF)的表达及定位,Rhodamine-Phalloidine染色观察F-actin动态变化.结果显示,Q63LRhoA组细胞核中SRF表达增加,F-actin重排形成大量应力纤维;T19NRhoA组中SRF表达较弱,F-actin无明显改变,无应力纤维形成.去血清后,正常HUVECs(对照组)和感染细胞中SRF的表达均显著增加,但其亚细胞定位明显不同.对照组去血清培养3 d,SRF主要定位在细胞核,去血清培养5 d,SRF出核转位入细胞浆.Q63LRhoA组SRF发生核滞留,不随去血清培养时间延长发生出核转位现象.T19NRhoA组SRF的表达主要定位于细胞核周.对照组去血清培养3 d,F-actin表达增加,同时形成大量应力纤维,去血清培养5 d,细胞F-actin表达下调,应力纤维解聚.Q63LRhoA组F-actin重构持续发生并形成大量应力纤维,但不随去血清培养时间延长发生明显解聚.而T19NRhoA组F-actin表达不随去血清时间延长而增加.上述结果提示,RhoA介导HUVECs F-actin的重构与SRF的核转位现象密切相关.

血清反应因子在心血管疾病中的作用

血清反应因子（serum response factor，SRF）属于MADS转录因子家族的成员之一，是高度保守且广泛表达的转录因子。SRF在成年或发育期的心肌组织中均有表达，主要与下游靶基因启动子上特定DNA序列CArG盒[血清反应元件（SRE）的组成部分，CC（A/T）6GG box]结合，调控抗凋亡或促细胞增殖等基因（如IEGs：c-fos、mcl-1、Egr-1）的表达，对外界因素（如：缺血、缺氧等）刺激表现出快速的基因响应，影响心肌细胞的发育、分化、增殖及凋亡[1-2]。许多辅助转录调节因子蛋白（co-activator/co-repressor，如TCF家族成员Elk-1和MRTFs家族等）与SRF/SRE发生相互作用，激活与心肌分化、增殖及凋亡相关基因的转录。因此，对SRF-CArG box依赖基因转录的调控，是影响心肌凋亡/生存的关键因素之一[3]。另外，研究表明skeletal a-actin、b-MHC、car原diac a-actin、MLC-2v、dystrophin等收缩类蛋白[4-6]及非收缩类蛋白，诸如参与心脏功能的ANF、肌质网Ca-ATPase（SERCA2）、Na+/Ca2+交换离子通道 NCX1[7-8]均为SRF依赖的基因。由此可见，SRF在调控收缩蛋白基因和收缩功能器官的重要作用充分说明SRF在心脏功能中发挥着重要的调控作用。

血清反应因子全长及N端片段过表达慢病毒载体的构建及其对心脏干细胞分化的影响

目的 探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stemcell,CSC)分化的影响.方法 从cDNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3 FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定.将SRF-Full及SRF-N过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒.磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+ CSC,将SRF-Full及SRF-N过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRNA水平的变化.结果 成功扩增出SRF-Full及SRF-N编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误.将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108 TU/mL的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白.重组慢病毒感染CSC后细胞核中见eGFP信号.TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(Nkx2.5、Gata4、cTnI)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(vWF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-N则抑制这种分化.结论 成功构建SRF-Full及SRF-N过表达重组慢病毒质粒.SRF-Full促进而SRF-N减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化.

不同胚期B6-Co小鼠眼睑组织中血清反应因子的表达变化

背景 C57BL/6角膜混浊表型的突变系(B6-Co)小鼠具有出生眼睑闭合不全(EOB)表型,是研究眼睑发育机制的良好动物模型.探讨血清反应因子(SRF)与B6-Co小鼠EOB表型形成的关系可为人类先天性眼睑发育缺陷产生机制的研究提供理论依据.目的 检测SRF在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达.方法 采用肌内注射戊巴比妥钠安乐死术,分别剖取B6-Co母鼠以及表型正常B6母鼠体内胚胎期(E)16.5 d、E17.5 d和E18.5 d小鼠各9只,分离眼睑组织,分别采用实时定量PCR法和Western blot法检测小鼠眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的相对表达水平.取各胎龄的B6-Co小鼠和B6小鼠制作组织冰冻切片,利用免疫荧光技术检测并比较2种小鼠SRF在眼睑组织中的定位和表达强度.结果 B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF mRNA的相对表达水平分别为0.41±0.06和0.24±0.17,明显低于B6小鼠的1.03±0.17和1.01±0.09,差异均有统计学意义(P=0.025、0.017);B6-Co小鼠E16.5 d和E17.5 d眼睑组织中SRF蛋白的表达水平分别为0.08±0.01和0.08±0.01,明显低于B6小鼠的0.12±0.03和0.13 ±0.02,差异均有统计学意义(P=0.036、0.024);而2种小鼠间E18.5 d时眼睑组织中SRF mRNA及其蛋白的表达量差异均无统计学意义(P=0.387、0.774).免疫荧光染色显示,SRF蛋白多表达于B6-Co小鼠和B6小鼠眼睑组织的角质层细胞,但B6-Co小鼠眼睑角质形成细胞中SRF蛋白表达的荧光强度明显弱于B6小鼠.结论 SRF在B6-Co小鼠眼睑组织中的表达量明显下调,SRF可能参与眼睑发育缺陷的发生过程.

血清反应因子在神经再生中的作用

血清反应因子（SRF）是一种高度保守且广泛存在于多种生物体内的转录因子。SRF 早被发现于 c-fos原癌基因中，近年来 SRF 被发现在神经再生中有重要作用，SRF 能够调节细胞骨架，调整线粒体的动力学，改善神经再生的环境，与胶质细胞产生的抑制性因子结合介导 c-fos 立即早期基因反应。本研究主要探讨 SRF在神经修复中的不同的作用与机制，并对其进行综述。

Ac-SDKP对ROCK通路介导矽肺大鼠肌成纤维细胞分化抑制作用

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路介导的肌成纤维细胞分化的抑制作用.方法 无特定病原体级建康成年雄性Wistar大鼠120只随机分为对照组(支气管灌注1 ml灭菌生理氯化钠溶液)、矽肺模型组[支气管灌注质量浓度为50 g/L二氧化硅(SiO2)1 ml]、Ac-SDKP前处理组(支气管灌注质量浓度为50 g/L SiO2 1 ml,灌注前给予Ac-SDKP),分别于染尘后1、2、4、8周处死(每亚组10只).采用免疫组织化学法检测肺组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布与表达,免疫印迹法检测肺组织内转化生长因子-β1 (TGF-β1)、ROCK、血清反应因子(SRF)、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 与对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增加(P＜0.05),并具有一定时间依赖性.与矽肺模型组比较,Ac-SDKP前处理4、8周组,大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均降低(P＜0.05).结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑矽肺大鼠肌成纤维细胞的分化.

人血清反应因子基因的原核表达及鸡卵黄多克隆抗体的制备

目的 在原核系统中表达人血清反应因子(serum response factor,SRF)基因,制备鸡卵黄抗SRF抗体并鉴定其特性.方法 构建SRF表达载体PGEX-T-2-SRF,并在大肠杆菌中以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达.表达产物经谷胱甘肽-S转移酶(glutathione-S-transferase,GST)亲和层析柱纯化后,用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)进行鉴定.用纯化的SRF免疫海蓝白母鸡,制备鸡抗SRF抗体.抗体的效价及特异性用蛋白质印迹技术进行测定和分析,免疫荧光鉴定其在心肌细胞中的定位.结果 构建的重组质粒PGEX-4T-2-SRF在大肠杆菌中得到高表达,诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清液中,纯化的SRF经SDS-PAGE鉴定呈单一条带.以纯化的SRF免疫制备了鸡抗SRF抗体.蛋白质印迹技术结果表明,该抗体可与原核表达的SRF特异性结合,抗体效价为1:5000.免疫荧光证实该抗体可以和心肌细胞的细胞核特异性结合.结论 在原核细胞中表达了SRF制备的鸡抗SRF的抗体对SRF能进行特异性结合.