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大鼠肝纤维化组织内ROCK-Ⅰ、磷酸化MBS Thr-697和α-SMA表达增强
目的 探讨ROCK-Ⅰ、磷酸化MBS Thr-697、α-SMA蛋白及其mRNA在实验性大鼠肝纤维化形成过程中的动态表达及肌动蛋白细胞骨架的变化.方法 结扎胆总管制备肝纤维化模型,用免疫组织化学、Western blot与RT-PCR检测ROCK-Ⅰ、α-SMA蛋白及其mRNA的表达,用特异性荧光染色检测肌动蛋白细胞骨架.结果 随着肝纤维化的发展,大鼠肝脏中ROCK-Ⅰ及α-SMA阳性细胞明显增多;造模1～4周,肝组织ROCK-Ⅰ、α-SMA的阳性面积及ROCK-Ⅰ、磷酸化MBS Thr-697、α-SMA蛋白表达显著高于正常组(P<0.05);ROCK-Ⅰ基因表达与α-SMA表达呈正相关(r=0.718,P<0.05);随着造模时间延长,肝组织肌动蛋白荧光信号增强.结论 ROCK-Ⅰ在肝纤维化发生过程中表达上调和功能活化,可能通过诱导肌成纤维细胞表型形成而参与肝纤维化的发生.
关键词： 肝纤维化 Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 细胞骨架 -
法舒地尔抑制大鼠肝纤维化组织ROCK-Ⅰ、α-SMA、p-MBS Thr-697表达
目的 探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)-Ⅰ选择性阻断剂法舒地尔对大鼠肝纤维化组织ROCK-Ⅰ、α-SMA和p-MBS Thr-697表达及细胞骨架变化的影响.方法 应用Western blot方法测定肝组织ROCK-Ⅰ、α-SMA和p-MBSThr-697表达,RT-PCR方法测定肝组织ROCK-Ⅰ和α-SMA mRNA表达,特异性免疫荧光方法检测细胞骨架变化.结果 ①Western blot结果显示,胆总管结扎(bile ductligation,BDL)+法舒地尔腹腔注射组造模第4周ROCK-Ⅰ蛋白、p-MBSThr-697蛋白和α-SMA蛋白与BDL组相比分别降低了38.68%、30.69%和20.50%.②RT-PCR结果显示,BDL+法舒地尔腹腔注射组造模第4周ROCK-Ⅰ mRNA和α-SMA mRNA与BDL组相比分别降低了32.39%和34.46%.③FITC标记的鬼笔毒环肽荧光染色结果显示,BDL+法舒地尔腹腔注射组与BDL组相比,可见大鼠肝组织细胞间网状结构稍规则,周边肌动蛋白丝带连续,荧光信号减弱.结论 ROCK-Ⅰ选择性阻断剂法舒地尔可抑制BDL大鼠模型肝组织ROCK-Ⅰ、p-MBS Thr-697和α-SMA转录及翻译水平表达,可部分抑制BDL大鼠肝组织F-actin重构.
关键词： 法舒地尔 肝纤维化 细胞骨架 Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 -
Rho/ROCK2通路在阿尔茨海默病病理进程中的重要作用
Rho/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）通路是生物体中广泛存在的经典信号通路，参与多种生理调节过程。ROCK有2种亚型，即ROCK1和ROCK2。在阿尔茨海默病（AD）患者脑中，Rho/ROCK2表现为活性上调，并伴有Aβ42水平升高，以及神经细胞突起的形态与功能异常，推测AD的发生、发展与Rho或ROCK2的高表达或过度激活有关。目前Rho/ROCK2通路被认为是预防和治疗AD的一个有效的靶通路，而Rho或ROCK2，也成为药物研发的重要靶点。研究发现，降低Rho或ROCK2的表达，或者抑制Rho或ROCK2的活性均可减少Aβ42诱导的神经毒性，保护神经元，减缓AD的发展。因此，Rho/ROCK2的特异性抑制对中枢神经损伤修复及AD的治疗有重要的意义。为此，本文针对Rho/ROCK2通路在阿尔茨海默病发展中的作用做一综述。
关键词： Rho Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 阿尔茨海默病 抑制剂 -
法舒地尔抑制肺肌成纤维细胞分化的作用机制
目的 观察法舒地尔对大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的抑制作用.方法 培养原代新生鼠肺成纤维细胞,予以转化生长因子(TGF)-al诱导向肌成纤维细胞分化,并予以法舒地尔预处理.免疫组织化学染色法检测a-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达.免疫印迹法检测I型胶原(Col I)、血清反应因子(SRF)和a-SMA的表达.结果 免疫组织化学染色结果显示,给予TGF-a1刺激,能够显著诱导其向肌成纤维细胞分化,胞浆内出现明显的肌丝样结构.免疫印迹结果显示,与对照组比较,TGF-a1诱导组ColI、SRF和a-SMA表达显著上调,分别是对照组的6.25倍、4.50倍和3.58倍;而法舒地尔预处理组与TGF-a1诱导组比较,Col Ⅰ、SRF和a-SMA的表达量是TGF-a1诱导组的36.00％、35.56％和38.87％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 法舒地尔能够抑制TGF-a1介导的肺肌成纤维细胞分化.
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PDGF/ROCK通路在AcSDKP抑制大鼠矽肺纤维化形成中的作用
目的:探讨血小板源性生长因子/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(PDGF/ROCK)通路在肺纤维化发病机制中的作用以及N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)能否通过对PDGF/ROCK的调节而发挥抗矽肺纤维化作用.方法:采用非暴露式气管二氧化硅混悬液灌注法制备大鼠矽肺模型.60只SPF级健康成年Wistar大鼠随机分为模型对照4周组、模型对照8周组、矽肺模型4周组、矽肺模型8周组、AcSDKP治疗组和AcSDKP预防治疗组,每组10只.免疫组织化学染色法检测各组大鼠肺组织中phospho-PDGFR-β的表达与分布,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PDGFR-β、phospho-PDGR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:与相应模型对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织中α-SMA、PDGFR-β、phospho-PDGFR-β、ROCK以及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05);形态学检测可见较多的phospho-PDGFR-β阳性表达细胞分布在矽结节与间质纤维化区域.与矽肺模型4周组和模型8周组比较,AcSDKP治疗组和预防治疗组大鼠肺组织中α-SMA、PDGF-β、phospho-PDGFR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05);免疫组织化学染色,phospho-PDGFR-β蛋白表达明显减少.结论:PDGF介导的ROCK信号转导通路可能通过促进大鼠肌成纤维细胞转化而促进矽肺大鼠肺组织中的胶原合成,进而促进矽肺纤维化的形成.AcSDKP可能通过PDGF/ROCK通路抑制矽肺大鼠肺内肌成纤维细胞的分化,减少其胶原的合成与分泌,进而发挥抗矽肺纤维化的作用.
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ROCK抑制剂Y-27632对TGF-β1介导的A549细胞上皮—间质转化的抑制作用
目的 探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y-27632对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的A549细胞上皮一间质转化(EMT)的抑制作用.方法 将常规培养并传代的非小细胞肺癌A549细胞分为3组,分别为对照组、TGF-β1组(用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT)、Y-27632组(对发生EMT的A549细胞行Y-27632干预).采用MTr法检测各组细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;免疫细胞化学染色法检测波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(ot-SMA)表达;Western blot法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、α-SMA、ROCK、血清应答因子(SRF)、心肌相关转录因子(MATF-A)表达.结果 与对照组比较,TGF-β1组能诱导A549细胞发生EMT,伴有迁移能力提高、E-钙黏蛋白表达下调,以及波形蛋白、α-SMA、ROCK、SRF、MATF-A表达上调(P均＜0.05);Y-27632组能显著抑制上述变化(P均＜0.05).结论 Y-27632能通过阻断ROCK蛋白表达,抑制TGF-β1介导的A549细胞发生EMT,并抑制其迁移能力.
关键词： 肺肿瘤 Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 转化生长因子 上皮—间质转化 -
宫颈癌组织中MMP-2、TIMP-1和Rock-2的表达及相互关系的研究
目的 探讨MMP-2、TIMP-1和Rock-2在宫颈鳞癌中的表达特点及其相互关系. 方法 选取活检病例中已诊断为宫颈鳞癌,且资料完整的60例标本(2006-2008年),采用SABC免疫组织化学方法,检测60例宫颈鳞癌组织以及正常宫颈黏膜MMP-2、TIMP-1和Rock-2的表达情况. 结果 Rock-2和MMP-2的表达与宫颈鳞癌的病理分级及临床分期呈正相关,而且二者的表达强弱呈显著正相关,而TIMP-1的表达与宫颈鳞癌的病理分级及临床分期呈负相关,与Rock-2和MMP-2的表达强弱呈显著负相关. 结论 MMP-2、TIMP-1和Rock-2在宫颈鳞癌的发生以及侵袭、转移中发挥着重要作用,MMP-2可能是Rho/Rock信号转导通路促进肿瘤转移和侵袭的下游分子,而TIMP-1可能通过抑制MMP-2来阻碍肿瘤转移和侵袭.
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Ac-SDKP对ROCK通路介导矽肺大鼠肌成纤维细胞分化抑制作用
目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路介导的肌成纤维细胞分化的抑制作用.方法 无特定病原体级建康成年雄性Wistar大鼠120只随机分为对照组(支气管灌注1 ml灭菌生理氯化钠溶液)、矽肺模型组[支气管灌注质量浓度为50 g/L二氧化硅(SiO2)1 ml]、Ac-SDKP前处理组(支气管灌注质量浓度为50 g/L SiO2 1 ml,灌注前给予Ac-SDKP),分别于染尘后1、2、4、8周处死(每亚组10只).采用免疫组织化学法检测肺组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布与表达,免疫印迹法检测肺组织内转化生长因子-β1 (TGF-β1)、ROCK、血清反应因子(SRF)、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 与对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增加(P＜0.05),并具有一定时间依赖性.与矽肺模型组比较,Ac-SDKP前处理4、8周组,大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均降低(P＜0.05).结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑矽肺大鼠肌成纤维细胞的分化.
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ROCK在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响
目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase,ROCK)在人卵巢癌组织中的表达及其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响.方法:免疫组化SP法检测ROCK在80例人卵巢上皮性肿瘤中的表达.用ROCK抑制剂Fasudil处理SKOV3细胞,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞凋亡水平,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3 (cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)活性,Western blot检测凋亡相关蛋白p53表达,比较不同浓度Fasudil对细胞增殖、细胞凋亡、caspase-3活性以及凋亡相关蛋白表达的影响.结果:ROCK在恶性卵巢上皮性肿瘤的阳性表达明显高于良性肿瘤(x2=20.961,P=0.000),在晚期上皮性卵巢癌组织中其表达高于早期肿瘤(x2=16.675,P=0.000).不同浓度Fasudil处理组SKOV3细胞24 h增殖抑制率和凋亡率均明显高于未加药组(F=402.537,P=0.000;F=124.251,P=0.000),并均随药物浓度增加而逐渐升高,且Fasudil呈浓度依赖性地增强caspase-3 活性(F=32.423,P=0.000)和p53蛋白的表达(F=31.599,P=0.000).结论:ROCK在卵巢癌组织中有较高表达,可能在卵巢癌细胞增殖和凋亡抑制中扮演一定角色.
关键词： 卵巢癌 Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 增殖 凋亡 -
pGV141-ROCK2真核表达载体的构建及其在血管内皮细胞中的表达
目的:克隆人Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)基因,构建pGV141-ROCK2真核表达载体,并观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)中的表达.方法:以RT-PCR的方法获得ROCK2基因的CDS区,经XhoI、KpnI双酶切后,连接到pGV141载体中;将构建的pGV141-ROCK2真核表达载体,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将其转染入HUVEC-C中;采用western blot法检测转染后HUVEC-C中ROCK2蛋白的表达情况.结果:PCR法、双酶切法检测到的目标条带与目的条带大小一致,测序结果显示重组质粒中插入的ROCK2基因序列与GenBank编码上的编码区完全一致;与未转染重组质粒的HUVEC-C比较,转染pGV141-ROCK2载体的HUVECC中ROCK2蛋白的表达显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建pGV141-ROCK2真核表达载体,体外转染人HUVEC-C后可使ROCK2蛋白表达显著增加.
关键词： 质粒 载体 内皮细胞 Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 -
ROCK1蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义
目的:研究食管鳞癌组织中Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)表达水平,探讨其在食管鳞癌组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组化S-P法检测60例食管鳞癌标本中ROCK1的表达及分布情况,结合患者的年龄、性别、分期、转移情况,了解ROCK1蛋白表达情况与不同患者临床参数之间的关系.结果:食管鳞癌组织中ROCK1蛋白表达明显高于正常食管组织,ROCK1蛋白在分期较晚及有转移的患者中较高表达,并具有统计学意义(P＜0.05).结论:食管鳞癌组织中,ROCK1蛋白的表达高低与肿瘤的浸润和转移密切相关.
关键词： Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 食管鳞癌 免疫组化 -
膀胱癌组织中Rock-2和MMP-2的表达及相互关系的研究
目的 探讨Rock-2和MMP-2在膀胱移行细胞癌中的表达特点及其相互关系.方法 选取活检病例中已诊断为膀胱移行细胞癌65例标本(2004-2007年),采用SABC免疫组织化学方法,检测65例膀胱癌组织以及正常膀胱黏膜Rock-2和MMP-2的表达情况.结果 正常膀胱黏膜中,Rock-2和MMP-2均为阴性表达.Rock-2和MMP-2 的表达与移行细胞癌的病理分级及临床分期呈正相关,而且二者的表达强弱呈显著的正相关.结论 Rock-2 和MMP-2在膀胱移行细胞癌的发生以及侵袭、转移中发挥着重要作用,MMP-2可能是Rho /Rock信号转导通路促进肿瘤转移和侵袭的下游分子.
