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镉对鸡脾淋巴细胞膜ATP酶活力的影响
镉是一种广泛广、蓄积性强的有毒重金属污染物,半衰期较长.随着现代工业的迅猛发展,镉污染的问题已日益严重.镉吸收入血后可迅速与血浆白蛋白等成分结合,并随血流分布到各器官,对人和动物具有多器官组织、细胞毒性[1].
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某养血口服液改善缺铁性贫血的实验评价
为评价某养血口服液改善动物营养性贫血的作用,采用实验性缺铁性贫血模型大鼠观察对血液细胞学、血液生化学指标的影响.试验结果表明实验期间各组动物体重增加,3个剂量组的血红蛋白、血清铁、血清铁蛋白和HCT、MCV、MCH及MCHC均明显高于阴性对照组(P＜0.05,P＜0.01),红细胞内游离原卟啉含量明显低于阴性对照组(P＜0.05,P＜0.01),由此可见受试物具有改善动物营养性贫血的作用.
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某口服液促进泌乳作用的人体试食试验研究
为了解我国传统配方口服液促进乳汁分泌的保健作用,对70例缺乳志愿者进行了人体试食观察.每日服用以白毛乌骨鸡、猪蹄为主要原料的口服液,日服3次,每次1支,每支10 mL,连续15 d.结果表明试食者乳房胀度增加,其有效率为73.5%;泌乳量的增长值为39.8±28.0 mL;有16人从混合喂养转变为全母乳喂养,转变率为48.5%;对照组和试食组比较,差异有极显著性 (P<0.01).对乳汁蛋白的含量无影响,对试食者健康无损害.本试验结果显示,该保健食品有促进泌乳作用.
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北京地区牛、羊肉片中鸭、鸡、猪源性成分调查
目的 建立生肉制品中鸭、鸡、猪源性成分的荧光PCR检测方法,对北京地区出售的牛、羊肉片进行成分调查.方法合成检测鸭、鸡、猪源性成分的特异性引物和探针,建立实时荧光PCR检测方法,测定方法的特异性、灵敏度,在北京部分超市、农贸市场、餐馆采集牛、羊肉片进行成分调查.结果 所建立的实时荧光PCR方法对鸭、鸡、猪源性成分具有较好特异性,与常见食用肉类DNA在Ct 30以内无交叉反应;对混合肉中鸭、鸡、猪成分DNA的检出限是0.1％.北京市场上采集的86份牛、羊肉片中,30份检出上述成分,占34.9％;羊肉片的掺假率高于牛肉片;农贸市场采集样品掺假率明显高于超市和餐馆.结论 所建生肉制品中鸭、鸡、猪源性成分的检测方法简单、特异,对样品的检测结果显示,北京市售牛、羊肉中存在掺入鸭、鸡、猪肉的现象.
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市售鸡肉中沙门菌分离株多重耐药谱测定
为了解我国市售鸡肉中沙门茵多重耐药状况及耐药程度,对国家食源性疾病监测网从市售鸡肉中分离到的51株沙门茵进行耐药检测,并对多重耐药谱进行分析.利用NCCLS(NationalCommittee of Clinical Laboratory Standard)推荐的纸片法进行耐药检测,51株分离菌株全部对至少3种以上的抗生素耐药,属多重耐药株,耐5种抗生素的9株(17.6%),耐6～9种抗生素的12株(23.5%),耐10种以上抗生素的9株(17.6%).51株沙门菌对万古霉素、红霉素、苯唑西林都具有耐药性(100%),对其它抗生素的耐药情况是:萘啶酮酸(52.9%)、磺胺(35.3%)、链霉素(33.3%)、四环素(29.4%)、氨苄青霉素(23.5%)、羧苄西林(21.6%)、阿莫西林(19.6%)、吡拉西林(19.6%)、美唑西林(17.6%)、强力霉素(17.6%)、氯霉素(13.7)和头孢噻吩(9.8%).有3株菌对庆大霉素耐药,有2株菌对丁胺卡那霉素和甲氧苄胺嘧啶耐药,有1株茵对复方新诺明耐药.分离出1株耐15种抗生素的鼠伤寒沙门菌,其耐药谱与超级耐药鼠伤寒沙门菌DT104的耐药谱类似.从8省市市售鸡肉中分离的51株沙门菌均为多重耐药株,提示我国畜牧养殖业在使用抗生素方面存在严重问题,应加强对饲料添加剂使用的安全性管理,合理使用抗生素.
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健康鸡共生的产质粒型AmpC型β-内酰胺酶大肠埃希菌流行情况和酶基因型别的研究
健康动物肠道共生的大肠埃希菌是人类和动物条件致病菌,随着β-内酰胺类抗生素在临床及畜牧养殖行业的大量应用,大肠埃希菌耐药菌逐渐增加,共生的大肠埃希菌可以引起或通过携带的耐药基因传播给致病性更强的菌株,从而引起动物和人类的相关感染,因此研究产质粒型AmpC型β-内酰胺酶大肠埃希菌流行情况具有一定的实用价值,本研究主要分析质粒型bla_(AmpC)在健康鸡共生的大肠埃希菌中的流行情况及其基因型别.
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检测沙门菌的微量半固体氯化镁孔雀绿可能数方法研究
目的 改良检测沙门菌的微量半固体氯化镁孔雀绿可能数(mini-MSRV MPN)方法.方法 在mini-MSRV MPN方法的基础上,将缓冲蛋白胨水(BPW)改为一步增菌液,MSRV培养基改为改良MSRV培养基,进行沙门菌加标回收试验.分别采集154份生鸡肉、48份鸡舍环境涂抹物和48份鸡粪样品,对比分析改良mini-MSRV MPN法、mini-MSRV MPN法和常规大可能数(MPN)方法检出沙门菌的情况.结果 改良mini-MSRV MPN方法加标回收试验结果:0.9 CFU/g加标菌量组回收菌量均＜2.7 MPN/g;9.0、90.0 CFU/g加标菌量组平均回收菌量分别为10.1、94.0 MPN/g,平均回收率分别为112％ 、104％.改良mini-MSRV MPN方法、mini-MSRV MPN方法和常规MPN方法沙门菌检出率分别为18.4％ (46/250)、5.2％ (13/250)和6.0％ (15/250),改良mini-MSRV MPN方法检出率高于其他两种方法(x2值分别为19.68和17.82,P值均＜0.05)；检出沙门菌的量(中位数)分别为21.0、＜2.7、＜3.0 MPN/g,改良mini-MSRV MPN方法检出沙门菌的量(中位数)高于其他两种方法(Z值均为5.71,P值均＜0.05).结论 改良mini-MSRV MPN方法可以对食源性沙门菌进行准确检测.
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痛风宁颗粒对实验性鸡痛风性关节炎的影响
目的探讨痛风宁颗粒对鸡痛风性关节炎症的作用.方法采用100 d龄蛋鸡,在产蛋日龄前喂以产蛋高峰期的高核蛋白、高钙饲料,并限制进水量,诱发鸡痛风性关节炎,并以别嘌呤醇、丙磺舒、小苏打、舒风宁作为对照药,对比观察痛风宁颗粒对鸡痛风性关节炎关节肿胀及关节腔滑液白细胞计数的影响.结果痛风宁颗粒用药后,病鸡的跗踝关节肿胀明显消退,关节腔白细胞计数显著下降,其作用与舒风宁相当,优于小苏打、丙磺舒、别嘌呤醇.结论痛风宁颗粒可以明显抑制痛风性关节炎的炎症反应.
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不同糖皮质激素诱导鸡股骨头坏死的实验研究
目的:观察甲泼尼龙琥珀酸钠与地塞米松对鸡股骨头坏死发生的影响.方法:健康来航鸡36只,随机分成正常组(A组)、甲泼尼龙小剂量组(B组)、甲泼尼龙大剂量组(C组)、地塞米松小剂量加马血清组(D组)、地塞米松中剂量加马血清组(E组)、地塞米松大剂量组(F组),共6组,每组6只.分别于第6、12周翼下静脉采血,检测血清总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL);在实验12周取股骨头,行HE染色,光镜下计数空骨陷窝率,观察其病理学改变.结果:与正常组相比,在第6周,C、F组CHO升高(P<0.05),B、C、E组TG升高(P<0.05),而B、C、E组HDL降低;在第12周,B、C、E、F组动物血TG、CHO均升高(P<0.05),C、D、E组动物血HDL降低(P<0.05),多数实验鸡血清内LDL未能检出.在第12周,C、E组股骨头空骨陷窝明显高于正常组(P<0.05),并出现较典型骨坏死病理学改变.结论:甲泼尼龙琥珀酸钠较地塞米松更易诱导鸡早期股骨头坏死的发生,而血脂代谢紊乱可能是激素引起该股骨头坏死的重要病理基础.
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鸡实验性骨折愈合过程TGF-β1 免疫组织化学研究
目的探索鸡实验性骨折愈合过程中骨折局部TGF-β1及其含量变化.方法 16只6月龄新罗曼母鸡,无菌手术条件下制造右肱骨中部一致性骨折模型,取骨折局部3、6、10和15 d的组织材料,采用SABC法对TGF-β1进行检测. 结果 SABC染色显示骨折后3 d,TGF-β1阳性物出现于血肿的细胞中;6 d TGF-β1阳性反应出现在结缔组织细胞膜上、胶原纤维和细胞外基质中;10 d、15 d TGF-β1阳性物存在于软骨细胞外基质,与骨折后3 d相比,6 d、10 d、15 d TGF-β1的分布明显增加(P＜0.01). 结论 TGF-β1的表达与鸡骨折愈合过程密切相关.
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单色光对鸡视网膜节细胞密度和大小的影响
目的 研究单色光对鸡视网膜节细胞(RGCs)分布的影响.方法 采用二极管光(light-emitting diodes,LED)灯作为光源,将60只刚出壳的雄性从肉鸡分别饲养在红(660nm)、绿(560nm)、蓝(480nm)和白光(400～760nm)照下49d(n=15),光照强度15 lux,光照制度23h:1h(L:D).取两侧视网膜分别做Nissl染色和DiI标记RGCs,利用图像分析法观察视网膜面积、RCCs细胞密度与大小的变化.结果 蓝、绿光组视网膜面积、RGCs细胞总数显著高于红、白光组(10.35%和17.07%,P<0.05);绿光组RGCs平均细胞密度比其他光组高14.61%(P<0.05);绿光组视网膜中央区(CA)的RGCs密度高,显著高于蓝光组28.91%(P<0.05),其CA/NP的比值比其他光组高29.71%(P<0.05);蓝光组CA的RGCs胞体面积小,颞侧周边区(TP)和鼻侧周边区(NP)的胞体大,其TP/CA的比值比其他光组高26.65%(P<0.05)且与其他光组相比差异显著(P<0.05).结论 蓝、绿光可使视网膜面积、RGCs细胞总数增加;从视网膜的中央区到周边部,绿光组的RGCs密度梯度下降幅度和蓝光组的RGCs大小梯度增大幅度明显.
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母鸡输卵管蛋白分泌部交感节后神经元支配的逆行追踪研究
目的探明支配母鸡输卵管蛋白分泌部的交感节后神经元位置. 方法将CB-HRP注入蛋白分泌部壁内,进行逆行追踪研究. 结果交感节后神经元的胞体位于双侧C12～LS13交感干神经节、内脏神经节和肾上腺神经节,在交感链上标记细胞形成两个相对集中分布区,分别位于T5～LS2和LS8～LS11.肠神经直肠段出现大量标记细胞.T5～T7、LS10～LS12髓节的腹前核出现少量标记细胞,而在Terni柱未见标记细胞. 结论虽然鸡输卵管仅左侧发育成熟,但接受双侧交感神经的支配;蛋白分泌部还接受肠神经的支配,其性质未定;脊髓Terni柱内无长突型交感节前神经元直接伸达蛋白分泌部.
关键词： 交感神经 输卵管蛋白分泌部 CB-HRP逆行追踪 鸡 -
鸡肠神经胶质细胞超微结构特征及钙结合蛋白S100β在小肠中的分布
目的 观察10只健康黄羽肉鸡肠神经胶质细胞(EGCs)结构特征及钙结合蛋白S100β(S100β)蛋白在鸡小肠的分布特点,为探讨鸡肠神经胶质细胞的形态学特征提供实验依据.方法 采用透射电子显微镜技术观察神经胶质细胞的超微结构特点,免疫组织化学SABC-AP法研究S100β蛋白的分布特征.结果 电子显微镜下观察表明,鸡肠神经胶质细胞在小肠各段均呈星形,形态上属于星形胶质细胞,细胞核不规则,胞质中分布有大小不一的圆形或椭圆形无髓神经纤维.免疫组织化学显示,S100β在鸡小肠各段黏膜上皮细胞、肠腺表达较强,其中上皮细胞基膜和肠腺上皮细胞顶端为强阳性,固有膜为阴性,在黏膜下神经丛和肌间神经丛均呈强阳性表达.结论 鸡肠神经胶质细胞属于星形胶质细胞,其在小肠的分布较为广泛,除具有营养、保护神经节细胞的功能外,可能还参与调节肠腺细胞分泌及黏膜免疫屏障功能.
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鸡胚活体原位电转基因技术报告基因绿色荧光蛋白质量评估
目的 在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况.方法 活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒转入带壳培养第3天和第3天去壳培养至第5天的鸡胚,在电转基因24h后荧光体视显微镜观察,选择对照组和阳性表达胚胎,每组各5个胚胎,冷冻切片后进行荧光免疫组织化学检测α-SMA和NF分别在脊髓和视顶部位的表达状况.结果 在脊髓和视顶不同发育阶段和转染的不同时间,实验组、对照组及GFP阳性表达区域和正常区域内α-SMA、NF两种蛋白表达不存在差异,胚胎形态结构也不存在差异.结论 原位电转GFP在鸡胚发育早期过程中不影响正常基因的表达及鸡胚胎发育形态结构的变化,可以作为报告基因.
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鸡胚发育过程中音猬因子超表达对Pax家族基因表达的影响
目的 探讨鸡胚发育过程中,音猬因子(Shh)基因在脊髓中超表达后对配对框(Pax)基因家族Pax3、Pax6以及Pax7蛋白表达的影响.方法 在鸡胚龄2.5 ～3.0d(E2.5 ～ E3)时,实验组利用鸡胚脊髓活体电转基因技术将携带Shh基因的质粒和携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒共转入鸡胚脊髓,对照组则只转入报告基因质粒.E4时取材,每组至少取3例,冷冻切片后采用原位杂交技术检测Shh基因的mRNA表达水平,利用荧光免疫技术检测Shh在鸡胚脊髓中超表达后对Pax3,Pax6以及Pax7蛋白表达水平的影响,并将对照组及实验组中3种基因在脊髓两侧的表达量进行统计学分析.结果 原位杂交结果表明,E4时Shh的mRNA主要表达在脊髓底板和脊索,实验组结果显示,利用鸡胚脊髓活体电转技术成功建立了Shh超表达模型.对照组中荧光免疫结果表明,Pax3主要表达于脊髓翼板、生肌节、背根以及背根神经节;Pax6主要表达于跨越翼板和基板的脊髓中间部位;Pax7则主要均匀表达于翼板、顶板和生肌节.Shh超表达后,脊髓转染侧与未转染侧相比Pax3、Pax6以及Pax7的表达量差异极显著(P＜0.01),这3种基因在脊髓中的表达均被抑制.结论 在鸡胚发育过程中,Pax家族Pax3、Pax6以及Pax7 3种基因在鸡胚脊髓中具有不同的表达模式,Shh超表达后对其均具有明显的抑制作用,显示这3种Pax基因受Shh信号通路调控.
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双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射研究方法的建立
目的 建立1种双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射的实验方法.方法 鸡胚孵育至胚龄2.5～3d,通过鸡胚活体原位电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒(pCAGGS-GFP)准确注射到鸡胚脊髓腔,实现定时、定位活体电转基因.转染后继续孵育至6d,取GFP阳性表达的胚胎,部分做脊髓横向切片,部分利用open-book技术将脊髓展开观察连合纤维的发育情况,每组至少取3个标本.其后在脊髓非转染侧连合神经元所在之处,点状注射DiI乙醇溶液,封片后于4℃避光孵育3d,在荧光显微镜下观察脊髓连合纤维投射情况.结果 脊髓横切及open-book结果显示,鸡胚脊髓GFP阳性转染侧的神经元轴突穿过底板投射到脊髓对侧;同时在open-book结果中还可观察到,转染侧轴突穿过底板后分别沿腹索和外侧索向头尾部投射;DiI标记的非转染侧连合神经元轴突也同样穿过底板投射到对侧,并在侧索白质内延伸.结论 本实验成功建立了1种双色荧光示踪鸡胚脊髓两侧连合纤维投射的研究方法,为研究脊髓神经发育提供技术保障.
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新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白的可溶性超表达与免疫活性检测
目的 检测新城疫病毒(NDV)血凝素一神经氨酸酶(HN)蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量,及其免疫活性.方法 采用融合表达的方法将HN蛋白基因分别与Grifin、谷胱甘肽S移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、Nus A、小泛素样相关修饰物(SUMO)、硫氧还蛋白(thioredoxin)、蛋白G(protein G)、γ-晶状体蛋白(γ-crystallin)、Ars C、Ppi B 10种融合标签基因采用柔性接头进行连接,构建10个重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,将这10个重组质粒分别转入大肠杆菌BL21中,用不同条件进行诱导表达,经SDS-PAGE检测并选出佳诱导蛋白表达的条件,筛选出能够显著促进HN蛋白可溶性表达的标签,并用Western blotting对所表达蛋白的含量进行定性分析,同时纯化的重组蛋白用Western blotting和间接ELISA验证其免疫原性.结果 成功构建了10个不同融合标签的HN融合蛋白表达载体,筛选出融合标签麦芽糖结合蛋白(MBP)能够显著促进HN蛋白可溶性表达,且Western blotting显示所表达重组蛋白的表达量是多的.经Western blotting和间接ELISA验证重组HN蛋白具有良好的免疫原性.结论 融合标签MBP可以显著提高HN蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量.
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中药多糖对柔嫩艾美尔球虫感染鸡细胞因子水平的影响
本文选用天然免疫活性多糖-香菇(Lentinus edodes)、银耳(Tremella fuciformis Berk)和黄芪(Astragalus membranaceus Bge)多糖,研究其对柔嫩艾美尔球虫感染鸡细胞因子IFN-γ和IL-2水平的影响.选择180只雏鸡并将其随机分为9组:3个多糖提取物添加组(LenE、TreE和AstE),3个添加提取物并免疫接种疫苗组(LenE+V、TreE+V和AstE+V),1个球虫免疫组和2个对照组(球虫感染组和非感染组).检测球虫感染后第7、14天鸡血清IFN-γ效价和脾淋巴细胞IL-2的水平.结果显示,球虫感染后第7、14天,添加多糖提取物并疫苗免疫组的血清IFN-γ效价显著高于单纯疫苗组(P＜0.01).然而,单纯提取物添加组与单纯疫苗组之间没有显著差异.3种多糖提取物相比,感染第7天后,AstE组的IFN-γ效价高,而TreE+V组的IFN-γ的效价显著高于LenE+V组和AstE+V组.脾脏细胞IL-2产量与血清IFN-γ效价的表现基本一致.感染后第7天,提取物加疫苗免疫组的平均IL-2水平显著(P＜0.01)高于单纯疫苗组,提取物添加组的平均IL-2水平与单纯疫苗组之间没有显著差异.感染第14天后,多糖提取物添加组及多糖提取物加疫苗组的平均IL-2水平都与单纯疫苗组没有显著差异.IL-2产量在不同多糖提取物添加组间没有显著差异.本实验结果表明,多糖提取物抗球虫作用可能与刺激免疫细胞分泌IFN-γ和IL-2等细胞因子、提高T-细胞免疫应答有关;中药免疫活性多糖对球虫感染鸡有很好的免疫保护作用,当多糖与疫苗一起使用时,效果尤为明显.
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鸡柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子表面抗原MZ5-7基因的克隆、表位分析及原核表达
用RT-PCR的方法,从感染柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)第5天的鸡盲肠分离的第二代裂殖子中克隆出MZ5-7基因,并进行抗原表位分析和原核表达,结果表明,MZ5-7基因ORF为945 bp,与GenBank里已知序列(登录号为L08257)比较核甘酸和氨基酸同源性均为99.9%.应用DNAStar软件对该基因的抗原表位进行了分析,发现其B细胞表位广泛分布在80～300区域,其中80～130区域、190～220区域和300～320区域更为突出,而T细胞基序则集中在123～190区域和220～300区域.根据MZ5-7基因序列重新设计一对引物,PCR方法扩增出不含信号肽长度为885 bp的基因序列,克隆到pET28b获得重组质粒pET28b-MZ亚,转入宿主菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,表达的融合蛋白约36.5 kDa 10-pound note,符合目的蛋白大小;同时应用Western blot方法与抗第二代裂殖子和子孢子的2种高免血清反应,结果表明抗裂殖子和子孢子血清均能识别MZP(裂殖子蛋白,MZP,merozoite protein).
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5株柔嫩艾美耳球虫对4种抗球虫药的抗药性
试验选择260只19日龄雏鸡,随机分成26组,每组10只,研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)南京株、凤阳株、扬州株、宣城株和蒙城株对地克珠利(Diclazuril)、马杜霉素(Maduramicin)、氯羟吡啶(Clopidol)、氯苯胍(Robenidine)的抗药性.每株球虫均设4个感染用药组、1个感染不用药组,另外设1个不感染不用药组.以POAA、RLS、ROP、ACI作为指标,判定5株球虫对4种药物的抗药性.结果表明凤阳株、扬州株和蒙城株分别仅对马杜霉素、氯苯胍、地克珠利敏感,南京株和宣城株对该4种药物均已产生不同程度的抗药性.提示目前在凤阳、扬州和蒙城地区可分别合理地使用马杜霉素、氯苯胍和地克珠利,对其它药物须减少或暂停使用.
