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急性脊髓损伤小鼠体内循环平滑肌祖细胞升高
目的 建立两种检测外周血平滑肌祖细胞(SMPCs)的绝对计数方法,评估了方法的观察者内和观察者间差异及初步应用.方法 小鼠眼眶取血样本经抗体孵育后使用“裂解/一次洗涤法”处理,流式细胞仪检测.SMPCs定义为c-kit阴性/CD140b阳性/lineage阴性/sca-1阳性.SMPCs计算方法包括“微球法”和“流式直接体积法”.分别在采血后0、24和48 h后进行检测.SCI模型使用Allen's打击装置造模,检测伤后24 h的SMPCs.结果 微球法和直接体积法的观察者内可靠系数分别是0.947和0.839;观察者间可靠系数分别是0.911和0.768.SMPCs在血液样本中不稳定,静置24和48 h后丢失较多.SCI后24h,SMPCs的数量较正常组和假手术组明显升高.结论 建立了两种SMPCs绝对计数法,有较好的观察者内一致性和观察者间一致性.应用两种方法能够有效的检测到小鼠SCI后SMPCs的升高,为探讨其变化的意义提供了方法和依据.
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流式细胞术单平台法检测HIV/AIDS个体血液淋巴细胞免疫表型时影响因素的研究
T淋巴细胞亚群的免疫分型能够提供人类获得性免疫功能缺陷综合征(AIDS)患者免疫状态的重要信息,作为人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的主要靶细胞,CD4+T细胞首先被感染,其数量随着进程不断减少.现认为,随着CD4+T细胞计数的不断下降,患者临床综合征的严重程度将不断加深.因此,对于HIV感染的人群,定期监测CD4+T的绝对数可以了解他们的免疫状态.HIV感染使CD4+T淋巴细胞减少的同时,CD8+细胞计数在感染早期和慢性感染过程中明显升高,感染晚期降至与正常人相当的水平.整个感染过程中,CD8+T细胞发生异常的免疫激活,与病毒复制程度高度相关,可以反映病毒的活跃程度,预示疾病的进展,对临床实践具有重要的指导意义和实用价值,是判断疾病进展的辅助指标 [1,2].目前,应用流式细胞仪测定全血中T细胞亚群有两种方法,其一为多平台法,它包括三项实验室技术[3].另一种为单平台法[4,5],即应用三色、四色流式试剂盒配以TruCOUNT计数管,加上全自动的Multiset获取和分析软件,一步即可获得T细胞亚群的相对数(百分比)和绝对数,因此,较为简便和实用省时.过去,对多平台法实验过程中的影响因素研究较多,本研究对可能影响单平台法实验结果的因素进行了探讨,现将结果报道如下.
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单平台与双平台流式细胞术T细胞亚群绝对计数的比较
目的 寻找基于CYTOMICS FC500流式细胞仪(简称CYTOMICS FC500)的相对稳定、经济的外周血T细胞亚群绝对计数方法.方法 分别用基于CYTOMICS FC500的双平台和单平台流式细胞术(FCM)同时检测280例患者外周血T细胞亚群的绝对值,比较2种方法结果的相关性和一致性;评价高值和低值样本用2种方法检测的批内和批间精密度.结果 双平台与单平台FCM T细胞亚群绝对计数结果的相关性好(r≥0.984),但存在明显差异(P＜0.01),双平台FCM检测的CD4+CD8-(CD4+)T细胞绝对值比单平台FCM平均低36.5(-71.8,114.7)个/μL,差异百分比为8.7％(-13.8％,31.2％);双平台FCM检测的CD4-CD8+(CD8+)T细胞绝对值比单平台FCM平均低41.4(-84.4,167.2)个/μL,差异百分比为8.7％(-13.9％,31.3％);双平台FCM检测的CD4-CD8-T细胞(DNT)和CD4+CD8+T细胞(DPT)绝对值也均低于单平台FCM.双平台FCM检测CD4+T细胞、CD8+T细胞、DNT、DPT绝对值高值和低值的批内变异系数(Cv)分别为3.5％和4.2％、3.8％和3.4％、6.1％和7.6％、9.5％和18.7％,批间CV分别为5.1％和5.9％、5.5％和5.1％、7.7％和9.6％、12.2％和24.6％,低于单平台FCM检测各T细胞亚群绝对值高值和低值的批内CV(4.0％和4.8％、4.2％和4.0％、6.7％和8.6％、11.1％和21.4％)和批间CV(6.3％和7.5％、7.0％和6.8％、8.5％和10.3％、13.6％和26.4％).结论 基于CYTOMICS FC500的双平台和单平台FCM外周血T细胞亚群绝对计数结果差异较大,不宜在同一时间段内交替使用,其中双平台FCM精密度更高,且能节约成本,可优先选择.
