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长臂光敏生物素和光敏地高辛核酸探针检测医学真菌灵敏度的比较研究
建立应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针杂交.检测真菌的方法, 并比较二者检测临床常见医学真菌的敏感性.设计并合成医学真菌通用引物, 用PCR扩增白色念珠菌标准株的核糖体RNA基因, 用长臂光敏生物素或光敏地高辛标记其纯化的扩增产物制备成相应的核酸探针, 然后用上述两种探针对标本中的PCR扩增产物进行Southern杂交, 检测医学真菌.通过用白色念珠菌感染大鼠, 建立念珠菌病的实验动物模型, 验证血培养法、PCR法和PCR扩增结合Southern杂交, 检测真菌的敏感性.结果表明,这两种核酸探针可分别与白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种真菌杂交呈阳性结果; 与临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA杂交结果为阴性.利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增结合长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度, 实验证明后者的敏感性高.总之, 应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针与标本PCR扩增物杂交, 检测上述真菌既特异和敏感, 又不需放射性同位素.光敏地高辛核酸探针检测医学真菌的灵敏度略高于长臂光敏生物素核酸探针.
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幽门螺杆菌cagA基因探针的制备与临床应用
目的 研究cagA+Hp(幽门螺杆菌)与胃肠道疾病的关系,并探讨长臂光敏生物素标记的cagA基因探针的临床意义. 方法 构建含cagA基因片段的重组质粒克隆株,以重组质粒DNA为模板PCR扩增cagA基因片段用长臂光敏生物素标记产物DNA,对病人进行基因探针检测及PCR、尿酶试纸检测. 结果 浅表性胃炎、深度胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、慢性萎缩性胃炎及胃癌病人的检测结果是:尿酶检测阳性百分率为:70.3、72.2、77.7、69.2、25;PCR阳性百分率分别为:59.2、77.8、71.4、70.7、75、78;基因探针杂交检测阳性率分别为:48.1、61.1、70.3、70.7、66.7、66.6、72.2. 结论 cagA是胃、十二指肠疾病严重程度的标志,长臂光敏生物素标记的cagA基因探针具有特异性强、灵敏度高的特点,为临床检验中Hp强毒株分型检测的有效方法.
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应用长臂光敏生物素核酸探针检测医学真菌的研究
[目的]建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法.[方法]首先合成医学真菌通用引物,用PCR扩增白色念珠菌18S rRNA基因,用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针,然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southem杂交检测医学真菌.通过用白色念珠菌感染人鼠,建立念珠菌病的实验动物模型,验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性.[结果]通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种医学常见真菌的18S rRNA基因,扩增片段长度为621～687bp.此引物只扩增真菌DNA,不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA.利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southem杂交法检测真菌血症的灵敏度,实验证明后者的敏感性高.[结论]本方法快速、敏感、不需放射性同位素,有较好的临床应用前景.
