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抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用
目的 制备和鉴定抗肌红蛋白(Mb)单克隆抗体,为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础.方法 用人肌红蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA方法筛选,有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞株.ELISA法测定小鼠腹水滴度,CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定.结果 筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水滴度为1∶5×104 ～ 1∶2×105.通过配对实验,有5株抗体6种组合可以成功配对.这5株抗体的亲和常数为6.46×108 ～ 3.68×109 L/mol.用5株抗体所建立的6种化学免疫分析方法与人Hb交叉反应率为7.434×103％ ～2.904×10-2％,与人ALB交叉反应率为4.980×10-7％ ～3.830×10-5％.用Mb17B6与Mb21E8两株抗体建立的CLIA标准曲线的线性系数为0.997,灵敏度为6.02ng/mL.结论 成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白单克隆抗体.
关键词： 肌红蛋白 单克隆抗体 酶促化学发光免疫分析 酶联免疫分析 -
促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立
目的 建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法.方法 引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法.结果 方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01％ ～5.40％,批间变异系数为2.96％ ～ 17.9％,回收率为90.6％ ～ 114.4％,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性.结论 生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景.
关键词： 促甲状腺激素 链亲和素化酶 生物素-亲和素系统 鲁米诺 酶促化学发光免疫分析 -
酶促化学发光免疫分析检测梅毒抗体的临床应用评价
目的 以梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)为标准参考方法,采用ROC曲线分析,判断酶促化学发光免疫分析(CLIA)对梅毒抗体检测的应用价值. 方法 回顾性分析218例CLIA检测梅毒抗体阳性血清及100例阴性血清及其与TPPA结果进行比对,采用SPSS19.0统计软件进行ROC曲线分析. 结果 ROC曲线分析曲线下面积0.942,在S/CAO=7.22时,CLIA检测梅毒抗体的灵敏度96％,特异性88.2％. 结论 CLIA检测梅毒抗体具有较好的灵敏度与特异性,适用于输血或手术前的大批量筛查.
关键词： 梅毒螺旋体 酶促化学发光免疫分析 明胶颗粒凝集试验 ROC曲线 -
促卵泡激素酶促化学发光免疫分析试剂盒的研制
采用双抗体夹心法建立了测定人血清FSH酶促化学发光免疫分析方法.本方法的测量范围为1.5～100 IU/L,灵敏度为0.36 IU/L,批内变异系数为1.0%～1.6%,批间变异系数为4.0%～4.6%,回收率为90.6%～117.8%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.990.与TSH的交叉率<0.23%,与LH和HCG的交叉率分别<0.16%和<0.27%.与贝克曼化学发光免疫分析方法测定的临床值进行比较,相关性方程为y=0.85x-0.03,相关系数r=0.954.与免疫放射分析试剂盒进行比较,相关性方程为y=0.97x+5.29,相关系数r=0.965,与放射免疫分析试剂盒,进行比较,相关性方程为y=0.95x-3.82,相关系数r=0.954.方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求.
关键词： 促卵泡激素(FSH) 单克隆抗体 酶促化学发光免疫分析 放射免疫分析 -
促黄体生成激素酶促化学发光免疫分析方法的建立
采用双抗体夹心一步检测法和鲁米诺-过氧化氢发光体系建立了血清促黄体生成激素(LH)的酶促化学发光免疫分析方法.结果显示,本方法测量范围为1.5～200 IU/L,灵敏度为0.08 IU/L,批内变异系数＜9%,批间变异系数＜11%,回收率为96.3%～112.1%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.995.与进口酶促化学发光免疫分析试剂盒测定的临床值进行比较,线性相关方程为y=0.967x+0.068 9,相关系数r=0.975,相关性良好.方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求.
关键词： 促黄体生成激素 酶促化学发光免疫分析 分析方法
