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二氯亚甲基二膦酸盐-明胶微粒治疗模型大鼠免疫性血小板减少性紫癜
目的 二氯亚甲基二膦酸盐(Cl2MDP)通过明胶微粒负载靶向免疫性血小板减少性紫癜(ITP)模型的肝脾巨噬细胞,以杀伤巨噬细胞或降低其免疫活性达到治疗ITP的目的. 方法 抗血小板血清150μL每24 h注射1次建立SD大鼠ITP模型,其血小板计数于实验期间能维持在低于50×109 L-1的病理水平.静脉注射Cl2MDP-明胶微粒,以血小板计数和出血时间为指标观察疗效,并观察药物对巨噬细胞的作用. 结果 Cl2MDP-明胶微粒以剂量依赖关系迅速、有效地升高模型血小板计数到平均约180×109 L-1的水平,并维持血小板计数在生理水平不再下降.电镜下可见巨噬细胞变性、坏死等病变.此外,预先注射Cl2MDP-明胶微粒的SD大鼠可避免发生抗血小板血清引起的ITP. 结论 Cl2MDP-明胶微粒静脉注射后可以有效提高ITP模型的血小板数量至生理水平,这种靶向巨噬细胞的药物输送技术可为治疗ITP提供一种新的方法.
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靶向肝脾巨噬细胞治疗血小板减少性紫癜的实验研究
本研究制备兔抗鼠血小板血清以建立SD大鼠免疫性血小板减少性紫癜(ITP)模型,使用明胶微粒装载二氯亚甲基二膦酸(Cl2MDP),并将药物导向模型的肝脾巨噬细胞内以杀伤巨噬细胞或降低其免疫活性,以期达到治疗ITP的目的.每24小时重复注射1次抗血小板血清150μl,所建立的SD大鼠的ITP模型中,血小板计数于实验期间能维持在低于50×109/L的病理水平.用Cl2MDP-明胶微粒进行巨噬细胞株RAW264.7的MTT试验及模型的实验性治疗,以治疗前后的血小板计数和出血时间作为疗效的观察指标.结果表明:Cl2MDP-明胶微粒呈剂量依赖关系抑制体外培养的巨噬细胞的增殖并可迅速、有效地升高模型鼠血小板的数量,平均达180×109/L水平,并能维持血小板计数在生理范围内而不下降.此外,预先注射Cl2MDP-明胶微粒的SD大鼠可避免抗血小板血清引起的血小板计数降低.结论:Cl2MDP-明胶微粒静脉注射可以有效地提高SD大鼠ITP模型的血小板数量,达到避免发生出血的安全水平.这种靶向巨噬细胞的药物输送技术为ITP的治疗提供了一种新的治疗理念和方法,值得进一步深入研究.
关键词： 免疫性血小板减少性紫癜 二氯亚甲基二膦酸盐 明胶微粒 巨噬细胞 靶向治疗 -
99Tcm-Cl2MDP-明胶微粒的制备及其肝脾靶向性研究
目的研究粒径300～500 nm、表面带正电荷的明胶微粒对二氯亚甲基二膦酸盐(Cl2MDP)的包封技术,并观察明胶微粒和载药明胶微粒在SD大鼠体内的分布.方法通过静电吸附将Cl2MDP连接到明胶微粒表面完成药物包封.用99Tcm标记,进行SD大鼠生物学分布实验和显像,观察明胶微粒和Cl2MDP-明胶微粒的组织靶向特性.结果通过静电吸附法可将Cl2MDP连接到明胶微粒表面,其药物包封效率约为20%,大载药量达6 mg/mg明胶微粒;生物学分布实验和放射性核素显像示其具有较好的肝脾靶向性,可将Cl2MDP定向输送到巨噬细胞,肝脾的摄取超过注射量的60%.结论该明胶微粒具有良好的肝脾网状内皮系统靶向性,是较理想的以肝脾巨噬细胞为作用靶点的药物靶向输送载体;明胶微粒通过静电吸附的方法包封Cl2MDP简便可行,具有较高的药物包封效率和载药量.
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004.含远缘链球菌GTF的生物附着性D,L-乳酸乙交脂微粒的免疫应答
[英]/Smith DJ…∥Oral Microbiol Immunol.-2000,15.-124～130本实验通过鼻内、胃肠道或皮下途径给予一种有生物附着性的多聚D,L-乳酸乙交脂(PLGA)GTF微粒,观察其诱导的免疫应答.材料和方法 GTF源于远缘链球菌株6715,经分离培养、亲和层析、FPLC液相层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化而得.PLGA(W/W为75/25)复合体经凝胶渗透层析测定分子量.微粒由10%远缘链球菌GTF和1%明胶与PLGA干混后经高压提炼而成.选鼠龄45d的SD大鼠作研究对象,鼻内免疫组和胃肠免疫组给予GTF明胶/PLGA微粒、PLGA/明胶微粒或GTF明矾,初次免疫4周,每周1次共4次,再次免疫3周,每周1次共3次.皮下注射组在唾液腺附近进针,给予GTF/明胶微粒/PLGA或GTF明矾,共2次.初次免疫后第1、3、7、11周和再次免疫后第1、3、7周分别取尾静脉血和唾液,ELISA测量血清IgG和唾液IgA抗体水平.结果体外实验表明2 h后GTF从PLGA微粒中释放至大值,此时释放的GTF活性占总量的26%.远缘链球菌GTF诱导的唾液IgA抗体水平在鼻内注射后第28天后明显升高.6只鼠中的5只在鼻内给予GTF/明胶/PLGA微粒诱导唾液IgA抗体产生,该鼻内组平均唾液IgA抗体水平是其他胃肠组或皮下组的30倍,并且初次免疫后至少维持10周,仍然显著高于其他组.再次免疫后抗体水平更高,超过初次免疫的抗体峰值后持续约42d.而血清IgG,皮下注射2组诱导的IgG抗体水平均较高.在鼻内给予GTF微粒后,6只鼠中的4只初次免疫后第4周血清IgG抗体水平明显升高,再次免疫后血清IgG抗体水平升高超过10倍,与皮下注射2组水平相近,并且整个实验中,持续该高水平.讨论采用压缩、提取和研磨等技术使GTF进入PLGA微粒中,该制备程序并不影响GTF结构,GTF微粒诱导的免疫包括对某些构象依赖的抗原决定簇的免疫应答.体外实验表明GTF与PLGA结合后酶活性释放仅1/3,故粘膜免疫中PLGA微粒较明矾的GTF剂量高3倍,但微粒中的GTF并不会全部释放出来.本实验中皮下注射PLGA-GTF微粒比皮下注射GTF明矾(前者GTF是后者3倍)诱导的血清和唾液抗体水平均较低,间接表明鼻内注射组中PLGA-GTF微粒释放的GTF水平并不高于可溶性GTF即GTF明矾.鼻内给予PLGA-GTF微粒诱导的IgA抗体水平远远高于其他途径,也较GTF明矾高,这可能是由于肠较鼻/扁桃区域抗原易稀释或快速裂解,隔室现象的程度也可能导致该差异,因为鼻/扁桃体诱导IgA抗体水平较肠相关淋巴组织高,后者更利于诱导抗体在肠的表达.微粒的生物附着性使GTF微粒与粘膜表面接触时间增长,从而使抗原更有效诱导局部免疫应答.鼻内注射GTF-PLGA微粒再次免疫诱导的IgA抗体水平极高,甚至超过初次免疫峰值持续约42 d.说明反复鼻内给予适当抗原诱导免疫应答是可行的.在粘膜或系统途径中鼻内注射GTF生物活性微粒诱导了高和为持久的唾液免疫反应,有希望成为诱导粘膜免疫的又一种有效途径.[陈舟摘刘天佳校]
